基因診斷genediagppt課件-資料下載頁
2025-04-28 22:02本頁面
【正文】 是第 12 、 13和 61位密碼子 .如 90%的胰腺癌 ,50%的結(jié)直腸癌和 1/3的肺腺癌都在是 Kras基因第 12位密碼子突變 . ras癌基因點(diǎn)突變檢測方法 : :檢測速度快，靈敏度高，檢測樣品量大等優(yōu)點(diǎn)； 但點(diǎn)突變的檢出僅限于寡核苷酸探針的探測位點(diǎn)和突變類 型。 ： 根據(jù) PCR擴(kuò)增的目標(biāo) DNA片段在非變性凝膠電泳中遷移率，將突變基因檢測出來。該法檢測點(diǎn)突變更方便； 缺點(diǎn)：不能檢測出突變的具體位點(diǎn)和具體類型。 通過檢測癌基因和抑癌基因診斷腫瘤（續(xù)） 2 .P53基因與腫瘤 ： p53基因是最常被失活的抑癌基 因，失活的分子機(jī)制主要是基因突變，也有因?yàn)榛? 因表達(dá)異常而使 p53失活，約 50%以上的惡性腫瘤有 p53基因突變。 突變類型： 130? 290密碼子間常發(fā)生點(diǎn)突變，也有少量的插入或缺失突變。 基因檢測方法： ① PCRSSCP:可檢出有無突變 ② PCRRFLP:通過內(nèi)切酶位點(diǎn)的消 失或增加檢測 p53的基因突變。 三 .通過檢測腫瘤相關(guān)病毒診斷腫瘤 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種病毒與腫瘤的發(fā)生有關(guān)，它們有 DNA病毒，也有 RNA病毒 ,其中逆轉(zhuǎn)錄病毒(retrovirus)對動物細(xì)胞的致瘤作用已得到公認(rèn) .還發(fā)現(xiàn)一些與人腫瘤發(fā)生有關(guān)的病毒如 : Burkitt 淋巴瘤 人類乳頭瘤病毒 (HPV) 宮頸癌 通過檢測這些病毒的基因就可以幫助診斷相應(yīng)的腫瘤 . EB病毒 四 .通過檢測腫瘤標(biāo)記物基因或 mRNA診斷腫瘤 腫瘤標(biāo)志物 （ tumor marker)是由腫瘤組織細(xì)胞產(chǎn)生的，與腫瘤形成和發(fā)展相關(guān)的物質(zhì)，包括：腫瘤抗原，激素，酶和同工酶。僅存在腫瘤細(xì)胞中。 類型 ： 基因標(biāo)志 ：是指基因本身突變和異常表達(dá)，能反映癌前啟動階段的變化。 基因表型標(biāo)志 ：基因產(chǎn)物表達(dá)和調(diào)控異常，表現(xiàn)為所編碼的表達(dá)產(chǎn)物合成紊亂，產(chǎn)生胚胎性抗原，一般出現(xiàn)較晚。 基因診斷方法 ： ① 基因變異導(dǎo)致腫瘤標(biāo)記物的產(chǎn)生或含量改變，可選擇： PCRRFLP,PCRASO,PCR測序， PCRSSCP等技術(shù)。 ②導(dǎo)致腫瘤標(biāo)記物產(chǎn)生或含量改變分子機(jī)制不清楚，可用 RTPCR技術(shù)檢測腫瘤標(biāo)記物 mRNA的存在或含量的改變。如：端?；钚悦富钚员挥脕碜鳛槟[瘤標(biāo)記物，在腫瘤細(xì)胞中該酶的活性增高。 第五節(jié) 感染性疾病的基因診斷 每種病原體都有各自特異的遺傳物質(zhì) ,可以是 DNA,也可以是 基因 . 一 .病毒感染性疾病的診斷 : 目前采用免疫法檢測血清中病毒抗原 . HBV基因組包含 4個開放閱讀框 ,S、 C 、 P和 X區(qū) ,C區(qū)變異性小 ,是基因診斷采用的目標(biāo)部位 .在用 PCR檢測時可擴(kuò)增 HBV的特異核苷酸序列 ,通過 PCR產(chǎn)物的直接電泳分析 、或內(nèi)切酶譜分析、或點(diǎn)雜交、或 Southern印跡等結(jié)果作出判斷 .也可采用基因芯片技術(shù) . (SARS): 是由新型變異冠狀病毒 (SARSCoV)感染引起 . SARSCoV基因組為正鏈單股 RNA,有 11個開放閱讀框 ,基因組的特異保守序列為編碼 RNA聚合酶的序列 . 基因診斷方法 : ① 采用 RTPCR技術(shù)擴(kuò)增保守序列 ② DNA芯片 二 .診斷細(xì)菌感染性的疾病 用 PCR技術(shù)通過對致病細(xì)菌所含質(zhì)粒的特異序列 ,設(shè)計引物 ,檢測引起的疾病的細(xì)菌類型 . 第五節(jié) 基因診斷存在的問題與發(fā)展前景 一 .基因診斷技術(shù)應(yīng)用存在的問題 目前找到的致病基因不多 ,由多基因及基因 與環(huán)境互作所引發(fā)多種疾病的分子機(jī)制還不 清楚 設(shè)備條件 。操做人員 。污染造成的假陽性 . 二 .發(fā)展前景 結(jié)束語 基因診斷利用分子生物學(xué)技術(shù) ,從 DNA/RNA水平檢測基因的存在、分析基因的結(jié)構(gòu)變異和表達(dá)狀態(tài) ,從而對疾病作出診斷 .基因診斷的基本技術(shù)是核酸分子雜交和 PCR擴(kuò)增 .前者是最直接 、最準(zhǔn)確的基因診斷技術(shù) ,后者則是應(yīng)用前景最為廣闊的診斷技術(shù) .目前 ,基因診斷技術(shù)已廣泛地應(yīng)用到遺傳病、腫瘤和感染性疾病的診斷 .隨著醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展 ,基因診斷技術(shù)將會更加廣泛
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