基因轉(zhuǎn)染技術(shù)ppt課件-資料下載頁
2025-05-12 07:53本頁面
【正文】 原代細(xì)胞； 操作較簡(jiǎn)便但 重復(fù)性差 細(xì)胞毒性較大；效率較低 DEAE葡聚糖轉(zhuǎn)染法 抑制核酸酶 內(nèi)吞作用 瞬時(shí)表達(dá) 操作相對(duì)簡(jiǎn)單；但需高濃度DNA ； DEAE葡聚糖濃度 ；溫育時(shí)間 陽離子脂質(zhì)體法 帶正電的脂質(zhì)體和核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 適用細(xì)胞廣；轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清和抗生素；相對(duì)具有一定毒性 陽離子聚合物 陽離子聚合物與核酸等形成穩(wěn)定的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 為最新一代的轉(zhuǎn)染試劑，具有操作簡(jiǎn)單；穩(wěn)定性好；轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低的特點(diǎn)；通過調(diào)節(jié)聚合物 /DNA比例優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。 5. 各種 轉(zhuǎn)染方法 比較 轉(zhuǎn)染方法 原理 應(yīng)用 特點(diǎn) 電穿孔法 細(xì)胞暴露在短暫的高場(chǎng)強(qiáng)電脈沖中，將誘導(dǎo)沿細(xì)胞膜的電壓差異，這種電壓差異會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜暫時(shí)穿孔。 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 所有細(xì)胞 適用細(xì)胞廣，但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)胞用量大， 需 根據(jù)不同細(xì)胞類型 優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件 顯微注射法或基因槍法 使用一根細(xì)針頭將 DNA， RNA或蛋白直接轉(zhuǎn)入細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核；基因槍使用高壓 microprojectile將大分子導(dǎo)入細(xì)胞。 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 所有細(xì)胞 適用細(xì)胞廣，細(xì)胞致死率高，操作復(fù)雜 病毒介導(dǎo)法 通過侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 特定宿主細(xì)胞 可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞；但攜帶基因不能太大；需考慮安全因素 磷酸鈣法 磷酸鈣 DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞。 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 不適用于原代細(xì)胞； 操作較簡(jiǎn)便但 重復(fù)性差 細(xì)胞毒性較大；效率較低 DEAE葡聚糖轉(zhuǎn)染法 抑制核酸酶 內(nèi)吞作用 瞬時(shí)表達(dá) 操作相對(duì)簡(jiǎn)單；但需高濃度DNA ； DEAE葡聚糖濃度 ；溫育時(shí)間 陽離子脂質(zhì)體法 帶正電的脂質(zhì)體和核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 適用細(xì)胞廣；轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清和抗生素；相對(duì)具有一定毒性 陽離子聚合物 陽離子聚合物與核酸等形成穩(wěn)定的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 為最新一代的轉(zhuǎn)染試劑，具有操作簡(jiǎn)單；穩(wěn)定性好；轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低的特點(diǎn)；通過調(diào)節(jié)聚合物 /DNA比例優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。 LOGO
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