【正文】 g/ml glucose standard mother liquor0 蒸餾水（ mL）distilled water 3,5二硝基水楊酸試劑（mL）3,5 dinitrosalicylic acid reagent 葡萄糖含量（mg）Glucose content 0 （5）本試驗葡萄糖標準曲線y = + = 0 20 40 60 80 100 120葡 萄 糖 含 量 （ mg） the content of glucose吸光度 the density of light[C(V/a)]/(W103)100 [C(V/a)]/(W103)10020圖 2 葡萄糖標準曲線 The standard curve of sucrcose 數(shù)據(jù)處理采用 Excel 2022 處理試驗數(shù)據(jù)觀測碳水化合物含量動態(tài)變化；設計單因子（碳水化合物含量） ，二因素(1℃、4℃)的方差顯著性分析，統(tǒng)計貯藏 60d 后的碳水化合物含量變化的情況。表 5 3,5二硝基水楊酸法測定還原糖標準曲線的試劑量Table 5 3,5 dinitrosalicylic acid method standard curve of the amount of ruducing sugar管號 tube number試劑 reagents0 1 2 3 4 5 6100181。以消光值為縱坐標，葡萄糖 mg 為橫坐標，繪制標準曲線，求得直線方程。將各管搖勻，在沸水浴中加熱 5min，取出后立即放入盛有冷水的燒杯中冷卻至室溫，再以蒸餾水定容至 25mL 刻度處，用玻璃塞塞住管口，顛倒混勻，并用蒸餾19水定容至 25mL。冷卻后加蒸餾水定容至 1000mL，貯于棕色瓶中備用。（3）試劑 葡萄糖標準液：將分析純葡萄糖，放在 80℃烘箱里烘干至恒重，準確稱取 100mg 于燒杯加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至刻度，搖勻，冰箱中保存?zhèn)溆?。?）實驗原理3,5二硝基水楊酸溶液與還原糖（各種單糖和麥芽糖）溶液共熱后被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內，還原糖的量和棕紅色物的顏色深淺呈一定比例關系。試管鱗莖還原糖含量測定（1）樣品提取 準確稱取 試管鱗莖，加入 10mL 水，磨勻，轉入離心管中，置于 60℃恒溫水浴中保溫 30min，使還原糖浸出。V—提取液總量（ml）。淀粉水解時，在單糖殘基上加了 1 分子水，因而計算所得的糖的量乘以 才為扣除加入水量后的試劑淀粉含量。g） the content of sucrose吸光度 the density of light18采用蒽酮顯色法測定。每組重復 3 次。每次將上層清夜轉入 100ml 容量瓶中定容。每次離心后將上層清夜倒掉。 W——樣品中（ g） 。 VT——樣品提取液總體積， ml。g） 0 20 40 60 80 100 12017sucrose content將各試管快速搖動混勻后，在沸水浴中煮 10min，取出冷卻，在 620nm 波長下，用分光光度儀檢測，以光密度為縱坐標，葡萄糖含量（ug）為橫坐標繪制標準曲線。g/ml 蔗糖標準母液（ml）100181。重復 3 次。g/ml 蔗糖標準母液：將分析純蔗糖，放在 80℃ 烘箱里烘干至恒重，準確稱取 100mg 于燒杯加少量蒸餾水溶解后，轉入 100ml 容量瓶定容待用。該試劑不能久貯，宜現(xiàn)配現(xiàn)用。（2）原理糖類（包括單糖、雙糖、寡糖）在濃硫酸存在下，脫水成糠醛或羥甲基糠醛，然后蒽酮和甲醛或羥甲基糠醛脫水縮合，生成藍綠色的糠醛衍生物，顏色深淺與糖濃度成正相關。每次離心后將上層清夜傾入 100ml容量瓶定容待測。還原糖用 35 二硝基水楊酸法測定 [7]。萌芽率在種植 30d時統(tǒng)計，萌芽整齊度=實際萌芽株數(shù)/處理內第一株萌芽至最后一株萌芽時間的累積值,以第一株出苗日期為 1,余依此類推，比值越大，反映出苗時間越集中 [3]，從第10d 開始記錄試管鱗莖萌芽情況，每 5d 一次，共 5 次。 測定內容貯藏期間分別在 0（CK） ，10，20，30，40，50， 60d 隨機取每份中的 10 粒，分別測定淀粉、可溶糖和還原糖含量，重復 3 次，取平均值。 試驗方法 種球預處理選取鱗片抱合緊密，周徑為（177。 試驗材料試驗在省農科院花卉育種重點實驗室和花卉所江邊基地進行。在本試驗研究條件下，研究結果表明，高濃度改良 MS 具有促進試管鱗莖增重的作用，這與張延龍 [9]研究結果相一致，但是本試驗還發(fā)現(xiàn)，大于MS 的培養(yǎng)基中所生產的試管鱗莖品質低下，畸形率高，因此，在生產中建議使用MS 基本培養(yǎng)基。 1/2 MS 時鱗莖形成率僅 %，鱗莖增大倍數(shù)也低于對照。然而，高濃度的改良 MS 不利于鱗莖的誘導， 3MS 時鱗莖形成率下降到 %。張潔 [11]等研究結果表明，改良 MS 濃度高于對照濃度MS 時，有利于鱗莖的膨大，且隨著改良 MS 濃度的增加，鱗莖鮮重增加。其研究發(fā)現(xiàn)，152MS 培養(yǎng)基雖然能促進鱗莖增重，但是所形成的鱗莖畸形率較高。1/2MS 培養(yǎng)基中鱗莖重量顯著減少，直徑也變成最小。這是因為試管鱗莖在不斷膨大過程中需要大量養(yǎng)分，而加倍的改良 MS 可以為鱗莖提供足夠的營養(yǎng)物質，從而促進鱗莖的形成和膨大。這可能是與試管鱗莖的大小、品種有關。本試驗研究結果顯示：較低濃度的 NAA 更有利于試管鱗莖的膨大，其中在 NAA 濃度為 ，對試管鱗莖的膨大最有利。蔗糖濃度在 120g/L 時生成的鱗莖鮮重最大，但畸形嚴重，濃度在 90 g/L時鱗莖重量也較大，但同樣有比較嚴重的畸形，只有蔗糖濃度在 30g/L 和 60g/L 時鱗莖形狀接近于正常，本試驗結果是蔗糖濃度在 60g/L 時，可有效促進云霞 試管鱗莖快速膨大，這與廉美蘭 [90]等所報道的 90g/L 可促進試管鱗莖快速膨大相異。在本試驗條件下，不含蔗糖的培養(yǎng)基組合中，鱗莖幾乎不會生長，這與趙海濤 [41]所報道的，在黑暗條件下不含蔗糖的培養(yǎng)中幾乎沒有鱗莖形成。 討論百合試管鱗莖結球技術是百合工廠化生產的關鍵環(huán)節(jié)，而其膨大的因素又跟鱗莖本身種類、外植體、激素種類、蔗糖濃度、改良 MS 等均有關系，尤其是本試驗材料為省農科院花卉研究所自育新品種云霞 ，應重新驗證其對激素、蔗糖濃度以及改良 MS 的需要量。而改良 MS 濃度為 1/2MS 時，試管鱗莖增長緩慢，規(guī)律性不強。 177。 2MS 177。 177。 177。 MS（ CK） 177。 177。下表同。 177。 177。 177。 177。 177。 177。說明相對較低濃度的 NAA 有利于試管鱗莖的膨大，在本試驗中，NAA 濃度在 ，對鱗莖的膨大最有效。因此，從經(jīng)濟、高效的角度考慮，應選擇蔗糖濃度 60 g/L 為宜。Note: In the same ranks, the lower cases mean significant level. the same as below.由表 1 可知，蔗糖質量濃度為 0 g/L 時，鱗莖基本上沒有生長，蔗糖質量濃度≥30 g/L 時，鱗莖便有明顯的膨大，且隨著蔗糖濃度的增加，所結鱗莖的直徑和鮮重也增加。 177。 120 177。 177。 177。 60 177。 177。 177。12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析本試驗數(shù)據(jù)處理采用 DPS 軟件進行統(tǒng)計分析，差異顯著性測驗 結果與分析 蔗糖濃度對‘云霞’百合試管鱗莖生長的影響表 1 蔗糖濃度對‘云霞’百合試管鱗莖鱗生長的影響Table 1 The effects of sucrose concentration on the growth of ‘Yunxia’ Lily bulblets in vitro蔗糖濃度/g?L 1Concentrationof sucrose初始鱗莖鮮重mgFresh weight per bulblet16 周鱗莖直徑 cmDiameter of bulblet16 周鱗莖鮮重mgFresh weight per bulblet16 周鱗莖增大倍數(shù)Multiple bulblets swelling0（CK ） 177。初始單芽鮮重=接種單芽后培養(yǎng)基及瓶的總質量未接種前的培養(yǎng)基及瓶的總質量。 觀測指標及測量方法鱗莖的鮮重:從培養(yǎng)基中取出誘導的小鱗莖,剪去葉片和根,稱鮮重。NAA 處理：以 MS+瓊脂 +活性炭 +蔗糖 60g/L 中，分別添加 0（對照） 。2)℃下連續(xù)黑暗培養(yǎng)，每 4 周繼代一次,16 周后統(tǒng)計結果。 之間、生長健壯、無變異、鱗莖盤無損傷的試管鱗莖叢生芽作為接種材料。儀器設備：精確度 的電子稱、超凈工作臺、組培室及其相關設施和設備。以省農業(yè)科學院花卉研究所培育的東方系百合新品種云霞（附圖 1）的試管鱗莖為試驗材料。從而得出最佳百合試管鱗莖生產技術。本研究以東方百合雜交后代為試驗材料，一方面研究植物生長調節(jié)劑、培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件對試管鱗莖生長發(fā)育的影響，另一方面研究試管鱗莖的貯藏生理及影響因素，以完善百合試管鱗莖培育及貯藏技術，進一步為試管鱗莖生產提供技術指導和理論依據(jù)。要實現(xiàn)種球國產化還有較遠的路要走，還需在繁育關健技術有新的突破，特別是原種繁育中試管鱗莖高效生產技術和試管鱗莖休眠生理方面有待進一步開展深入的研究。而據(jù)調查，估計在今后的 5 到 10年內，我國花卉市場的百合銷量將會呈顯著的上升趨勢。我國百合種球生產尚處于探索階段，由于受氣候條件，繁育技術等方面的限制，普遍存在種球退化，繁殖系數(shù)低，促成栽培效果較差的問題。故進口百合鱗莖在次年往往出現(xiàn)退化現(xiàn)象，如此種球又得進口。由于國外品種并不是專為中國所育，即便是同一品種的種球，由于產地不同，休眠程度也不同。雖然上海、北京、遼寧、等地區(qū)有一定的栽培規(guī)模，但產量少，主要供應本地區(qū)和國內市場，而且栽培技術、切花質量和保鮮技術方面與國外相比均存在較大的差距。目前荷蘭是世界百合種球與切花生產的主產國，也是近數(shù)十年在球根花卉中發(fā)展最快的花卉，20 世紀 80～90 年代百合的地位在球根花卉中己上升到第二位，近年來荷蘭東方百合的生產量己超過亞洲百合及鐵炮百合。目前，大量生產的切花有三類，即亞洲百合系列、東方百合系列、路香百合系列。百合種球的繁育技術雖然日漸成熟，但其速度慢，繁殖系數(shù)低等缺點還是制約了百合鱗莖和切花的大規(guī)模生產。但這些種球卻遠遠沒有滿足其它國家對百合種球的需求，僅我國一年就從荷蘭及日本進口 1 億多只百合種球，并且預計，這種需求在今后將呈顯著的增長趨勢。而在著名的花卉王國——荷蘭，百合種植面積 1960 年僅為 110 hm2 擴，到 2022 年發(fā)展到 4200 hm2，栽植面積擴大了 38倍之多。從1990～2022 年的 10 年間，百合種植面積的凈增倍數(shù)分別為：荷蘭 倍，法國 13倍，新西蘭 16 倍，智利 15 倍。在世界范圍內，百合花的生產和消費一直處于高速發(fā)展的態(tài)勢。以鮮切花為例，中國鮮切花消費從 1984～1994 年，年均遞增 37%；近幾年來，年均遞增速度更高達60%，表現(xiàn)為低基數(shù)上的加速發(fā)展態(tài)勢 [89]，因此可以預料，中國將會成為世界上最具潛力的花卉消費與生產的大市場。根據(jù)世界糧農組織(CAFO)統(tǒng)計，近十年來，世界花卉消費額平均增長 10%～15%，花卉出口總額增加了 4 倍，世界范圍內花卉消費額在 2022 年已接近 2022 億美元。如 MeJA 能降低組培產生的百合小鱗莖的休眠程度，在高濃度的 MeJA 環(huán)境中再生的小鱗莖不經(jīng)過低溫處理的萌發(fā)率隨著MeJA 的濃度上升而增高 [88]。百合組織內的 PPO 和 POD 參與了褐變過程且 POD 活性變化是引起百合褐變的主要因素 [8687]。蔣益虹研究了百合褐變與 PPO(多酚氧化酶)，POD(過氧化物酶)活性變化的關系，發(fā)現(xiàn)百合在貯藏過程中褐變與 PPO、POD 活性變化均趨于上升，且褐變度的變化規(guī)律與 PPO、POD 活性呈現(xiàn)為正相關。用適當濃度的赤霉素處理某些百合鱗莖一定的時間，可打破其休眠，甚至可以代替低溫處理的春化作用 [52]。在此期間，鱗莖的休眠雖未完全解除，但是頂芽在鱗莖內迅速伸長和增粗，說明氨基酸含量變化與鱗莖休眠的逐步解除有關，是為8鱗莖萌發(fā)進行的生理準備 [83]?？扇苄蕴堑姆e累對于百合鱗莖的萌發(fā)及初期的生長具有重要的作用 [50] [8182]。從百合鱗莖不同部位來看，孫紅梅等發(fā)現(xiàn)，頂芽的可溶糖含量在貯藏初期的34d內達到最大值，其次是鱗莖盤 [55]。涂淑萍等研究得出，亞洲百合雜種系的‘黃寶貝’(Yellow Baby)，鐵亞雜交種系的‘達諾’(Ceb Dazzle)，東方百合雜種系的‘卡薩布蘭卡’(CasaBlanca)也有類似報道，發(fā)現(xiàn)它們在冷藏處理初期的37d，淀粉含量迅速下降，37d后淀粉含量變化比較平緩，并且期間都存在淀粉含量上升的過程 [50]。在低溫處理期間，鱗莖內發(fā)生“低溫糖化”作用，主要貯藏物質，淀粉水解，而可溶性碳水化合物則累積增多 [7174]。在低溫作用下淀粉等貯藏態(tài)碳水化合物開始轉化，貯藏于0℃下的百合鱗莖積累更多的可溶性糖。許多研究證明，鱗莖植物在低溫作用下，外觀上幾乎沒有形態(tài)和結構的變化，但鱗莖中發(fā)生著復雜的生理生化變化 [44]。組培生產的小鱗莖，在不同低溫處理不同時間，小鱗莖萌發(fā)的數(shù)量、遲早差異很大，而且在同種低溫處理