【正文】 39對(duì)抗生素的敏感性抗生素名稱濃度抑菌圈直徑/mm結(jié)果判定大觀霉素[Spectinomycin(SPT)]100μg/片+桿菌肽[Bacitracin(B)]卡那霉素[Kanamycin(K)]30μg/片+多黏菌素B[PolymyxinB(PB)]300μg/片+呋喃唑酮[Furazolidone(FR)]300μg/片+紅霉素[Erythromycin(E)]15μg/片+氯霉素[Chloramphenicol(C)]30μg/片+四環(huán)素[Tetracycline(TE)]30μg/片+萬古霉素[Vanycin(VA)]30μg/片+利福平[Rifampin(RA)]5μg/片+注：“+”為敏感；“”為不敏感。從上述分析可以發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌的分離篩選遠(yuǎn)比乳酸菌復(fù)雜，特別是在安全穩(wěn)定性方面的檢驗(yàn)更是極為繁瑣。但是這些都是必須完成的工作，在實(shí)際生產(chǎn)過程中，任何步驟出現(xiàn)差錯(cuò)都有可能導(dǎo)致很嚴(yán)重的后果。第三節(jié) 發(fā)酵飼料生產(chǎn)菌種的制備和保存在獲得了飼料生產(chǎn)菌種以后，需要對(duì)生產(chǎn)菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)和保存，在生產(chǎn)中稱為制種。生產(chǎn)企業(yè)的規(guī)模不同，準(zhǔn)備生產(chǎn)菌種的方式也有差別。大型生產(chǎn)企業(yè)由于用量比較大，往往自己制種，現(xiàn)生產(chǎn)現(xiàn)用。生產(chǎn)規(guī)模比較小的企業(yè)傾向于購(gòu)買菌種，或者部分購(gòu)買，部分自己制備。 在前期的敘述中，我們已經(jīng)知道，發(fā)酵飼料的生產(chǎn)菌種主要是乳酸菌、酵母菌和芽孢桿菌?，F(xiàn)在就針對(duì)這三種微生物的擴(kuò)大培養(yǎng)和干燥保存進(jìn)行論述。一、乳酸菌的培養(yǎng)乳酸菌是最常用的有益菌，一般都是厭氧菌，很難制成干粉，最好現(xiàn)培養(yǎng)現(xiàn)用。乳酸菌培養(yǎng)最簡(jiǎn)便、最成熟的方式類似酸奶的發(fā)酵。%~%的糖，經(jīng)過消毒，冷卻至37℃左右，在無菌條件下接種、厭氧培養(yǎng)，就可以獲得比較理想的培養(yǎng)物。以下是在實(shí)際生產(chǎn)中采用的乳酸菌擴(kuò)大培養(yǎng)方法。選取無抗生素污染的純牛奶10L，加入600~800g白砂糖（也可用紅糖代替），加熱至60~70℃，直至蔗糖完全溶解，然后分裝在500mL三角瓶中，用棉花塞塞緊，外包牛皮紙。在110℃左右消毒滅菌10min，冷卻至37℃左右，接種乳酸菌，這樣不僅可以提高糖酸轉(zhuǎn)化效率，而且乳酸菌培養(yǎng)過程容易控制氣壓。在36~40℃恒溫培養(yǎng)20~24h，就可以用于后續(xù)的發(fā)酵飼料擴(kuò)大接種，%左右。需要強(qiáng)調(diào)的是一定要用無抗生素污染的牛奶。乳酸菌一般對(duì)抗生素很敏感，溶液中只要有5mg/kg的抗生素就會(huì)對(duì)乳酸的生長(zhǎng)繁殖起到明顯的抑制作用，基本不能獲得合格的培養(yǎng)物。如果沒有合格的無抗生素污染牛奶，可以用無藥物污染的豆粕粉。豆粕經(jīng)過浸泡、磨漿以后可以替代牛奶，%左右，類似于豆?jié){，其后續(xù)的補(bǔ)糖和接種發(fā)酵過程與牛奶發(fā)酵過程類似。也可以用無抗生素污染的奶粉（如新西蘭奶粉）加水調(diào)漿（加水量是奶粉分量的8倍左右），恢復(fù)成原始牛奶的營(yíng)養(yǎng)濃度。二、乳酸菌培養(yǎng)液的脫水干燥傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)液的干燥都是設(shè)法先除去培養(yǎng)液中的自由水。但是對(duì)乳酸菌培養(yǎng)液來說，除水是比較困難的單元操作。乳酸菌對(duì)熱和氧氣都很敏感，即使是高濃度的乳酸菌培養(yǎng)液，其含水量一般都超過90%，干物質(zhì)的含量不超過10%，除水通常需要較長(zhǎng)的時(shí)間。對(duì)于厭氧的乳酸菌來說，與空氣接觸時(shí)間越長(zhǎng)，活力損失也越大。采用常規(guī)的氣流干燥，乳酸菌的活性損失一般都要超過90%以上。即使采用瞬時(shí)噴霧干燥，活力損失也要超過85%。脫水后的制劑，在20℃條件下，在空氣中暴露24h，活力損失就會(huì)達(dá)到40%以上，給實(shí)際推廣造成很大困難。近年來，世界各地的畜牧科研工作者在活性乳酸菌的干燥保存方面進(jìn)行了大量研究，提出了很多高科技的方法，其中比較常用的方法是抽真空冷凍干燥和包埋造粒。但因成本造價(jià)高昂，并不適合工業(yè)化生產(chǎn)。下面敘述是比較實(shí)用的乳酸菌脫水干燥方法：一般普通的大麥、小麥和玉米等農(nóng)副產(chǎn)品的含水量都在14%左右，經(jīng)過100℃氣流干燥以后，可以比較簡(jiǎn)單地把水份降低到6%左右。然后再用這些經(jīng)過干燥的載體以大比例（10倍以上）與乳酸絕培養(yǎng)液混合，使混合物的水份含量為11%~20%，從而使乳酸菌處于休眠狀態(tài)，不易失活。干燥冷卻后的載體可以迅速的吸附培養(yǎng)液中的游離水，然后在真空包裝。實(shí)驗(yàn)表明，此方法保存的乳酸菌，在室溫條件下保存3個(gè)月，乳酸菌的活力可以保存50%以上，保存6個(gè)月時(shí)，乳酸菌的活力保存在40%左右。此方法簡(jiǎn)便實(shí)用，成本低廉、質(zhì)量穩(wěn)定，保質(zhì)期長(zhǎng)，且活性乳酸菌的回收率較高。（一） 活性乳酸菌脫水干燥流程抽真空密封包裝混合干燥載體乳酸菌培養(yǎng)（二）流程說明載體為麥粉、玉米粉或者其他農(nóng)副產(chǎn)品。粉碎后過20目篩。對(duì)載體進(jìn)行氣流干燥，檢測(cè)其含水量。將干燥后的麥粉收集在緩沖倉(cāng)內(nèi)，抽氣冷卻至40℃。如果緩沖倉(cāng)的物料不超過1t，冷卻時(shí)間一般不超過2h，%左右，對(duì)后續(xù)的吸附操作影響很小。必要時(shí)可在冷卻后將干燥后的麥粉進(jìn)行抽真空包裝，以防止吸濕回潮，包裝袋的容量為1050kg比較合適。乳酸菌一般選用嗜熱鏈球菌，也稱為唾液鏈球菌嗜熱亞種、發(fā)酵乳桿菌和植物乳桿菌等常用的發(fā)酵飼料生產(chǎn)用乳酸菌。將乳酸菌種子液接種于培養(yǎng)基中（%），在35℃條件下厭氧培養(yǎng)10~14h，得到擴(kuò)大培養(yǎng)液，~1011cfu/g。%左右（%）。培養(yǎng)基按照如下方法配制：將紅糖（或白砂糖）溶解于無抗生素（）的純牛奶中，得到乳酸菌培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基在95~105℃條件下消毒10~15min，冷卻至40℃以下。 麥粉與乳酸菌菌液混合，得到的混合物即為乳酸菌劑制成品。將制備得到的乳酸菌劑成品裝于致密性很好的包裝袋中，抽真空密封。4. 菌劑的保存期及活菌損失情況將真空包裝的菌劑置于常溫中保存，在保存時(shí)間為1,3,6個(gè)月時(shí)，分別菌劑中活菌損失情況。我們進(jìn)行了6次實(shí)際生產(chǎn)試驗(yàn)，結(jié)果如表211至217。表211 嗜熱鏈球菌制劑保存試驗(yàn) （ 25℃，真空保存，%）保存時(shí)間/d103090180存活率/%表212 發(fā)酵乳桿菌制劑保存試驗(yàn)（25℃，真空保存，%）保存時(shí)間/d103090180存活率/%表213發(fā)酵乳桿菌制劑保存試驗(yàn)（25℃，真空保存，%）保存時(shí)間/d103090180存活率/%表214植物乳桿菌制劑保存試驗(yàn)（25℃，真空保存，%）保存時(shí)間/d103090180存活率/%32表215發(fā)酵乳桿菌制劑保存試驗(yàn)（25℃，真空保存，%）保存時(shí)間/d103090180存活率/%表216 發(fā)酵乳桿菌制劑保存試驗(yàn)（25℃，真空保存，%）保存時(shí)間/d103090180存活率/%28工業(yè)化干燥操作中，高溫氣流干燥1t含水量為14%的麥粉，最終含水量達(dá)到5%，即獲得干燥成品約900kg,需要的操作費(fèi)用約300元（包括電耗、煤耗和人工費(fèi)）。這些載體可以吸附干物質(zhì)含量為10%的高濃度乳酸菌培養(yǎng)液100kg，獲得活菌濃度降低10倍的活菌制劑1t，含水量仍然為14%左右；若每1kg成品一個(gè)單獨(dú)真空包裝，則1t成品的總生產(chǎn)成本不超過4000元。三、酵母菌粉的制備酵母菌是有氧培養(yǎng)的，也可以現(xiàn)培養(yǎng)現(xiàn)用。但是酵母菌干燥、保存比較方便，可以制成干粉備用。釀酒酵母是最常見的發(fā)酵飼料生產(chǎn)菌種之一，以下是一種比較常用的釀酒酵母的擴(kuò)大培養(yǎng)和干燥操作過程。酵母菌保存用固態(tài)培養(yǎng)基（以1000mL為計(jì)算基準(zhǔn)）：，，。種子用液體培養(yǎng)基（以1000ml為計(jì)算基準(zhǔn)）:玉米漿10ml，。一級(jí)種子用三角瓶搖瓶培養(yǎng)，%~%，500ml三角瓶裝液量不超過150毫升，轉(zhuǎn)速控制在200~250r/min之間。在30℃恒溫培養(yǎng)8~10h，接入二級(jí)種子罐。表217 各種菌劑的制備狀況匯總載體乳酸菌培養(yǎng)液乳酸菌制劑成品載體種類干載體質(zhì)量/kg干載體含水量/%乳酸菌種名培養(yǎng)液質(zhì)量/kg乳酸菌的濃度/(cfu/g)載體與乳酸菌培養(yǎng)液質(zhì)量比菌活力成品含水量/%成品質(zhì)量/kg活菌稀釋率/%活菌濃度/(cfu/g)麥粉9206嗜熱鏈球菌601011:1很高9801010玉米粉9207發(fā)酵乳桿菌801010:1高1000109麥麩9208發(fā)酵乳桿菌1001010:1較高1020109玉米粉9206植物乳桿菌1201010:1較高1040109麥粉9205發(fā)酵乳桿菌1401010:1一般1060109麥麩9206發(fā)酵乳桿菌1601010:1一般1080109二級(jí)種子用80~100L小罐，%~%，~*。在30℃通風(fēng)培養(yǎng)7~8h，接入生產(chǎn)用大罐。大罐的容積是3~5t。%~，~。41 / 41