飼料中粗蛋白的測(cè)定(編輯修改稿)
2025-05-25 22:18 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 加熱煮沸水蒸氣發(fā)生瓶?jī)?nèi)的水。 防止水中氨態(tài)氮的逸失而影響測(cè)定值 。 5/25/2022 二、凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白含量 3. 測(cè)定步驟 第二步 氨的蒸餾 ? 蒸餾 ② 硼酸溶液的準(zhǔn)備： 向接收瓶?jī)?nèi)加入 20mL2%硼酸及 2滴混合指示劑并使冷凝管下端插入液面下 。 5/25/2022 二、凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白含量 3. 測(cè)定步驟 第二步 氨的蒸餾 ?蒸餾 ③ 開(kāi)始蒸餾： 吸取 定氮儀的反應(yīng)室中，用 10mL蒸餾水沖洗進(jìn)樣入口，再加 10mL40%氫氧化鈉溶液入反應(yīng)室（動(dòng)作要快，以防氨逸出），塞好入口玻璃塞， 在入口處加水密封，防止漏氣 。打開(kāi)水蒸汽發(fā)生器與反應(yīng)室之間的夾子，蒸汽通入反應(yīng)室使氨氣被蒸發(fā)出來(lái)，并通過(guò)冷凝管而進(jìn)入接收瓶?jī)?nèi)，以第一滴餾液滴下開(kāi)始計(jì)時(shí)，蒸餾 5min，使冷凝管離開(kāi)吸收液面，在蒸餾1min，用水沖洗冷凝管末端，洗液流入接收瓶中，取下接收瓶。 最后關(guān)閉電源，絕不能先關(guān)閉電源，否則吸收液將發(fā)生倒吸！ 5/25/2022 二、凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白含量 3. 測(cè)定步驟 第二步 氨的蒸餾 注意事項(xiàng)： ? 凱氏定氮蒸餾過(guò)程中，要求 整套裝置呈密閉狀態(tài) ，蒸餾前應(yīng)檢查定氮儀各導(dǎo)管間的連接處是否密閉，以免產(chǎn)生泄露； ? 測(cè)定樣品前應(yīng)清洗蒸餾裝置，即用 蒸餾水空蒸一次或數(shù)次 ； ? 蒸餾后立即清洗蒸餾器。蒸餾完畢后，移取熱源，夾緊蒸汽發(fā)生器和收集器間的橡皮管，此時(shí)由于收集器溫度突然下降，即可將反應(yīng)室殘液吸至收集器。 ? 蒸餾時(shí)， 火力穩(wěn)定 ，蒸汽發(fā)生要均勻充足，蒸餾中途不得停火斷汽，否則發(fā)生倒吸。加堿要足量（反應(yīng)室液體呈深藍(lán)色或褐色）并且堿液不能污染冷凝管及接收瓶。 5/25/2022 二、凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白含量 3. 測(cè)定步驟 第三步 滴定 1. 用微量酸式滴定管，以 滴定，溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榛壹t色為終點(diǎn)。 2. 空白試驗(yàn)： 同時(shí)取 白消化稀釋液 同上操作，以校正藥品不純所發(fā)生的誤差。 5/25/2022 二、凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白含量 4．結(jié)果計(jì)算 CP—— 樣品中蛋白質(zhì)的含量（ %）； V1—— 樣品消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積（ mL）； V2—— 空白實(shí)驗(yàn)消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積（ mL）； C—— 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液通過(guò)標(biāo)定后的摩爾濃度（ mol/L）； —— 每毫升鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液（ 1 mol/L）相當(dāng)于氮的克數(shù)； m—— 樣品質(zhì)量（ g）； —— 氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)（換算系數(shù)）。 （大家想想 何計(jì)算出來(lái)的？） 5/25/2022 二、凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白含量 5. 方法的評(píng)價(jià) ? 凱氏法的優(yōu)點(diǎn)是 適用范圍廣 ，可用于動(dòng)植物的各種組織，器官、各種飼料等成組復(fù)雜樣品的測(cè)定，只要細(xì)心操作都能得到 較準(zhǔn)確 的結(jié)果，至今仍被作為標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法。但此法 靈敏度低 ，適用于 氮，操作比較復(fù)雜，所需時(shí)間長(zhǎng) 。 ? 用凱氏定氮法通過(guò)測(cè)總氮量來(lái)確定蛋白質(zhì)含量，包含了核酸、生物堿、含氮類(lèi)脂、卟啉、以及含氮色素等非蛋白質(zhì)含氮化合物，所以這樣的 測(cè)定結(jié)果稱(chēng)為粗蛋白。 事件 5/25/2022 二、凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白含量 5. 方法的評(píng)價(jià) ? 不同的蛋白質(zhì)其氨基酸組成及比例方式不同，故各種不同的蛋白質(zhì)其含氮量也不同（約在 ～ ％，平均為 16％），因而 不同蛋白質(zhì)系數(shù)也不一樣 。 幾種飼料原料蛋白質(zhì)含氮百分?jǐn)?shù)和蛋白質(zhì)系數(shù) 原料 蛋白質(zhì)含氮量 蛋白質(zhì)系數(shù) 小麥、大麥 、燕麥、黑麥 稻谷 玉米、蕎麥 高梁 大豆、豌豆 花生、向日葵 牛奶及其制品 雞蛋 ? Tyr（酪氨酸）：分子量 ，含氮量 ； ? Ala（丙氨酸）：分子量 ，含氮量 ； ? Lys（賴(lài)氨酸）：分子量 ，含氮量 。 5/25/2022 三、蛋白質(zhì)含量測(cè)定的其它方法（直接法） （一）雙縮脲法（ Biuret法）
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