飼料中粗蛋白的測定-資料下載頁
2025-04-28 22:18本頁面
【正文】 擾測定。特別適用于柱層析洗脫液的快速連續(xù)檢測，因為此時只需測定蛋白質(zhì)濃度的變化，而不需知道其絕對值。 ? 此法的特點是測定蛋白質(zhì)含量的 準確度較差 ，干擾物質(zhì)多，在用標準曲線法測定蛋白質(zhì)含量時，對那些 與標準蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸含量差異大的蛋白質(zhì) ，有一定的誤差。故該法適于用測定與標準蛋白質(zhì)氨基酸組成相似的蛋白質(zhì)。 5/25/2022 三、蛋白質(zhì)含量測定的其它方法（直接法） （三）紫外吸收法 2．方法評價 ? 若樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等 吸收紫外光的物質(zhì) ，會出現(xiàn)較大的干擾。核酸的干擾可以通過查校正表，再進行計算的方法，加以適當(dāng)?shù)男Ｕ?。但是因為不同的蛋白質(zhì)和核酸的紫外吸收是不相同的，雖然經(jīng)過校正，測定的結(jié)果還是存在一定的誤差。 ? 此外，進行紫外吸收法測定時，由于蛋白質(zhì) 吸收高峰常因 pH的改變而有變化 ，因此要注意溶液的 pH值，測定樣品時的 ph要與測定標準曲線的 pH相一致。 ? 因 Lowry反應(yīng)的顯色隨時間不斷加深，因此各項操作必須精確控制時間。 5/25/2022 三、蛋白質(zhì)含量測定的其它方法（直接法） （四）考馬斯亮藍染色法 1．原理 考馬斯亮藍 G250（ Coomassie brilliant blue G250）測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種?？捡R斯亮藍 G250在游離狀態(tài)下呈紅色，最大光吸收在 488nm；當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌鞍踪|(zhì) 色素結(jié)合物在 595nm波長 下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍 G250結(jié)合在 2min左右的時間內(nèi)達到平衡，完成反應(yīng)十分迅速；其結(jié)合物在室溫下 1h內(nèi)保持穩(wěn)定。 5/25/2022 三、蛋白質(zhì)含量測定的其它方法（直接法） ? 經(jīng)研究認為，染料主要是與蛋白質(zhì)中的 堿性氨基酸 （特別是精氨酸）和 芳香族氨基酸殘基 相結(jié)合。 ? 該法是 1976年 Bradford建立，因而又叫 Bradford法。 PROTEIN + Amax = 595nm BLUE Acid Coomassie G250 Protein Dye Complex O CH 2 CH 3 NH C CH 3 CH 3 N CH 2 SO 3 CH 3 CH 2 N CH 2 CH 2 CH 3 SO 3 Na + （四）考馬斯亮藍染色法 1．原理 5/25/2022 三、蛋白質(zhì)含量測定的其它方法（直接法） ? 試劑配制簡單，干擾物質(zhì)少， 反應(yīng)非常靈敏 ，靈敏度比 Lowry法還高 4倍，可測定微克級蛋白質(zhì)含量，測定濃度范圍為 0～ 1 000μg/mL，是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測定方法。 ? 操作簡便快捷，完成一個樣品的測定，只需要 5分鐘左右。由于染料與蛋白質(zhì)結(jié)合的過程，大約只要 2分鐘即可完成，其顏色可以在 1小時內(nèi)保持穩(wěn)定，且在 5分鐘至 20分鐘之間，顏色的穩(wěn)定性最好。因而完全不用像 Lowry法那樣費時和嚴格地控制時間。 （四）考馬斯亮藍染色法 2．方法評價 5/25/2022 三、蛋白質(zhì)含量測定的其它方法（直接法） （四）考馬斯亮藍染色法 2．方法評價 ? 有些陽離子，如 K+、 Na+、 Mg2+、 (NH4)2SO乙醇等物質(zhì)不干擾測定，但大量的去污劑如 TritonX100、SDS等嚴重干擾測定。 ? 由于各種蛋白質(zhì)中的 精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同 ，因此 bradford法用于不同蛋白質(zhì)測定時有較大的偏差，在制作標準曲線時通常選用 γ— 球蛋白為標準蛋白質(zhì)，以減少這方面的偏差。 5/25/2022 相關(guān)事件 ?三鹿毒奶粉事件（ 2022） ?美國寵物飼料事件： “寵物毒糧” （ 2022） 罪魁禍首：三聚氰胺（ C3N6H6 ），“蛋白精” 1. 純白色單斜棱晶體，無味 ，微溶于水和熱乙醇 。 2. 含氮量 ％。 返回 5/25/202
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