熒光分析法ppt課件(2)-資料下載頁(yè)
2025-05-03 05:22本頁(yè)面
【正文】 換的去激發(fā)幾率 增加，熒光發(fā)射幾率變小。 一般地，隨溫度降低，溶液中熒光效率和熒 光強(qiáng)度將增大，并伴隨光譜的藍(lán)移。 因此，選擇低溫條件進(jìn)行熒光檢測(cè)將有利于 提高分析的靈敏度。 ⑶ pH的影響 ①對(duì)于含有酸性或堿性基團(tuán)的熒光物質(zhì)而言， 溶液的 pH將對(duì)這類(lèi)物質(zhì)的熒光強(qiáng)度產(chǎn)生較大的 影響。 如：在 pH7～ 12的溶液中，苯胺以分子形式存 在，產(chǎn)生藍(lán)色熒光； 當(dāng) pH＜ pH＞ 13時(shí)，苯胺以陽(yáng)離子、 陰離子形式存在，均無(wú)熒光。 ②溶液的 pH也影響金屬配合物的熒光性質(zhì)。 ⑷ 熒光猝滅 熒光猝滅： 熒光分子與溶劑或其它溶質(zhì)分子之間相互 作用，使熒光強(qiáng)度減弱的作用。 熒光猝滅劑： 能引起熒光強(qiáng)度降低的物質(zhì)。 ①動(dòng)態(tài)猝滅：被激發(fā)的熒光分子與猝滅劑發(fā)生碰撞，使熒 光分子以無(wú)輻射形式躍遷回到基態(tài)而使熒光猝滅。 ②靜態(tài)猝滅：熒光分子與猝滅劑形成不發(fā)光的基態(tài)配合物 從而使熒光猝滅。 氧是最常見(jiàn)的碰撞猝滅劑，因此在較嚴(yán)格的熒光實(shí)驗(yàn)室 中，需要除氧。 利用熒光的這兩種猝滅作用可以檢測(cè)猝滅劑的濃度。 ③ 自猝滅： 當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較大時(shí)，會(huì)產(chǎn)生 激發(fā)態(tài)的熒光分子與基態(tài)的熒光分子碰撞從而 使熒光猝滅。 因此在熒光測(cè)量中，熒光物質(zhì)的濃度不應(yīng)太 大。 ④當(dāng)物質(zhì)中存在能與熒光分子發(fā)生能量轉(zhuǎn)移的 物質(zhì)時(shí)，有時(shí)也使體系的熒光強(qiáng)度下降。 ⑸ 內(nèi)濾作用 內(nèi)濾作用： 當(dāng)溶液中存在能吸收熒光物質(zhì)的 激發(fā)光或發(fā)射光的物質(zhì)時(shí)，會(huì)使體系熒光減弱 的現(xiàn)象。 ⑹散射光 散射光對(duì)熒光測(cè)定有干擾，尤其是波長(zhǎng)比入 射光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的拉曼光。選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)波長(zhǎng) 可消除此干擾。 例：見(jiàn)書(shū) 224～ 225頁(yè) 第二節(jié) 熒光定量分析方法 一、熒光強(qiáng)度與物質(zhì)濃度的關(guān)系 I0 I F ① 在 ECl≤ 時(shí)， F = K C,溶液的熒光強(qiáng)度與溶 液中熒光物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系； ②在 ECl＞ ，溶液的熒光強(qiáng)度與溶液中熒光物 質(zhì)的濃度不呈線性關(guān)系； ③熒光分析法的測(cè)定靈敏度高。 二、定量分析法 ⒈ 校正曲線法 ⒉比例法 ⒊聯(lián)立方程式法 0SSX O XF F CF F C? ?? 00XXSSFFCCFF????第三節(jié) 熒光分光光度計(jì) 第四節(jié) 熒光分析新技術(shù)簡(jiǎn)介 ? 掌握內(nèi)容： ⒈ 分子熒光的發(fā)生過(guò)程； ⒉ 激發(fā)光譜和發(fā)射光譜； ⒊ 激發(fā)光譜的特征； ⒋ 影響熒光強(qiáng)度的內(nèi) 、 外部因素 。 ? 熟悉內(nèi)容： ⒈ 分子從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)的各種途徑； ⒉ 熒光壽命與熒光效率； ⒊ 熒光定量分析法 。 ? 了解內(nèi)容： ⒈ 熒光分光光度計(jì)與熒光分析新技術(shù) 。 習(xí)題： ? ，在去活化過(guò)程有哪些方式？ 分子熒光是如何發(fā)生的？ ， 激發(fā)光波長(zhǎng)若選擇在 320nm， 拉曼光波長(zhǎng) 360nm；若選在 350nm， 拉曼 光波長(zhǎng)為 400nm， 熒光波長(zhǎng)為 448nm， 則測(cè)定時(shí)選 擇激發(fā)光波長(zhǎng)應(yīng)為 nm， 熒光波長(zhǎng)應(yīng)為 nm。
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