【正文】 體預(yù)存特異性抗體阻止病原微生物進(jìn)入細(xì)胞是特別必要的(6)能口服,能有效誘導(dǎo)黏膜免疫.(7)為大量人群應(yīng)用,疫苗必須廉價(jià).(8)易于生產(chǎn),貯存及服務(wù)不需冷藏.第八章 :瘧疾、血吸蟲(chóng)、利什曼原蟲(chóng)、絲蟲(chóng)、錐蟲(chóng).,人瘧疾是虐原蟲(chóng)引起的地方性傳染病,它是熱帶寄生蟲(chóng)病中最嚴(yán)重的一種.,其病原體為虐原蟲(chóng).,經(jīng)在肝臟發(fā)育繁殖引起的肝、脾及腎臟等器官的損害.、血孢子目、虐原蟲(chóng)屬,是由按蚊傳播的脊椎動(dòng)物寄生蟲(chóng).,瘧疾疫苗可分為3種,即抗紅前期原蟲(chóng)疫苗、抗紅內(nèi)期原蟲(chóng)疫苗和傳播阻斷疫苗.,唯有紅內(nèi)期原蟲(chóng)能使人體致病乃至死亡,人們期望的紅內(nèi)期疫苗由兩種:一種是完全有效的疫苗,這種疫苗能產(chǎn)生比天然感染更強(qiáng)的免疫保護(hù)力。另一種是有一定程度免疫保護(hù)力的疫苗,能使原蟲(chóng)血癥控制在很低的水平..,也可以是編碼抗原決定簇的一段核酸系列.(ssP2)是一種含有826個(gè)氨基酸殘基的保護(hù)性免疫靶抗原,孢子體表面和紅外期正在生長(zhǎng)的蟲(chóng)體膜上具有這種抗原,用于制備孢子體表面蛋白2基因苗. ,孢子表面、蟲(chóng)體原生質(zhì)膜和正在生長(zhǎng)的紅內(nèi)蟲(chóng)體的空泡膜上都有廣泛的分布.,存在于虐原蟲(chóng)感染過(guò)的肝細(xì)胞空泡和紅細(xì)胞膜上,能被NYLS3單克隆抗體識(shí)別.:(1)低毒活性野生型疫苗 (2)至弱病原疫苗(3)滅活或死病原疫苗(4)亞單位疫苗(5)合成的或重組的抗原疫苗。(6)抗獨(dú)特型Ab疫苗(7)DNA疫苗.:(1)多數(shù)寄生蟲(chóng)為多細(xì)胞生物,寄生蟲(chóng)抗原成分非常復(fù)雜,很難找準(zhǔn)特定保護(hù)性抗原,保護(hù)性免疫應(yīng)答機(jī)制不清(2)寄生蟲(chóng)抗原免疫所誘導(dǎo)的大都為部分保護(hù)性免疫力。(3)寄生蟲(chóng)形成種種逃避宿主免疫應(yīng)答的辦法,其機(jī)制尚待闡明.(4)寄生蟲(chóng)一般引起慢性長(zhǎng)期感染,病期常因寄生蟲(chóng)在其生活史中形態(tài)的不同而存在許多階段,所以寄生蟲(chóng)不僅存在種特異性,所產(chǎn)生的保護(hù)性免疫力需要保護(hù)一個(gè)以上的感染階段.:(1)經(jīng)輻射減毒疫苗產(chǎn)生免疫保護(hù)的機(jī)制的鑒別(2)引起這些保護(hù)性免疫反應(yīng)的靶蛋白一寄生蟲(chóng)蛋白的識(shí)別(3)這些能產(chǎn)生保護(hù)性免疫反應(yīng)的靶蛋白首先在齒動(dòng)物身上進(jìn)行試驗(yàn),然后再過(guò)度到人體實(shí)驗(yàn),由于對(duì)大量人群進(jìn)行此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)尚有困難,于是設(shè)想研制亞單位疫苗,并使其產(chǎn)生的免疫保護(hù)作用與經(jīng)輻射減毒孢子疫苗產(chǎn)生的免疫保護(hù)作用相似.:(1)激發(fā)機(jī)體全面的免疫應(yīng)答,這種保護(hù)性免疫應(yīng)答對(duì)不同亞型的病原體有交叉抵御作用(2)基因疫苗表達(dá)的抗原接近天然構(gòu)象,抗原性強(qiáng).(3)制備簡(jiǎn)單,成本低廉,易進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn),且運(yùn)輸保存方便.(4)聯(lián)合免疫,可將編碼不同抗原的基因構(gòu)建在同一個(gè)質(zhì)粒中,或?qū)⒉煌乖虻亩喾N質(zhì)粒聯(lián)合應(yīng)用,制備多價(jià)DNA疫苗.(5)基因疫苗既有預(yù)防作用也有治療作用. :(1)血吸蟲(chóng)是寄生于血管內(nèi)吸蟲(chóng)的總稱,屬于裂體科,故又稱裂體吸蟲(chóng).(2)成蟲(chóng)寄生于人及多種哺乳動(dòng)物體內(nèi),門脈一腸系膜靜脈系統(tǒng),以血液和血管內(nèi)皮細(xì)胞為食物,蟲(chóng)體可逆血流移行到腸黏膜下層的小靜脈末梢,雌蟲(chóng)在此處產(chǎn)卵.(3)蟲(chóng)卵的去路和體內(nèi)發(fā)育(4)蟲(chóng)卵隨糞便排出體外,入水後很快孵出毛蚴,主動(dòng)侵入中間宿主.(5)無(wú)囊蚴期,尾蚴是感染階段. :(1)蟲(chóng)原性疫苗,包括死疫苗、,攻擊感染後減蟲(chóng)率可達(dá)’70％,甚至90％以上,但蟲(chóng)原性疫苗受到外源限制,不易保存,現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用存在困難,此外,免疫原所致病理?yè)p害和安全性問(wèn)題限制了它的進(jìn)一步研制和應(yīng)用(2)基因工程疫苗.(3)核酸疫苗,:DNA疫苗研制工藝簡(jiǎn)單,可大量生產(chǎn),成木低,貯藏方便,今年來(lái)國(guó)內(nèi)由3家實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了研制與動(dòng)物實(shí)驗(yàn),.(4)合成多肽抗原疫苗,通過(guò)對(duì)靶抗原氨基酸序列及其表位的分析,設(shè)計(jì)合成具有多個(gè)免疫效應(yīng)位點(diǎn)的分子抗原肽,誘導(dǎo)了保護(hù)性反應(yīng),初步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有較好的保護(hù)性效果.(5)抗獨(dú)特型抗體疫苗,作為抗原的模擬物Ab2,免疫動(dòng)物后,產(chǎn)生的抗Ab2獨(dú)特型抗體就與抗原發(fā)生結(jié)合,從而產(chǎn)生保護(hù)作用.:(1)死疫苗研究階段,采用不同的抗原制備方法,觀察以成蟲(chóng)、蟲(chóng)卵、尾蚴及排泄分泌物等免疫后的抗攻擊感染效果.(2)活疫苗研究階段,包括異種和同種減弱活疫苗免疫,采用輻射性至弱的活尾蚴,盡管免疫動(dòng)物可以產(chǎn)生高保護(hù)性,但是由于潛在的危險(xiǎn)性和生產(chǎn)困難,推廣應(yīng)用受限.(3)分子疫苗研究階段,基因工程可以大量生產(chǎn)重組抗原分子或具有保護(hù)性抗原表位的肽段,制劑純度高,副作用小,. :(1)血吸蟲(chóng)期特異性抗原基因免疫學(xué)研究表面,尋找階段特異性抗原,.(2)血吸蟲(chóng)特異性基因,血吸蟲(chóng)雌蟲(chóng)絕對(duì)依賴雄蟲(chóng)才能發(fā)育成熟,以減輕雌蟲(chóng)性成熟的程度或是產(chǎn)卵,則血吸蟲(chóng)的生活史將完全被阻斷.(3)血吸蟲(chóng)肌抗原基因,97103是脊椎動(dòng)物的肌原纖維蛋白,是一種具有潛在疫苗價(jià)值的血吸蟲(chóng)非表面抗原.(4)血吸蟲(chóng)酶性抗原基因,酶性抗原作為日本血吸蟲(chóng)疫苗的候選靶抗原成分,是今年來(lái)研究較活躍的一個(gè)領(lǐng)域,已發(fā)現(xiàn)數(shù)種抗原性酶如酸性巰基蛋白水解酶、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶等.:(1)副肌球蛋白,是一種糖蛋白,位于日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)、尾蚴、童蟲(chóng)的肌肉層.(2)照射減毒抗原,Irv5是曼氏血吸蟲(chóng)肌球蛋白片段中的一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量為62x103的重組蛋白,重組的Irv5能被紫外線至弱尾蚴免疫鼠血清識(shí)別,與慢性感染鼠血清也能發(fā)生弱反應(yīng),但免疫小鼠未取得免疫保護(hù)作用.(3)磷酸丙糖異構(gòu)酶(TPI),是一種參與血吸蟲(chóng)生命代謝活動(dòng)的重要功能分子,催化磷酸二羥基丙酮分子二磷酸甘油醛之間的可逆反應(yīng),是血吸蟲(chóng)糖代謝的一個(gè)關(guān)鍵酶.(4)脂肪酸結(jié)合蛋白基因(FABP),血紅蛋白被血吸蟲(chóng)腸管中的蛋白水解酶大量降解(6)卵黃鐵蛋白基因,是血吸蟲(chóng)雌蟲(chóng)特異基因的產(chǎn)物,在卵黃腺高水平表達(dá),是一種具有性別和組織特異的發(fā)育調(diào)節(jié)蛋白.(7)熱休克蛋白(HSP),是生物在不利情況下產(chǎn)生的保護(hù)機(jī)體的蛋白,又稱“看家蛋白”具有重要的的生理作用,如促進(jìn)器官組織的正常發(fā)育,作為分子伴侶參與蛋白質(zhì)的折疊、裝備、降解、修復(fù)和轉(zhuǎn)移,以保護(hù)細(xì)胞不受機(jī)體外環(huán)境不良條件的損害.(8)新基因的發(fā)現(xiàn),將生物信息學(xué)技術(shù)、表達(dá)序列標(biāo)簽法和步移法測(cè)序相結(jié)合,構(gòu)建cDNA文庫(kù),隨機(jī)挑取重組陽(yáng)性口令進(jìn)行測(cè)序,對(duì)部分序列進(jìn)行步移法測(cè)序,獲取全長(zhǎng)cDNA,對(duì)同源性高的基因進(jìn)行核苷酸和氨基酸水平的同源性比較,從而獲得新基因.:(1)血吸蟲(chóng)存在免疫逃避機(jī)制,血吸蟲(chóng)可以多種方式逃避的免疫攻擊．,包括獲得宿主抗原、蟲(chóng)體表面抗原或表達(dá)喪失或抑制宿主免疫反應(yīng)等.(2)在動(dòng)物模型和人體內(nèi)的免疫機(jī)制差異,雖然血吸蟲(chóng)抗原誘導(dǎo)的效應(yīng)機(jī)制已在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械玫搅岁U明,人類免疫效應(yīng)的體外實(shí)驗(yàn)和流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果也支持這些結(jié)論,但究竟那種動(dòng)物模型的免疫效應(yīng)更與人接近,仍不完全清楚,且由于實(shí)際的原因,要在人體體內(nèi)闡明對(duì)血吸蟲(chóng)的獲得性免疫是很困難的.(3)免疫效應(yīng)機(jī)制的選擇誘導(dǎo),已知宿主體液的保護(hù)效應(yīng)抗同一分子甚至同一表位時(shí),效應(yīng)抗體和阻斷抗體可產(chǎn)生不同的免疫表達(dá),影響宿主的最佳抗體的表達(dá).(4)抗原表位的鑒定,鑒定血吸蟲(chóng)抗原普遍采用的是產(chǎn)生能被動(dòng)轉(zhuǎn)移抗性抗體或含T細(xì)胞豐富的脾細(xì)胞. (5)糖基表位,已有研究表明多糖是未成熟蟲(chóng)卵和童蟲(chóng)的重要抗原,但由于分離純化操作上的困難,有關(guān)血吸蟲(chóng)多糖的免疫原性的研究遠(yuǎn)不如蛋白質(zhì)那樣深.(6)保護(hù)水平,盡管已有多種天然的或充足的抗原分子在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)欠N能誘導(dǎo)一定保護(hù)性免疫力,但現(xiàn)在還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)一種人們一直希望找到的“超級(jí)”抗原能接近至弱尾蚴感染誘導(dǎo)哦啊的保護(hù)水平.(7)超敏反應(yīng),體液免疫作為血吸蟲(chóng)的主要效應(yīng)機(jī)制,激發(fā)的抗體IgE和有過(guò)敏特性的IgG亞類等具有超敏反應(yīng)特性,從人用疫苗安全性的角度考慮,如何使疫苗抗原既能產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫保護(hù)效應(yīng),又不至于激發(fā)有害作用的超敏反應(yīng)也是一個(gè)需要考慮問(wèn)題.第九章 :是指在已感染病原生物或患某些疾病的機(jī)體中,通過(guò)誘生機(jī)體的特異性或非特異性免疫應(yīng)答,以達(dá)到治療或防止疾病惡化的天然、AI修飾合成或用基因重組技術(shù)表達(dá)的產(chǎn)品或生物制品.(AID):是臨床常見(jiàn)、治療困難的一大類疾病,是由于機(jī)體識(shí)別“自我”的耐受機(jī)制在某些情況下遭到破壞,機(jī)體免疫系統(tǒng)針對(duì)自身抗原產(chǎn)生過(guò)度應(yīng)答,破壞正常組織結(jié)構(gòu),從而導(dǎo)致一系列病變.:是由細(xì)胞毒T細(xì)胞介導(dǎo)的、侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)的慢性進(jìn)行AID.:是由T細(xì)胞調(diào)節(jié)關(guān)節(jié)失調(diào)引起的疾病,是由乙酰膽堿受體抗體介導(dǎo)的AID,這些抗體通過(guò)減少肌肉中AchR的數(shù)量或阻礙乙酰膽堿與受體結(jié)合,影響突觸傳遞而使骨骼肌變得無(wú)力,抗乙酰膽堿受體的抗體發(fā)揮病理效應(yīng).:是一種累及多個(gè)器官或系統(tǒng)的、由多種自身抗體介導(dǎo)的AID,其發(fā)病涉及遺傳和環(huán)境等多種因素.:,再用一定方法免疫動(dòng)物或人體,使其在宿主體內(nèi)表達(dá)相應(yīng)的蛋白產(chǎn)物并刺激產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答和特異性免疫應(yīng)答. :是通過(guò)提高機(jī)體的非特異性免疫應(yīng)答以達(dá)到協(xié)助藥物清除病原微生物的目的. :于提高誘生針對(duì)某一病原微生物抗原的特異性免疫應(yīng)答,包括細(xì)胞免疫及體液免疫.:又稱核酸疫苗、基因疫苗,是將編碼某種抗原蛋白的外源性基因直接導(dǎo)入動(dòng)物體細(xì)胞內(nèi),并通過(guò)宿主細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)合成抗原蛋白,誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對(duì)該抗原蛋白的免疫應(yīng)答,已達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的,這種免疫制劑稱為DNA疫苗,這種免疫稱為核酸免疫、基因免疫、DNA介導(dǎo)的免疫以及遺傳免疫等.:微生物的持續(xù)性感染日益受到重視?；蛑亟M技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用。免疫學(xué)理論的發(fā)展..,可分為細(xì)菌型治療性疫苗、病毒型治療疫苗、腫瘤型治療疫苗、自身免疫病治療性疫苗.、重組蛋白型治療疫苗、天然蛋白型治療疫苗、免疫復(fù)合物型治療疫苗、嵌合型治療疫苗.,可以控制,故治療性疫苗僅限于少數(shù)幾種慢性感染,如結(jié)合病、麻風(fēng)病及布氏病等.、慢性乙肝治療性疫苗、人類免疫缺陷病毒感染的治療性疫苗.,I型主要引起皮膚、黏膜感染,II型主要引起生殖器、肛門感染.,目前尚無(wú)有效的治愈方法,而且死率極高,AIDS的病原體是人類免疫缺陷病毒,它是在首次發(fā)現(xiàn)艾滋病例2年后才分離成功.(HIV)感染導(dǎo)致的慢性進(jìn)行性免疫缺陷,、病毒受體阻斷抗體、自然殺傷細(xì)胞、特異性殺傷細(xì)胞等,HIV仍可在免疫系統(tǒng)中造成進(jìn)行性損傷而導(dǎo)致死亡.,感染人及動(dòng)物的皮膚或黏膜上皮細(xì)胞..,腫瘤是機(jī)體中的正常細(xì)胞在各種外部致病因素和內(nèi)部遺傳因素長(zhǎng)期共同影響和作用下,發(fā)生過(guò)度增生和異常分化所形成的物質(zhì).,主要有腫瘤細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗,腫瘤細(xì)胞中包含著光譜的腫瘤抗原,但缺乏協(xié)同刺激分子以有效識(shí)別和激活免疫細(xì)胞.:(1)預(yù)防性疫苗的接種對(duì)象是健康群體,對(duì)易感染人群均可應(yīng)用,主要起免疫預(yù)防作用,它對(duì)機(jī)體大多無(wú)病理?yè)p傷,使用安全可靠。而治療性疫苗的使用對(duì)象是感染者,或免疫應(yīng)答低下的患者,故疫苗法屬免疫治療.(2)治療性疫苗與預(yù)防性疫苗使用的目的不同,后者是為了防病,二前者是為了治療或防止病情惡化.(3)治療性疫苗的另一個(gè)突出特點(diǎn)是應(yīng)用時(shí)必須考慮適應(yīng)癥與禁忌癥,也可根據(jù)需要進(jìn)行各種組合和調(diào)整.:(1)免疫原的選擇與優(yōu)化,治療性疫苗所用免疫原的選擇在深入研究治療對(duì)象的免疫應(yīng)答基礎(chǔ)上選定,根據(jù)病原學(xué)的特點(diǎn),一般選用的微生物抗原應(yīng)為能引起中和性抗體及可誘生殺傷T細(xì)胞免疫應(yīng)答的抗原。但還必須考慮患者的免疫應(yīng)答,?？蛇x擇相應(yīng)的或類似的抗原進(jìn)行免疫或脫敏. (2)動(dòng)物模型的建立,為考核治療性疫苗的療效,需要建立模擬人體感染的動(dòng)物模型,單至今微生物持續(xù)性感染的動(dòng)物模型還很少,或是在非靈長(zhǎng)類動(dòng)物中尋找類似感染,如類似人乙肝病毒的土撥鼠或鴨乙肝動(dòng)物模型。另一種是建立有病毒基因整合的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物,類似天然的持續(xù)感染,但因是人工將病毒基因整合入鼠胚胎所獲得的動(dòng)物,畢竟與天然的病毒持續(xù)感染不同.(3)臨床應(yīng)用的重要性,因此常伴有免疫低或其他病理變化,在使用疫苗時(shí)需要預(yù)防性疫苗更為慎重,選擇對(duì)象時(shí)還可能伴有免疫損傷而出現(xiàn)不良反應(yīng),需要醫(yī)生協(xié)同進(jìn)行判斷:核酸疫苗的免疫機(jī)理概括為3個(gè)方面,含病原體的DNA疫苗被導(dǎo)入宿主的肌細(xì)胞或皮膚細(xì)胞后,可在肌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)病原體的蛋白質(zhì)抗原,經(jīng)加工后形成的多肽抗原可與宿主細(xì)胞．MHCI類和MHCII類分子結(jié)合,被提呈給宿主的免疫識(shí)別系統(tǒng),目的基因產(chǎn)物從肌細(xì)胞分泌出來(lái)后,被巨噬細(xì)胞或樹(shù)突狀細(xì)胞吞噬、提呈,分別在MHC I和MHC 11分子的限制下,誘導(dǎo)CTL前體、:樹(shù)突狀細(xì)胞是核酸免疫過(guò)程中的最重要的抗原提呈細(xì)胞,從而調(diào)節(jié)T細(xì)胞、B細(xì)胞功能,肌細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞均被感染,引起細(xì)胞亞群的同時(shí)活化,從而產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答.:(1)基因疫苗在接種后,蛋白抗原在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá),加工處理過(guò)程與病毒的自然感染相似,抗原提呈過(guò)程也相同,因而可以誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫.(2)因外源基因在體內(nèi)存在較長(zhǎng)時(shí)間,不斷表達(dá)外源蛋白,持續(xù)給免疫系統(tǒng)提供刺激,因而非常方便(3)DNA質(zhì)粒性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定,疫苗在制成千粉后能在室溫保存很長(zhǎng)時(shí)間,因此運(yùn)輸和貯存非常方便(4),就可以轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中進(jìn)行大規(guī)模擴(kuò)增并純化出來(lái),而且這種生產(chǎn)工藝建立起來(lái)以后,幾乎對(duì)所有質(zhì)粒都通用.(5)成本低,而且大規(guī)模生長(zhǎng)簡(jiǎn)單,所以成本大大降低.(6),而且沒(méi)有載體或佐劑也可發(fā)揮作用(7)可制成多價(jià)疫苗,產(chǎn)生聯(lián)合免疫,幾乎任何DNA片段都可以插入到DNA質(zhì)粒中作成疫苗,而一個(gè)DNA質(zhì)?？梢酝瑫r(shí)容納一個(gè)以上的抗原基因,包括一些可以影響免疫反應(yīng)的分子的基因(8)由于質(zhì)粒DNA幾乎無(wú)免疫原性,.(9)可重復(fù)使用.(10)安全穩(wěn)定,在迄今所作的核酸免疫試驗(yàn)中未檢測(cè)到抗體DNA的抗體,死疫苗釋放的異種蛋白則可引起一定的副作用.:(1)核酸疫苗的免疫機(jī)制尚不太清楚。(2)核酸疫苗的免疫效果在不同動(dòng)物個(gè)體中差異較大,有些疫苗在小個(gè)體的動(dòng)物中免疫和保護(hù)效果較好,而在大個(gè)體動(dòng)物中效果較差,確切原因尚不清楚(3)核酸疫苗畢竟是一種基因疫苗,其安全性尚需全面、長(zhǎng)期觀察。(4)核酸疫苗的大量制備、純化工藝中尚存在許多理論和實(shí)踐上較難解決的問(wèn)題(5)核酸疫苗的用量和接種次數(shù)、間隔時(shí)間,接種途徑、方法和部位。(6)核酸疫苗對(duì)同種病毒的交叉保護(hù)作用如何(7)疫苗接受者的接種年齡(8)核酸疫苗在體內(nèi)表達(dá)的控制。(9)抗體維持的時(shí)間,以及如何終止核酸疫苗的作用等.:質(zhì)粒純化的主要目的是去除帶有抗原基因的表達(dá)質(zhì)粒DNA,再通過(guò)培養(yǎng)含有表達(dá)質(zhì)粒的工程苗使質(zhì)粒擴(kuò)增,最后利用一系列的純化方法獲得純度較高的質(zhì)粒.(1)聚乙二醇(PEG)沉淀法,基本原理:聚乙二醇是一類高分子化合物,在不同的鹽離子溶液中,可結(jié)合形成孔徑不同的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),利用超螺旋