【正文】 )。下表同。Note: In the same ranks, the capitals mean significant level. the same as below. 改良 MS 對‘云霞’百合試管鱗莖生長的影響表 3 改良 MS 濃度對‘云霞’百合試管鱗莖鱗生長的影響Table 3 The effects of macroelement concentration on the growth of ‘Yunxia’ Lily bulblets in vitro濃度 g/L1Concentration初始鱗莖鮮重mgFresh weight per bulblet鱗莖直徑cmDiameter of bulblet鱗莖鮮重mgFresh weight per bulblet鱗莖增大倍數(shù)Multiple bulblets swelling1/2MS 177。 177。 177。 MS（ CK） 177。 177。 177。 177。 177。 177。 2MS 177。 177。 177。 14由表 3 可見，改良 MS 濃度高于標(biāo)準(zhǔn)濃度 MS 時，有利于鱗莖的膨大，且隨著改良 MS 濃度的增加，鱗莖的直徑和鮮重增加，在 2 MS 時形成的鱗莖最大，最大直徑達(dá) ，平均直徑為 ，平均鮮重為 ，分別是對照的 和 倍，其增大倍數(shù)是處理前的 倍，但是，改良 MS 濃度﹥MS 時，鱗莖生長情況也隨著改良 MS 濃度的增加，鱗莖的畸形比率也增高，而且培養(yǎng)出的試管鱗莖抱合不緊密，嚴(yán)重影響了試管鱗莖的質(zhì)量。而改良 MS 濃度為 1/2MS 時，試管鱗莖增長緩慢，規(guī)律性不強(qiáng)。因此，高濃度的改良 MS 可以促進(jìn)鱗莖的膨大，但是過高的改良 MS 也會導(dǎo)致百合試管鱗莖畸形的比率（附圖 3）。 討論百合試管鱗莖結(jié)球技術(shù)是百合工廠化生產(chǎn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而其膨大的因素又跟鱗莖本身種類、外植體、激素種類、蔗糖濃度、改良 MS 等均有關(guān)系，尤其是本試驗(yàn)材料為省農(nóng)科院花卉研究所自育新品種云霞 ，應(yīng)重新驗(yàn)證其對激素、蔗糖濃度以及改良 MS 的需要量。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明：蔗糖濃度對隨著蔗糖濃度的增加，試管鱗莖的膨大率也相應(yīng)增大，這與張延龍 [9]、張潔 [11]等研究結(jié)果相一致。在本試驗(yàn)條件下，不含蔗糖的培養(yǎng)基組合中，鱗莖幾乎不會生長，這與趙海濤 [41]所報道的，在黑暗條件下不含蔗糖的培養(yǎng)中幾乎沒有鱗莖形成。同時，Yoshiji 在對 L. rubellum 研究中也得到了相同的結(jié)論。蔗糖濃度在 120g/L 時生成的鱗莖鮮重最大，但畸形嚴(yán)重，濃度在 90 g/L時鱗莖重量也較大，但同樣有比較嚴(yán)重的畸形，只有蔗糖濃度在 30g/L 和 60g/L 時鱗莖形狀接近于正常，本試驗(yàn)結(jié)果是蔗糖濃度在 60g/L 時，可有效促進(jìn)云霞 試管鱗莖快速膨大，這與廉美蘭 [90]等所報道的 90g/L 可促進(jìn)試管鱗莖快速膨大相異。張延龍 [9]等報道，說明低質(zhì)量濃度的 NAA 有利于提高結(jié)鱗莖率。本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示：較低濃度的 NAA 更有利于試管鱗莖的膨大，其中在 NAA 濃度為 ，對試管鱗莖的膨大最有利。此結(jié)果與張延龍 [9]等的研究所報道的最適濃度為 。這可能是與試管鱗莖的大小、品種有關(guān)。張延龍等 [9]報道，隨著改良 MS 濃度的增加，鱗莖的直徑和鮮重增加，2 MS 時結(jié)鱗莖效果最好，結(jié)鱗莖率為 100%，增大倍數(shù)為 。這是因?yàn)樵嚬荀[莖在不斷膨大過程中需要大量養(yǎng)分，而加倍的改良 MS 可以為鱗莖提供足夠的營養(yǎng)物質(zhì)，從而促進(jìn)鱗莖的形成和膨大。趙海濤 [41]研究結(jié)果表明，在黑暗條件下，不同改良 MS 含量的培養(yǎng)基中，生成鱗莖的數(shù)量無顯著性差異。1/2MS 培養(yǎng)基中鱗莖重量顯著減少，直徑也變成最小。2MS 培養(yǎng)基中鱗莖的鮮重和直徑顯著高于其它處理。其研究發(fā)現(xiàn)，152MS 培養(yǎng)基雖然能促進(jìn)鱗莖增重，但是所形成的鱗莖畸形率較高。因此，在生產(chǎn)中建議使用 MS 基本培養(yǎng)基。張潔 [11]等研究結(jié)果表明，改良 MS 濃度高于對照濃度MS 時，有利于鱗莖的膨大，且隨著改良 MS 濃度的增加，鱗莖鮮重增加。在 3MS時形成的鱗莖最大，平均鮮重達(dá) g，增大倍數(shù)為 倍，分別為對照的 倍和 倍。然而，高濃度的改良 MS 不利于鱗莖的誘導(dǎo)， 3MS 時鱗莖形成率下降到 %。當(dāng)改良 MS 濃度低于對照濃度 MS 時，則不利于鱗莖的誘導(dǎo)和膨大。 1/2 MS 時鱗莖形成率僅 %，鱗莖增大倍數(shù)也低于對照。說明高濃度改良 MS 不利于鱗莖的誘導(dǎo)，但對鱗莖的膨大有促進(jìn)作用；而改良 MS 濃量過低則對鱗莖的誘導(dǎo)和膨大均有不良影響。在本試驗(yàn)研究條件下，研究結(jié)果表明，高濃度改良 MS 具有促進(jìn)試管鱗莖增重的作用，這與張延龍 [9]研究結(jié)果相一致，但是本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，大于MS 的培養(yǎng)基中所生產(chǎn)的試管鱗莖品質(zhì)低下，畸形率高，因此，在生產(chǎn)中建議使用MS 基本培養(yǎng)基。3 不同貯藏溫度、時間對‘云霞’百合試管鱗莖田間萌發(fā)的影響。 試驗(yàn)材料試驗(yàn)在省農(nóng)科院花卉育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和花卉所江邊基地進(jìn)行。試驗(yàn)材料為花卉研究所培育的東方系百合新品種云霞的試管鱗莖。 試驗(yàn)方法 種球預(yù)處理選取鱗片抱合緊密，周徑為（177。）cm 的百合試管鱗莖，洗去瓊脂后用 50%多菌靈可濕性粉劑 1000 倍液浸泡 15min，再用草炭包埋后放入帶孔自封袋包裝,每份40 粒，將包裝好的試管鱗莖分別放入1℃和 4℃恒溫冰箱中貯藏，每處理 6 份。 測定內(nèi)容貯藏期間分別在 0（CK） ，10，20，30，40，50， 60d 隨機(jī)取每份中的 10 粒，分別測定淀粉、可溶糖和還原糖含量，重復(fù) 3 次，取平均值。剩余 30 粒分成 3 組，同時種植在環(huán)境條件一致的田間，并統(tǒng)計(jì)萌芽率和出苗整齊度。萌芽率在種植 30d時統(tǒng)計(jì)，萌芽整齊度=實(shí)際萌芽株數(shù)/處理內(nèi)第一株萌芽至最后一株萌芽時間的累積值,以第一株出苗日期為 1,余依此類推，比值越大，反映出苗時間越集中 [3]，從第10d 開始記錄試管鱗莖萌芽情況，每 5d 一次，共 5 次。16 測定方法可溶性糖、淀粉含量采用蒽酮法測定 [6]。還原糖用 35 二硝基水楊酸法測定 [7]?？扇芴禽焱壬ǖ臏y定（1）樣品中可溶性糖的提取取新鮮鱗片 ，加少許石英砂及 80%乙醇研磨，將勻漿轉(zhuǎn)入 10ml 離心管中，用離心機(jī)離心，轉(zhuǎn)速 400G，一次 3min，共 3 次。每次離心后將上層清夜傾入 100ml容量瓶定容待測。取待測液 2ml，加入蒽酮試劑 10ml，立即搖勻，放入沸水浴中準(zhǔn)確加入 10min，取出后迅速冷卻至室溫，在暗處放置 10min，在 620nm 波長下測定吸光值，每組重復(fù) 3 次。（2）原理糖類（包括單糖、雙糖、寡糖）在濃硫酸存在下，脫水成糠醛或羥甲基糠醛，然后蒽酮和甲醛或羥甲基糠醛脫水縮合，生成藍(lán)綠色的糠醛衍生物，顏色深淺與糖濃度成正相關(guān)。（3）試劑蒽酮試劑：稱取蒽酮 200mg 溶入 100ml 濃硫酸中。該試劑不能久貯，宜現(xiàn)配現(xiàn)用。100181。g/ml 蔗糖標(biāo)準(zhǔn)母液：將分析純蔗糖，放在 80℃ 烘箱里烘干至恒重，準(zhǔn)確稱取 100mg 于燒杯加少量蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)入 100ml 容量瓶定容待用。（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線制作取 6 支大試管，從 06 分別編號，按表加入各試劑。重復(fù) 3 次。表 4 蒽酮法測定可溶性糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的試劑量Table 4 Anthrone method standard curve of the amount of soluble sugar管號 tube number試劑 reagents0 1 2 3 4 5 6100181。g/ml 蔗糖標(biāo)準(zhǔn)母液（ml）100181。g/ml sucrose standard mother liquor0 蒸餾水（ml）distilled water 蒽酮試劑（ml）anthrone reagent 蔗糖含量（181。g） 0 20 40 60 80 100 12017sucrose content將各試管快速搖動混勻后，在沸水浴中煮 10min，取出冷卻，在 620nm 波長下，用分光光度儀檢測，以光密度為縱坐標(biāo)，葡萄糖含量（ug）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（5）本試驗(yàn)蔗糖標(biāo)準(zhǔn)曲線（6）結(jié)果計(jì)算可溶性糖含量（%）= %1061?VWCT式中：C ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得葡萄糖含量，ug。 VT——樣品提取液總體積， ml。 V1——顯色時取樣品液量，ml。 W——樣品中（ g） 。圖 1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線 The standard curve of sucrcose試管鱗莖淀粉含量測定（1）樣品提取取新鮮鱗片 ，加少許石英砂及 80%乙醇研磨，將勻漿轉(zhuǎn)入 10ml 離心管中，用離心機(jī)離心，轉(zhuǎn)速 400G，一次 3min，共 3 次。每次離心后將上層清夜倒掉。然后加入 52%高氯酸，提取其中的淀粉，離心兩次，轉(zhuǎn)速 4000G，每次 3 次。每次將上層清夜轉(zhuǎn)入 100ml 容量瓶中定容。然后按照 1:10 的比例稀釋。每組重復(fù) 3 次。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線制作(同可溶性糖)（3）淀粉含量測定 y = = 0 20 40 60 80 100 120 140蔗 糖 含 量 （ 181。g） the content of sucrose吸光度 the density of light18采用蒽酮顯色法測定。 （4）結(jié)果計(jì)算按下式計(jì)算淀粉的含量。淀粉水解時，在單糖殘基上加了 1 分子水，因而計(jì)算所得的糖的量乘以 才為扣除加入水量后的試劑淀粉含量。 淀粉含量（%）= ?wVCC—標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的淀粉含量（ug）。V—提取液總量（ml）。a—顯色時取液量（ ml） ；W—樣品中（ g） 。試管鱗莖還原糖含量測定（1）樣品提取 準(zhǔn)確稱取 試管鱗莖，加入 10mL 水，磨勻，轉(zhuǎn)入離心管中，置于 60℃恒溫水浴中保溫 30min，使還原糖浸出。4000 轉(zhuǎn)/每分鐘離心 10 分鐘，上清液作為還原糖待測液。（2）實(shí)驗(yàn)原理3,5二硝基水楊酸溶液與還原糖（各種單糖和麥芽糖）溶液共熱后被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)，還原糖的量和棕紅色物的顏色深淺呈一定比例關(guān)系。在 540nm 波長下測定棕紅色物質(zhì)的吸光度值，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，便可求出樣品中還原糖的含量。（3）試劑 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：將分析純葡萄糖，放在 80℃烘箱里烘干至恒重，準(zhǔn)確稱取 100mg 于燒杯加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至刻度，搖勻，冰箱中保存?zhèn)溆谩?,5二硝基水楊酸試劑： 3,5二硝基水楊酸和 262mL 2mol/L NaOH 溶液，加到 500mL 含有 185g 酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加 5g 結(jié)晶酚和 5g 亞硫酸鈉，攪拌溶解。冷卻后加蒸餾水定容至 1000mL，貯于棕色瓶中備用。（4）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作取 7 支具有 25mL 刻度的具塞試管，編號，按表 5 所示的量，精確加入濃度為 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液和 3,5二硝基水楊酸試劑。將各管搖勻，在沸水浴中加熱 5min，取出后立即放入盛有冷水的燒杯中冷卻至室溫，再以蒸餾水定容至 25mL 刻度處，用玻璃塞塞住管口，顛倒混勻，并用蒸餾19水定容至 25mL。在 540nm 波長下，用 0 號管調(diào)零，分別讀取 1～6 號管的吸光值。以消光值為縱坐標(biāo)，葡萄糖 mg 為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得直線方程。（6） 結(jié)果處理分別在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)還原糖 mg 數(shù)，按下式計(jì)算還原糖百分含量：還原糖（%）= [c(v/a)]/(w103)100%式中 C－標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求得的還原糖 mg 數(shù)；V－提取液的體積（mL）；a－顯色時吸取樣品液體積（mL）；W－樣品重（ g）。表 5 3,5二硝基水楊酸法測定還原糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的試劑量Table 5 3,5 dinitrosalicylic acid method standard curve of the amount of ruducing sugar管號 tube number試劑 reagents0 1 2 3 4 5 6100181。g/ml 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（ mL）100181。g/ml glucose standard mother liquor0 蒸餾水（ mL）distilled water 3,5二硝基水楊酸試劑（mL）3,5 dinitrosalicylic acid reagent 葡萄糖含量（mg）Glucose content 0 （5）本試驗(yàn)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線y = + = 0 20 40 60 80 100 120葡 萄 糖 含 量 （ mg） the content of glucose吸光度 the density of light[C(V/a)]/(W103)100 [C(V/a)]/(W103)10020圖 2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線 The standard curve of sucrcose 數(shù)據(jù)處理采用 Excel 2022 處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)觀測碳水化合物含量動態(tài)變化；設(shè)計(jì)單因子（碳水化合物含量） ，二因素(1℃、4℃)的方差顯著性分析，統(tǒng)計(jì)貯藏 60d 后的碳水化合物含量變化的情況。 結(jié)果與分析 不同低溫及貯藏期間‘云霞’百合試管鱗莖淀粉含量的動態(tài)變化