蛋白濃度測(cè)定[完成]-資料下載頁(yè)
2025-06-25 11:59本頁(yè)面
【正文】 ，用生理鹽水補(bǔ)足到 1ml。加入5ml的堿性酮試劑，混勻后室溫放置20分鐘后。編 號(hào)123456蛋白標(biāo)準(zhǔn)（ml）0% NaCl（ml）0堿性酮試劑（ml）555555混勻后室溫(25℃)放置20分鐘酚試劑（ml）30分鐘后，以第1管為空白，在650nm波長(zhǎng)比色，讀出吸光度，以各客的標(biāo)準(zhǔn)蛋白濃度為橫坐標(biāo)，以其吸光度為縱坐標(biāo)繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。血清蛋白質(zhì)測(cè)定。稀釋血清（或其它蛋白樣品濃度）：，置于50ml容量瓶中，用生理鹽水釋釋至刻度（此為稀釋500倍，其它蛋白樣品酌情而定）。再取三只試管，分別標(biāo)以3號(hào)，按下表操作：編 號(hào)測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管稀釋標(biāo)本(ml)——稀釋標(biāo)準(zhǔn)液(ml)——%NaCl(ml)——堿性酮液(ml)混勻后于室溫放置20分鐘酚試劑(ml)混勻各管，30分鐘后，在波長(zhǎng)650nm比色，讀取吸光度?！居?jì) 算】以測(cè)定管讀數(shù)查找標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)求得血清蛋白含量。無(wú)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)時(shí)，可以與測(cè)定管同樣操作的標(biāo)準(zhǔn)管按下式計(jì)算蛋白含量：血清蛋白含量（g%）＝【試劑配制】堿性酮溶液：甲液：。乙液：CuSO4?5H2O ％酒石酸鉀100ml中。取甲液50ml，乙液1ml混合。此液只能臨用前配制。酚試劑：取Na2WO4?2H2O 100g和Na2MoO3?2H2O 25g，溶于蒸餾水700ml中，再加85％H3PO4，50ml和HCl（濃）100ml，將上物混合后，置1500ml園底燒瓶中溫和地回流10小時(shí)再加硫酸鋰（Ll2SO2?H2O）150g，水50ml及溴水?dāng)?shù)滴，繼續(xù)沸騰15分鐘以除去剩余的溴，冷卻后稀釋至1000ml，然后過(guò)濾，溶液應(yīng)呈黃色（如帶綠色者不能用），置于棕色瓶中保存。使用標(biāo)準(zhǔn)NaOH滴定，以酚酞為指示液，而后稀釋約一倍，使最后濃度為lN。蛋白標(biāo)準(zhǔn)液（）準(zhǔn)確稱(chēng)取10mg牛血清蛋白，在100ml容量瓶中加生理鹽水至刻度。溶后分裝，放于－20℃冰箱保存。【注意事項(xiàng)】Tris緩沖液、蔗糖、硫酸胺、基化物、酚類(lèi)、檸檬酸以及高濃度的尿素、胍、硫酸鈉、三氯乙酸、乙醇、丙酮……等均會(huì)干擾Folin酚反應(yīng)。當(dāng)酚試劑加入后，應(yīng)迅速搖勻（加—管搖一管）以免出現(xiàn)渾濁。由于這種呈色化合物組成尚未確立，它在可見(jiàn)光紅外光區(qū)呈現(xiàn)較寬吸收峰區(qū)。不同實(shí)驗(yàn)室選用不同波長(zhǎng)，有選用500或 540nm，有選用640nm，700或750nm。選用較高波長(zhǎng)，樣品呈現(xiàn)較大的光吸收，本實(shí)驗(yàn)選用波長(zhǎng)650nm。1. 若不給自己設(shè)限，則人生中就沒(méi)有限制你發(fā)揮的藩籬。2. 若不是心寬似海，哪有人生風(fēng)平浪靜。在紛雜的塵世里，為自己留下一片純靜的心靈空間，不管是潮起潮落，也不管是陰晴圓缺，你都可以免去浮躁，義無(wú)反顧，勇往直前，輕松自如地走好人生路上的每一步3. 花一些時(shí)間，總會(huì)看清一些事。用一些事情，總會(huì)看清一些人。有時(shí)候覺(jué)得自己像個(gè)神經(jīng)病。既糾結(jié)了自己，又打擾了別人。努力過(guò)后，才知道許多事情，堅(jiān)持堅(jiān)持，就過(guò)來(lái)了。4. 歲月是無(wú)情的，假如你丟給它的是一片空白，它還給你的也是一片空白。歲月是有情的，假如你奉獻(xiàn)給她的是一些色彩，它奉獻(xiàn)給你的也是一些色彩。你必須努力，當(dāng)有一天驀然回首時(shí)，你的回憶里才會(huì)多一些色彩斑斕，少一些蒼白無(wú)力。只有你自己才能把歲月描畫(huà)成一幅難以忘懷的人生畫(huà)卷。學(xué)習(xí)參考
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