蛋白質化學最終版ppt課件-資料下載頁
2025-05-12 13:55本頁面
【正文】 質分子大小在膠粒范圍之內(nèi) 。 * 蛋白質膠體穩(wěn)定的因素 顆粒表面電荷 水化層 + + + + + + + 帶正電荷的蛋白質 － － － － － － － － 帶負電荷的蛋白質 水化膜 水化膜 2. 低溫 有機溶劑沉淀蛋白質： 0～ 4℃ 低溫操作 ，丙酮用量一般 10倍于蛋白質溶液體積 ， 沉淀后 ， 應立即分離 ， 以防蛋白質會變性 ， 也可用乙醇沉淀 。 1. 中性鹽沉淀蛋白質： 在蛋白質溶液中加入大量的硫酸銨 ， 硫酸鈉或氯化鈉等中性鹽 ， 破壞蛋白質的水化膜和同種電荷 ， 使蛋白質顆粒相互聚集 ，發(fā)生沉淀 。 五 、 蛋白質沉淀反應 3. 加熱沉淀反應 4. 重金屬鹽沉淀法 蛋白質在溶液 PH稍大于其等電點時 ， 蛋白質解離成負離子 ， 易與重金屬離子結合 ，生成不溶性的蛋白質鹽沉淀 。 5. 生物堿試劑沉淀法 蛋白質溶液 PH小于其等電點時，蛋白質解離成 正離子， 易與生物堿試劑結合，生成不溶性的 鹽而沉淀。 六、蛋白質的顏色反應 （一）茚三酮反應：氨基 （二）雙縮脲反應：肽鍵 （三）酚試劑反應 P93 圖 411 七、蛋白質的免疫學性質 ?，抗原性 ? ? 單克隆抗體 ? 多克隆抗體 ? ? 免疫預防：疫苗 ? 免疫、診斷治療 骨髓瘤細胞 致敏的 B淋巴細胞 雜交瘤 一、蛋白質的提取 第六節(jié) 蛋白質的分離和純化基本原理 二、蛋白質的分離純化 等電點沉淀： 蛋白質在等電點時溶解度最小。但是單純使用此方法不易使蛋白質沉淀完全，常與其他方法配合使用。 （一）根據(jù)溶解度不同的分離純化方法 視頻：血紅蛋白的提取 是將硫酸銨 、硫 酸 鈉 或 氯化 鈉 等 加 入蛋白質溶液 ，使 蛋 白 質 表面 電 荷 被 中和 以 及 水 化膜被破壞 ，導 致 蛋 白 質沉淀 。 鹽析沉淀： 視頻：蛋白質的鹽析 超過濾 加壓 蛋白質溶液 半透膜 支持膜的柵板 超濾液 透析 （二）根據(jù)分子大小不同的分離純化方法 未知 logMr 洗出液中的蛋白質濃度 洗脫體積（ mL） 層析的主要設備 3. 密度梯度離心 蔗糖密度梯度 滴加樣品 CsCl密度梯度離心 蛋白質在高于或低于其 pI的溶液中為帶電的顆粒 ， 在電場中能向正極或負極移動 。 這種通過蛋白質在電場中泳動而達到分離各種蛋白質的技術 , 稱為 電泳 。 （三）根據(jù)電離性質的分離純化方法 幾種重要的蛋白質電泳 *SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 ，常用于蛋白質分子量的測定。 *等電聚焦電泳 ，通過蛋白質等電點的差異而分離蛋白質的電泳方法。 *雙向凝膠電泳 是蛋白質組學研究的重要技術。 視頻 等電聚焦 雙向電泳， 2DE 2. 離子交換層析： *親和層析法： ? 生物體內(nèi)有許多高分子化合物，具有和某些對應的專一分子可逆結合的特性。例如，酶蛋白和輔酶、抗原和抗體、激素與其受體等都具有這種特性。這種生物大分子和配基之間形成專一的可解離的絡合物的能力稱為親和力。 ?特點： 1. 高度特異性 ? 2. 可逆行 （四）根據(jù)配基特異性的分離純化方法 三、蛋白質的純度鑒定、含量測定和結構分析 （一）蛋白質的純度鑒定 1. 層析法： 層析純 2. 電泳法： 電泳純 3. 免疫化學法： 免疫純 （二）蛋白質含量測定 1. 凱氏定氮法 2. 福林（ Folin ） 酚試劑法（ Lowry法） 3. 雙縮脲法 4. 紫外分光光度法 5. BCA比色法 6. Bradford蛋白分析法 視頻：蛋白質含量測定 X射線衍射法和核磁共振技術 （ NMR)是研究蛋白質三維空間結構最準確的方法 。 （三）蛋白質結構鑒定技術 * 二級結構測定 通常采用 圓二色光譜 （ CD)測定溶液狀態(tài)下的蛋白質二級結構含量 。 ?螺旋的 CD峰有 222nm處的負峰 、208nm處的負峰和 198 nm處的正峰三個成分；而 ?折疊的 CD譜不很固定 。 第一次作業(yè)： ?氨基酸通式 ?氨基酸兩性解離定義 ?蛋白質一級結構定義 ?蛋白質二級結構類型 ?分子病 ?構象病 ?蛋白質的變性定義 第二次作業(yè)：
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