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2025-05-12 08:04本頁(yè)面
【正文】 標(biāo)記。 5 ‘3 ‘ 5 ‘5 ‘5 ‘5 ‘5 ‘5 ‘5 ‘3 ‘3 ‘3 ‘3 ‘3 ‘3 ‘3 ‘Mg2+DNA 酶ⅠdATP 、 dCTPdG TP 、 [ α 32P] dTTP大腸桿菌聚合酶Ⅰ（全酶）* T* T* T* T* T* T用大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ進(jìn)行切口平移klenow片斷的主要用途 末端終止法測(cè)序； 合成 cDNA第二鏈； 雙鏈 DNA3?端標(biāo)記。 5 ?5 ?5 ?5 ?5 ?5 ?3 ?3 ?3 ?3 ?3 ?3 ?限制性?xún)?nèi)切酶Kle no w DN A 聚合酶[ α 32P] dNTP5 ?末端突出的 DNA3 ?末端標(biāo)記的 DNA32P 末端標(biāo)記的單鏈 DNA 探針32P 標(biāo)記的 DNA利用 K lenow 片段進(jìn)行 3 ?端標(biāo)記2 Tag DNA聚合酶 用途： PCR和測(cè)序 3 反轉(zhuǎn)錄酶（依賴(lài)于 RNA的 DNA聚合酶，RDDP） 能以單鏈 RNA或單鏈 DNA為模板 ， 按 5?→ 3?方向合成 DNA； 有 5? → 3?和 3? → 5?RNA外切酶活性 （ 3? → 5?外切活性又稱(chēng) RNA酶 H活性 ） 。 主要用途： 轉(zhuǎn)錄 mRNA成為 cDNA。 4 末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶 (末端轉(zhuǎn)移酶 ) 催化脫氧核苷酸一個(gè)個(gè)地依次加到 DNA3’末端 。 功能： 主要用途： ? 給載體或 cDNA加上互補(bǔ)的多聚體尾巴 ， 造成便于重組的人工粘性末端； ? 也可用于 DNA片段 3’端標(biāo)記 。 三、 DNA連接酶 作用：催化兩個(gè)獨(dú)立 DNA片斷 5‘磷酸基與 3’羥基之間形成磷酸二酯鍵 。 作用底物： 兩個(gè)不同片段雙鏈 DNA間存在的互補(bǔ)粘性末端； 兩個(gè)雙鏈 DNA分子間的平末端； 一條帶切口的雙鏈 DNA分子； 一條帶切口的 RNA/DNA雜交體。 四、 T4多核苷酸激酶 作用： 催化將 ATP的 γ 磷酸轉(zhuǎn)移到 DNA鏈的5‘末端上。 用途： 放射性標(biāo)記 DNA鏈的 5?端，用于 DNA測(cè)序等實(shí)驗(yàn)中； 用于連接反應(yīng)，使缺少 5?端磷酸的DNA片段或合成接頭磷酸化。 五、堿性磷酸酶 催化切除 DNA、 RNA和 dNTP上的 5‘磷酸基團(tuán)。 作用： 用途： 從 DNA片段上除去 5?磷酸以防自身連接； 在用 T4多核苷酸激酶和 32P標(biāo)記 5?末端前 ， 從 RNA或 DNA上除去 5?磷酸 。
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