【正文】 體預存特異性抗體阻止病原微生物進入細胞是特別必要的(6)能口服,能有效誘導黏膜免疫.(7)為大量人群應用,疫苗必須廉價.(8)易于生產(chǎn),貯存及服務(wù)不需冷藏.第八章 :瘧疾、血吸蟲、利什曼原蟲、絲蟲、錐蟲.,人瘧疾是虐原蟲引起的地方性傳染病,它是熱帶寄生蟲病中最嚴重的一種.,其病原體為虐原蟲.,經(jīng)在肝臟發(fā)育繁殖引起的肝、脾及腎臟等器官的損害.、血孢子目、虐原蟲屬,是由按蚊傳播的脊椎動物寄生蟲.,瘧疾疫苗可分為3種,即抗紅前期原蟲疫苗、抗紅內(nèi)期原蟲疫苗和傳播阻斷疫苗.,唯有紅內(nèi)期原蟲能使人體致病乃至死亡,人們期望的紅內(nèi)期疫苗由兩種:一種是完全有效的疫苗,這種疫苗能產(chǎn)生比天然感染更強的免疫保護力。另一種是有一定程度免疫保護力的疫苗,能使原蟲血癥控制在很低的水平..,也可以是編碼抗原決定簇的一段核酸系列.(ssP2)是一種含有826個氨基酸殘基的保護性免疫靶抗原,孢子體表面和紅外期正在生長的蟲體膜上具有這種抗原,用于制備孢子體表面蛋白2基因苗. ,孢子表面、蟲體原生質(zhì)膜和正在生長的紅內(nèi)蟲體的空泡膜上都有廣泛的分布.,存在于虐原蟲感染過的肝細胞空泡和紅細胞膜上,能被NYLS3單克隆抗體識別.:(1)低毒活性野生型疫苗 (2)至弱病原疫苗(3)滅活或死病原疫苗(4)亞單位疫苗(5)合成的或重組的抗原疫苗。(6)抗獨特型Ab疫苗(7)DNA疫苗.:(1)多數(shù)寄生蟲為多細胞生物,寄生蟲抗原成分非常復雜,很難找準特定保護性抗原,保護性免疫應答機制不清(2)寄生蟲抗原免疫所誘導的大都為部分保護性免疫力。(3)寄生蟲形成種種逃避宿主免疫應答的辦法,其機制尚待闡明.(4)寄生蟲一般引起慢性長期感染,病期常因寄生蟲在其生活史中形態(tài)的不同而存在許多階段,所以寄生蟲不僅存在種特異性,所產(chǎn)生的保護性免疫力需要保護一個以上的感染階段.:(1)經(jīng)輻射減毒疫苗產(chǎn)生免疫保護的機制的鑒別(2)引起這些保護性免疫反應的靶蛋白一寄生蟲蛋白的識別(3)這些能產(chǎn)生保護性免疫反應的靶蛋白首先在齒動物身上進行試驗,然后再過度到人體實驗,由于對大量人群進行此項實驗尚有困難,于是設(shè)想研制亞單位疫苗,并使其產(chǎn)生的免疫保護作用與經(jīng)輻射減毒孢子疫苗產(chǎn)生的免疫保護作用相似.:(1)激發(fā)機體全面的免疫應答,這種保護性免疫應答對不同亞型的病原體有交叉抵御作用(2)基因疫苗表達的抗原接近天然構(gòu)象,抗原性強.(3)制備簡單,成本低廉,易進行規(guī)模化生生產(chǎn),且運輸保存方便.(4)聯(lián)合免疫,可將編碼不同抗原的基因構(gòu)建在同一個質(zhì)粒中,或?qū)⒉煌乖虻亩喾N質(zhì)粒聯(lián)合應用,制備多價DNA疫苗.(5)基因疫苗既有預防作用也有治療作用. :(1)血吸蟲是寄生于血管內(nèi)吸蟲的總稱,屬于裂體科,故又稱裂體吸蟲.(2)成蟲寄生于人及多種哺乳動物體內(nèi),門脈一腸系膜靜脈系統(tǒng),以血液和血管內(nèi)皮細胞為食物,蟲體可逆血流移行到腸黏膜下層的小靜脈末梢,雌蟲在此處產(chǎn)卵.(3)蟲卵的去路和體內(nèi)發(fā)育(4)蟲卵隨糞便排出體外,入水後很快孵出毛蚴,主動侵入中間宿主.(5)無囊蚴期,尾蚴是感染階段. :(1)蟲原性疫苗,包括死疫苗、,攻擊感染後減蟲率可達’70％,甚至90％以上,但蟲原性疫苗受到外源限制,不易保存,現(xiàn)場應用存在困難,此外,免疫原所致病理損害和安全性問題限制了它的進一步研制和應用(2)基因工程疫苗.(3)核酸疫苗,:DNA疫苗研制工藝簡單,可大量生產(chǎn),成木低,貯藏方便,今年來國內(nèi)由3家實驗室進行了研制與動物實驗,.(4)合成多肽抗原疫苗,通過對靶抗原氨基酸序列及其表位的分析,設(shè)計合成具有多個免疫效應位點的分子抗原肽,誘導了保護性反應,初步動物實驗有較好的保護性效果.(5)抗獨特型抗體疫苗,作為抗原的模擬物Ab2,免疫動物后,產(chǎn)生的抗Ab2獨特型抗體就與抗原發(fā)生結(jié)合,從而產(chǎn)生保護作用.:(1)死疫苗研究階段,采用不同的抗原制備方法,觀察以成蟲、蟲卵、尾蚴及排泄分泌物等免疫后的抗攻擊感染效果.(2)活疫苗研究階段,包括異種和同種減弱活疫苗免疫,采用輻射性至弱的活尾蚴,盡管免疫動物可以產(chǎn)生高保護性,但是由于潛在的危險性和生產(chǎn)困難,推廣應用受限.(3)分子疫苗研究階段,基因工程可以大量生產(chǎn)重組抗原分子或具有保護性抗原表位的肽段,制劑純度高,副作用小,. :(1)血吸蟲期特異性抗原基因免疫學研究表面,尋找階段特異性抗原,.(2)血吸蟲特異性基因,血吸蟲雌蟲絕對依賴雄蟲才能發(fā)育成熟,以減輕雌蟲性成熟的程度或是產(chǎn)卵,則血吸蟲的生活史將完全被阻斷.(3)血吸蟲肌抗原基因,97103是脊椎動物的肌原纖維蛋白,是一種具有潛在疫苗價值的血吸蟲非表面抗原.(4)血吸蟲酶性抗原基因,酶性抗原作為日本血吸蟲疫苗的候選靶抗原成分,是今年來研究較活躍的一個領(lǐng)域,已發(fā)現(xiàn)數(shù)種抗原性酶如酸性巰基蛋白水解酶、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶等.:(1)副肌球蛋白,是一種糖蛋白,位于日本血吸蟲蟲、尾蚴、童蟲的肌肉層.(2)照射減毒抗原,Irv5是曼氏血吸蟲肌球蛋白片段中的一個相對分子質(zhì)量為62x103的重組蛋白,重組的Irv5能被紫外線至弱尾蚴免疫鼠血清識別,與慢性感染鼠血清也能發(fā)生弱反應,但免疫小鼠未取得免疫保護作用.(3)磷酸丙糖異構(gòu)酶(TPI),是一種參與血吸蟲生命代謝活動的重要功能分子,催化磷酸二羥基丙酮分子二磷酸甘油醛之間的可逆反應,是血吸蟲糖代謝的一個關(guān)鍵酶.(4)脂肪酸結(jié)合蛋白基因(FABP),血紅蛋白被血吸蟲腸管中的蛋白水解酶大量降解(6)卵黃鐵蛋白基因,是血吸蟲雌蟲特異基因的產(chǎn)物,在卵黃腺高水平表達,是一種具有性別和組織特異的發(fā)育調(diào)節(jié)蛋白.(7)熱休克蛋白(HSP),是生物在不利情況下產(chǎn)生的保護機體的蛋白,又稱“看家蛋白”具有重要的的生理作用,如促進器官組織的正常發(fā)育,作為分子伴侶參與蛋白質(zhì)的折疊、裝備、降解、修復和轉(zhuǎn)移,以保護細胞不受機體外環(huán)境不良條件的損害.(8)新基因的發(fā)現(xiàn),將生物信息學技術(shù)、表達序列標簽法和步移法測序相結(jié)合,構(gòu)建cDNA文庫,隨機挑取重組陽性口令進行測序,對部分序列進行步移法測序,獲取全長cDNA,對同源性高的基因進行核苷酸和氨基酸水平的同源性比較,從而獲得新基因.:(1)血吸蟲存在免疫逃避機制,血吸蟲可以多種方式逃避的免疫攻擊．,包括獲得宿主抗原、蟲體表面抗原或表達喪失或抑制宿主免疫反應等.(2)在動物模型和人體內(nèi)的免疫機制差異,雖然血吸蟲抗原誘導的效應機制已在實驗模型中得到了闡明,人類免疫效應的體外實驗和流行病學調(diào)查結(jié)果也支持這些結(jié)論,但究竟那種動物模型的免疫效應更與人接近,仍不完全清楚,且由于實際的原因,要在人體體內(nèi)闡明對血吸蟲的獲得性免疫是很困難的.(3)免疫效應機制的選擇誘導,已知宿主體液的保護效應抗同一分子甚至同一表位時,效應抗體和阻斷抗體可產(chǎn)生不同的免疫表達,影響宿主的最佳抗體的表達.(4)抗原表位的鑒定,鑒定血吸蟲抗原普遍采用的是產(chǎn)生能被動轉(zhuǎn)移抗性抗體或含T細胞豐富的脾細胞. (5)糖基表位,已有研究表明多糖是未成熟蟲卵和童蟲的重要抗原,但由于分離純化操作上的困難,有關(guān)血吸蟲多糖的免疫原性的研究遠不如蛋白質(zhì)那樣深.(6)保護水平,盡管已有多種天然的或充足的抗原分子在動物實驗那種能誘導一定保護性免疫力,但現(xiàn)在還沒有發(fā)現(xiàn)一種人們一直希望找到的“超級”抗原能接近至弱尾蚴感染誘導哦啊的保護水平.(7)超敏反應,體液免疫作為血吸蟲的主要效應機制,激發(fā)的抗體IgE和有過敏特性的IgG亞類等具有超敏反應特性,從人用疫苗安全性的角度考慮,如何使疫苗抗原既能產(chǎn)生較強的免疫保護效應,又不至于激發(fā)有害作用的超敏反應也是一個需要考慮問題.第九章 :是指在已感染病原生物或患某些疾病的機體中,通過誘生機體的特異性或非特異性免疫應答,以達到治療或防止疾病惡化的天然、AI修飾合成或用基因重組技術(shù)表達的產(chǎn)品或生物制品.(AID):是臨床常見、治療困難的一大類疾病,是由于機體識別“自我”的耐受機制在某些情況下遭到破壞,機體免疫系統(tǒng)針對自身抗原產(chǎn)生過度應答,破壞正常組織結(jié)構(gòu),從而導致一系列病變.:是由細胞毒T細胞介導的、侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)的慢性進行AID.:是由T細胞調(diào)節(jié)關(guān)節(jié)失調(diào)引起的疾病,是由乙酰膽堿受體抗體介導的AID,這些抗體通過減少肌肉中AchR的數(shù)量或阻礙乙酰膽堿與受體結(jié)合,影響突觸傳遞而使骨骼肌變得無力,抗乙酰膽堿受體的抗體發(fā)揮病理效應.:是一種累及多個器官或系統(tǒng)的、由多種自身抗體介導的AID,其發(fā)病涉及遺傳和環(huán)境等多種因素.:,再用一定方法免疫動物或人體,使其在宿主體內(nèi)表達相應的蛋白產(chǎn)物并刺激產(chǎn)生細胞免疫應答和特異性免疫應答. :是通過提高機體的非特異性免疫應答以達到協(xié)助藥物清除病原微生物的目的. :于提高誘生針對某一病原微生物抗原的特異性免疫應答,包括細胞免疫及體液免疫.:又稱核酸疫苗、基因疫苗,是將編碼某種抗原蛋白的外源性基因直接導入動物體細胞內(nèi),并通過宿主細胞的表達系統(tǒng)合成抗原蛋白,誘導宿主產(chǎn)生對該抗原蛋白的免疫應答,已達到預防和治療疾病的目的,這種免疫制劑稱為DNA疫苗,這種免疫稱為核酸免疫、基因免疫、DNA介導的免疫以及遺傳免疫等.:微生物的持續(xù)性感染日益受到重視?；蛑亟M技術(shù)的發(fā)展與應用。免疫學理論的發(fā)展..,可分為細菌型治療性疫苗、病毒型治療疫苗、腫瘤型治療疫苗、自身免疫病治療性疫苗.、重組蛋白型治療疫苗、天然蛋白型治療疫苗、免疫復合物型治療疫苗、嵌合型治療疫苗.,可以控制,故治療性疫苗僅限于少數(shù)幾種慢性感染,如結(jié)合病、麻風病及布氏病等.、慢性乙肝治療性疫苗、人類免疫缺陷病毒感染的治療性疫苗.,I型主要引起皮膚、黏膜感染,II型主要引起生殖器、肛門感染.,目前尚無有效的治愈方法,而且死率極高,AIDS的病原體是人類免疫缺陷病毒,它是在首次發(fā)現(xiàn)艾滋病例2年后才分離成功.(HIV)感染導致的慢性進行性免疫缺陷,、病毒受體阻斷抗體、自然殺傷細胞、特異性殺傷細胞等,HIV仍可在免疫系統(tǒng)中造成進行性損傷而導致死亡.,感染人及動物的皮膚或黏膜上皮細胞..,腫瘤是機體中的正常細胞在各種外部致病因素和內(nèi)部遺傳因素長期共同影響和作用下,發(fā)生過度增生和異常分化所形成的物質(zhì).,主要有腫瘤細胞和樹突狀細胞疫苗,腫瘤細胞中包含著光譜的腫瘤抗原,但缺乏協(xié)同刺激分子以有效識別和激活免疫細胞.:(1)預防性疫苗的接種對象是健康群體,對易感染人群均可應用,主要起免疫預防作用,它對機體大多無病理損傷,使用安全可靠。而治療性疫苗的使用對象是感染者,或免疫應答低下的患者,故疫苗法屬免疫治療.(2)治療性疫苗與預防性疫苗使用的目的不同,后者是為了防病,二前者是為了治療或防止病情惡化.(3)治療性疫苗的另一個突出特點是應用時必須考慮適應癥與禁忌癥,也可根據(jù)需要進行各種組合和調(diào)整.:(1)免疫原的選擇與優(yōu)化,治療性疫苗所用免疫原的選擇在深入研究治療對象的免疫應答基礎(chǔ)上選定,根據(jù)病原學的特點,一般選用的微生物抗原應為能引起中和性抗體及可誘生殺傷T細胞免疫應答的抗原。但還必須考慮患者的免疫應答,?？蛇x擇相應的或類似的抗原進行免疫或脫敏. (2)動物模型的建立,為考核治療性疫苗的療效,需要建立模擬人體感染的動物模型,單至今微生物持續(xù)性感染的動物模型還很少,或是在非靈長類動物中尋找類似感染,如類似人乙肝病毒的土撥鼠或鴨乙肝動物模型。另一種是建立有病毒基因整合的轉(zhuǎn)基因動物,類似天然的持續(xù)感染,但因是人工將病毒基因整合入鼠胚胎所獲得的動物,畢竟與天然的病毒持續(xù)感染不同.(3)臨床應用的重要性,因此常伴有免疫低或其他病理變化,在使用疫苗時需要預防性疫苗更為慎重,選擇對象時還可能伴有免疫損傷而出現(xiàn)不良反應,需要醫(yī)生協(xié)同進行判斷:核酸疫苗的免疫機理概括為3個方面,含病原體的DNA疫苗被導入宿主的肌細胞或皮膚細胞后,可在肌細胞內(nèi)表達病原體的蛋白質(zhì)抗原,經(jīng)加工后形成的多肽抗原可與宿主細胞．MHCI類和MHCII類分子結(jié)合,被提呈給宿主的免疫識別系統(tǒng),目的基因產(chǎn)物從肌細胞分泌出來后,被巨噬細胞或樹突狀細胞吞噬、提呈,分別在MHC I和MHC 11分子的限制下,誘導CTL前體、:樹突狀細胞是核酸免疫過程中的最重要的抗原提呈細胞,從而調(diào)節(jié)T細胞、B細胞功能,肌細胞和抗原提呈細胞均被感染,引起細胞亞群的同時活化,從而產(chǎn)生特異性細胞免疫應答.:(1)基因疫苗在接種后,蛋白抗原在宿主細胞內(nèi)表達,加工處理過程與病毒的自然感染相似,抗原提呈過程也相同,因而可以誘導產(chǎn)生細胞免疫和體液免疫.(2)因外源基因在體內(nèi)存在較長時間,不斷表達外源蛋白,持續(xù)給免疫系統(tǒng)提供刺激,因而非常方便(3)DNA質(zhì)粒性質(zhì)相對穩(wěn)定,疫苗在制成千粉后能在室溫保存很長時間,因此運輸和貯存非常方便(4),就可以轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中進行大規(guī)模擴增并純化出來,而且這種生產(chǎn)工藝建立起來以后,幾乎對所有質(zhì)粒都通用.(5)成本低,而且大規(guī)模生長簡單,所以成本大大降低.(6),而且沒有載體或佐劑也可發(fā)揮作用(7)可制成多價疫苗,產(chǎn)生聯(lián)合免疫,幾乎任何DNA片段都可以插入到DNA質(zhì)粒中作成疫苗,而一個DNA質(zhì)?？梢酝瑫r容納一個以上的抗原基因,包括一些可以影響免疫反應的分子的基因(8)由于質(zhì)粒DNA幾乎無免疫原性,.(9)可重復使用.(10)安全穩(wěn)定,在迄今所作的核酸免疫試驗中未檢測到抗體DNA的抗體,死疫苗釋放的異種蛋白則可引起一定的副作用.:(1)核酸疫苗的免疫機制尚不太清楚。(2)核酸疫苗的免疫效果在不同動物個體中差異較大,有些疫苗在小個體的動物中免疫和保護效果較好,而在大個體動物中效果較差,確切原因尚不清楚(3)核酸疫苗畢竟是一種基因疫苗,其安全性尚需全面、長期觀察。(4)核酸疫苗的大量制備、純化工藝中尚存在許多理論和實踐上較難解決的問題(5)核酸疫苗的用量和接種次數(shù)、間隔時間,接種途徑、方法和部位。(6)核酸疫苗對同種病毒的交叉保護作用如何(7)疫苗接受者的接種年齡(8)核酸疫苗在體內(nèi)表達的控制。(9)抗體維持的時間,以及如何終止核酸疫苗的作用等.:質(zhì)粒純化的主要目的是去除帶有抗原基因的表達質(zhì)粒DNA,再通過培養(yǎng)含有表達質(zhì)粒的工程苗使質(zhì)粒擴增,最后利用一系列的純化方法獲得純度較高的質(zhì)粒.(1)聚乙二醇(PEG)沉淀法,基本原理:聚乙二醇是一類高分子化合物,在不同的鹽離子溶液中,可結(jié)合形成孔徑不同的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),利用超螺旋