實驗二酶促反應(yīng)動力學(xué)實驗-資料下載頁
2024-10-24 16:06本頁面
【導(dǎo)讀】反應(yīng)體系的條件必須嚴(yán)格控制。學(xué)反應(yīng)速度與無酶或酶失活情況下化學(xué)反應(yīng)速度的比較。反應(yīng)速度通常以測定單位時間內(nèi)產(chǎn)物生成量或底物的減少量。堿性磷酸酶的最適溫度是37℃。充分混勻，放置10分鐘，以管1為對照，于波長510nm處比色。酶活性計算及Km值求取。實驗所用的抑制劑是磷酸氫二鈉。抑制劑屬于何種類型。配制的各種試劑及反應(yīng)液必須混勻。加酶液要準(zhǔn)確快速，以保證各管酶促反應(yīng)同時開。加入酶液后要立即計時，計時要準(zhǔn)確。
【正文】 pH10碳酸鈉緩沖液（ ml） 0 10/16 10/14 10/12 10/10 10/8 10/6 10/4 10/2 加入酶液后 立即 計時，各管混勻后在 37 ℃ 準(zhǔn)確 保溫 15分鐘。 保溫結(jié)束， 立即 加入 。 各管分別加入 % 4氨基安替比林 ml及 ％ 鐵氰化鉀 ml，充分混勻，放置 10分鐘，以管 1為對照，于波長 510 nm處比色。 ? 酶活性計算及 Km值求取 在 37176。 C下保溫 15分鐘產(chǎn)生 1mg酚為 1個酶活性單位，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出釋放的酚量（ ug），以此計算處各管的酶活性（ v）。 以 1/v為縱坐標(biāo)、 1/S為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，求出酶的 Km值，并判斷該抑制劑屬于何種類型。 A v 1/v 1/S Km＝？ 該抑制劑為？ 注意事項： ? 配制的各種試劑及反應(yīng)液必須混勻。 ? 加酶液要準(zhǔn)確快速，以保證各管酶促反應(yīng)同時開始。 ? 加入酶液后要立即計時，計時要準(zhǔn)確。 ? % 4氨基安替比林 ml及 ％ 鐵氰化鉀 ml要依次加入，充分混勻，放置 10分鐘，放置時間不可過長。
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