【正文】 結晶,形成冰晶粒,使細胞膨脹破碎.(4)超聲振蕩破碎法:當聲波達到20000C/s時,可使液體產生非?？焖俚恼饎?在液體中產生空穴效應而使細胞破碎.(5)酶溶碎法:利用沒反應分解細胞壁上的特殊結構連鍵,破壞細胞壁結構而達到破碎細胞的目的.,自從1950年衛(wèi)生部批準成立國家生物制品檢定所以來,其中的一項重要任務就是抓生物制品的國家標準起草、修訂和落實執(zhí)行,向衛(wèi)生部和國家食品藥品監(jiān)督管理局寫報告,成立衛(wèi)生部生物制品委員會、衛(wèi)生部生物標準化委員會、中國生物制品標準化委員會、主持在不同時期負責中國《生物制品法規(guī)》和《中國生物制品規(guī)程》《生物制品法規(guī)》和《中國生物制品規(guī)程》中的各種制品規(guī)程,、生產、質量鑒定、,除符合生產所在的國家標準外,還必須符合我國生物制品現(xiàn)行國家標準.:(1)它是利用活的細胞作為表達系統(tǒng)來制備產品,因此,所獲得的蛋白質產品往往分子量較大,并具有復雜的分子結構.(2)許多基因工程生物制品都是參與人體一些生理功能精密調節(jié)所必須的蛋白質,都可能貽誤病情甚至造成嚴重的危害.(3)宿主細胞中表達的外源基因,在轉錄或翻譯、工藝放大等過程中都有可能發(fā)生變化.(4)分泌量極低而生理、,但引起的生物學反應卻有逐步放大的作用,故作為生物制品的使用劑量非常低.(5),它們引起的反應都是通過與受體結合,以形成的受體．配體復合物而開始的,因此,生長因子只對其相應的受體細胞才有活性.(6)要求進行理化鑒定,包括產品的特性、純度及與天然產品的一致性,如N端15個氨基酸序列、肽圖、聚丙烯酰胺凝膠電泳與等電聚焦電泳、高效液相色譜等分析.(7)要求進行外源核酸合抗原檢測,規(guī)定每劑量DNA含量不超過100pg,包括色譜柱試劑和親和色譜用的鼠IgG等.(8)生物活性或效力實驗結果應與天然產品進行比較.:技術條件要溫和,要抑制宿主細胞或分泌產物中相應的酶活性,防止其消化降解待提純產物,以保持目的產物的生物活性。整個分離純化過程要快,時間短,能夠滿足高生產率要求。選擇性強可變參數(shù)多,以適應各種不同樣品的分離要求。高靈敏度的在線檢測.:有效成分含量高,新鮮。,富含所需目的物并易于獲得。這種提取與去蛋白工程要重復幾次,最后所獲得的核酸溶液,再用乙醇等使其沉淀、另外,核酸純化的原理是根據(jù)分子大小,(MAK),因為單鏈DNA比雙鏈結合更牢固。在培養(yǎng)工程中,要求工程菌所含有的質粒穩(wěn)定,始終無突變。另外,用于重癥患者的生物制品,對純度的要求可能也是千差萬別.:低溫保存,液體蛋白質樣品在2010度以下冰凍保存比較理想。加保護劑保存.第四章 :再I臨床輸血的基礎上發(fā)展起來的,它通過將血漿中的有效組分分離出來并用于治療,較好地解決了全血不易運輸和大量長期儲存中的問題. :專指用物理的和機械的方法分離出來的血液的一部分,如各種血細胞、血漿等,屬于“單供者制品”,即從單個和血型相同的供者血液中采集的.:新鮮采集的抗凝全血在4℃條件下離心后分離出的血漿.:又稱冷凍血漿,與新鮮冷凍血漿的區(qū)別是來源不同. :冷沉淀又稱冷沉淀抗血友病因子.:指在3037℃中融化后的新鮮冷凍血漿,因故未輸注而在16℃保存,且保存期在5天以內.:指全血采集后24h內分離血漿,并用．30℃冰箱或速凍冰箱冷凍成塊.:是指從人血漿中分離制備制備的有明確臨床療效和應用意義的蛋白制品的總稱,:以前稱丙種球蛋白,現(xiàn)在稱為正常人免疫球蛋白,是由乙型肝炎疫苗免疫健康人得血漿或血清,經低溫乙醇法提取得免疫球蛋白制劑,有液體和凍干兩種劑型,僅供肌內注射.:通過對獻血者血漿的檢測篩選,或給志愿獻血者注射各種疫苗進行超免疫,獲得針對某種抗原具有高效價抗體的血漿,因此稱為特異性免疫球蛋白. :是由一系列蛋白質分子組成的,是機體的主要防御體系之一,在許多生物學反應種,如吞噬、調理、趨化和細胞融解等,都有著重要作用. :是指利用各種組分與固定相親和力或相互作用方面的差異,實現(xiàn)各種組分的分離.:是一種有形的物質,它來源于人體的血液,經腎臟細胞的循環(huán)與過濾作為排排出提體外,其成分包括許多人體未吸收的物質與人體的代謝產物,其中的許多成分是具體有生物活性的物質,對許多疾病有治療作用,對人體有保健功能.(IL):細胞因子中由白細胞或其他體細胞產生且在自細胞問起調節(jié)和介導作用的因子.:l、效價高、療效可靠安全性好、不易產生副反應穩(wěn)定性好資源有限、研究意義重大:血液制品、尿液制品、胎盤制品、人體液細胞中的活性物質.、血液成分制品、血漿蛋白制品.、白細胞制劑、血小板制劑和血漿制劑.、可經血液制品傳播的病毒血液制品病毒滅活／去除方法,主要成分有尿素、氯化鈉、鉀、磷酸、硫酸、尿酸、肌酐、氨、馬尿酸及微量的酚、草酸、尿籃母、鈣、鎂、維生素B維生素B維生素B維生素C、葉酸、尿激酶及多種激素.,從健康男性尿液中可制備尿激酶、激態(tài)釋放酶、尿抑胃素、蛋白酶抑制劑、睡眠因子、集落刺激因子(CSF)從妊夠婦女與絕經婦女尿液中可制備人絨毛膜促性腺激素.、激素、調節(jié)肽、生長因子、細胞因子等生物活性物質.,一種是從健康人血漿中分離制得得人血清白蛋白,另一種是從健康產婦胎盤中分離制得得胎盤白蛋白.四．重點及難點 :(1)全血:全血輸注主要適用用于同時需要補充紅細胞和血容量的患者,如各種原因引起的失血量超過全身總量的40％、血小板裂解后的殘留物,因此不適用于血容量正常的貧血、,全血傳播肝炎、梅毒、艾滋病、,“一血多用”,使寶貴的血液資源得到充分合理的利用.(2)血液成分制品 、添加液紅細胞、洗滌紅細胞、去白細胞紅細胞、冰凍紅細胞、代血漿紅細胞懸液、照射紅細胞、年輕紅細胞、,發(fā)揮其細胞吞噬作用和殺菌能力,、,對血小板缺乏性出血有糾正作用,、,使輸入的血小板遭到破壞,還會引起短期的粒細胞減少.:新鮮冷凍血漿、普通冷凍血漿、,并可能在許多l(xiāng)臨床疾病中應用,包括先天性或獲得性凝血因子缺乏癥、,該制品含有全部穩(wěn)定地凝血因子,但缺乏不穩(wěn)定地凝血因子V和凝血因子Ⅷ.臨床上用于擴充血容量,(4177。在單一宿主中反復連續(xù)傳代.,以誘導產生減毒的包含病毒基因組多處突變或損害的冷變異株.. ,減毒一般是以生物學或其他技術降低或削除病原體的致病性,并保存了有效的感染性,既可刺激體液免疫,也可刺激產生細胞免疫.,因而能削除病毒的許多無關抗原決定簇和粗制或半提純的病毒制劑誘發(fā)的不良反應. :產量大。副作用小。對人體是絕對安全的。(2)病毒宿主范圍廣。(6)易實現(xiàn)目的基因在宿主細胞中的高效瞬時表達.:(1)必須明確記錄描述細胞的來源、表型、遺傳型以及相應的基因標記,此標記可用于保證下階段生產的基因工程疫苗的純度和穩(wěn)定性(2)對于外源基因的克隆方法和最后完整的重組后基因的序列和結構都要有詳細的記錄和報告. :(1)提供全部的核苷酸序列。(5)由于其復雜性,當一些抗獨特型抗體活化保護性免疫時,另一些抗獨特型抗體可能啟動病理性反應.:(1)可以不接觸活的病原微生物及其組成成分,因而很安全。誘發(fā)針對天然蛋白質表位抗體。 (8)易于快速篩選具有免疫保護效果的基因。(4)在細胞質中復制、轉錄、翻譯了RNA核加工、轉移等的特殊要求(5)外源基因表達高。(2)遺傳性狀穩(wěn)定,無致癌性,無致畸變或致流產性.(3)結構簡單清楚,可生物降解,有生物相容性,與組織抗原無免疫交叉反應。(3)寄生蟲形成種種逃避宿主免疫應答的辦法,其機制尚待闡明.(4)寄生蟲一般引起慢性長期感染,病期常因寄生蟲在其生活史中形態(tài)的不同而存在許多階段,所以寄生蟲不僅存在種特異性,所產生的保護性免疫力需要保護一個以上的感染階段.:(1)經輻射減毒疫苗產生免疫保護的機制的鑒別(2)引起這些保護性免疫反應的靶蛋白一寄生蟲蛋白的識別(3)這些能產生保護性免疫反應的靶蛋白首先在齒動物身上進行試驗,然后再過度到人體實驗,由于對大量人群進行此項實驗尚有困難,于是設想研制亞單位疫苗,并使其產生的免疫保護作用與經輻射減毒孢子疫苗產生的免疫保護作用相似.:(1)激發(fā)機體全面的免疫應答,這種保護性免疫應答對不同亞型的病原體有交叉抵御作用(2)基因疫苗表達的抗原接近天然構象,抗原性強.(3)制備簡單,成本低廉,易進行規(guī)模化生生產,且運輸保存方便.(4)聯(lián)合免疫,可將編碼不同抗原的基因構建在同一個質粒中,或將不同抗原基因的多種質粒聯(lián)合應用,制備多價DNA疫苗.(5)基因疫苗既有預防作用也有治療作用. :(1)血吸蟲是寄生于血管內吸蟲的總稱,屬于裂體科,故又稱裂體吸蟲.(2)成蟲寄生于人及多種哺乳動物體內,門脈一腸系膜靜脈系統(tǒng),以血液和血管內皮細胞為食物,蟲體可逆血流移行到腸黏膜下層的小靜脈末梢,雌蟲在此處產卵.(3)蟲卵的去路和體內發(fā)育(4)蟲卵隨糞便排出體外,入水後很快孵出毛蚴,主動侵入中間宿主.(5)無囊蚴期,尾蚴是感染階段. :(1)蟲原性疫苗,包括死疫苗、,攻擊感染後減蟲率可達’70％,甚至90％以上,但蟲原性疫苗受到外源限制,不易保存,現(xiàn)場應用存在困難,此外,免疫原所致病理損害和安全性問題限制了它的進一步研制和應用(2)基因工程疫苗.(3)核酸疫苗,:DNA疫苗研制工藝簡單,可大量生產,成木低,貯藏方便,今年來國內由3家實驗室進行了研制與動物實驗,.(4)合成多肽抗原疫苗,通過對靶抗原氨基酸序列及其表位的分析,設計合成具有多個免疫效應位點的分子抗原肽,誘導了保護性反應,初步動物實驗有較好的保護性效果.(5)抗獨特型抗體疫苗,作為抗原的模擬物Ab2,免疫動物后,產生的抗Ab2獨特型抗體就與抗原發(fā)生結合,從而產生保護作用.:(1)死疫苗研究階段,采用不同的抗原制備方法,觀察以成蟲、蟲卵、尾蚴及排泄分泌物等免疫后的抗攻擊感染效果.(2)活疫苗研究階段,包括異種和同種減弱活疫苗免疫,采用輻射性至弱的活尾蚴,盡管免疫動物可以產生高保護性,但是由于潛在的危險性和生產困難,推廣應用受限.(3)分子疫苗研究階段,基因工程可以大量生產重組抗原分子或具有保護性抗原表位的肽段,制劑純度高,副作用小,. :(1)血吸蟲期特異性抗原基因免疫學研究表面,尋找階段特異性抗原,.(2)血吸蟲特異性基因,血吸蟲雌蟲絕對依賴雄蟲才能發(fā)育成熟,以減輕雌蟲性成熟的程度或是產卵,則血吸蟲的生活史將完全被阻斷.(3)血吸蟲肌抗原基因,97103是脊椎動物的肌原纖維蛋白,是一種具有潛在疫苗價值的血吸蟲非表面抗原.(4)血吸蟲酶性抗原基因,酶性抗原作為日本血吸蟲疫苗的候選靶抗原成分,是今年來研究較活躍的一個領域,已發(fā)現(xiàn)數(shù)種抗原性酶如酸性巰基蛋白水解酶、谷胱甘肽S轉移酶等.:(1)副肌球蛋白,是一種糖蛋白,位于日本血吸蟲蟲、尾蚴、童蟲的肌肉層.(2)照射減毒抗原,Irv5是曼氏血吸蟲肌球蛋白片段中的一個相對分子質量為62x103的重組蛋白,重組的Irv5能被紫外線至弱尾蚴免疫鼠血清識別,與慢性感染鼠血清也能發(fā)生弱反應,但免疫小鼠未取得免疫保護作用.(3)磷酸丙糖異構酶(TPI),是一種參與血吸蟲生命代謝活動的重要功能分子,催化磷酸二羥基丙酮分子二磷酸甘油醛之間的可逆反應,是血吸蟲糖代謝的一個關鍵酶.(4)脂肪酸結合蛋白基因(FABP),血紅蛋白被血吸蟲腸管中的蛋白水解酶大量降解(6)卵黃鐵蛋白基因,是血吸蟲雌蟲特異基因的產物,在卵黃腺高水平表達,是一種具有性別和組織特異的發(fā)育調節(jié)蛋白.(7)熱休克蛋白(HSP),是生物在不利情況下產生的保護機體的蛋白,又稱“看家蛋白”具有重要的的生理作用,如促進器官組織的正常發(fā)育,作為分子伴侶參與蛋白質的折疊、裝備、降解、修復和轉移,以保護細胞不受機體外環(huán)境不良條件的損害.(8)新基因的發(fā)現(xiàn),將生物信息學技術、表達序列標簽法和步移法測序相結合,構建cDNA文庫,隨機挑取重組陽性口令進行測序,對部分序列進行步移法測序,獲取全長cDNA,對同源性高的基因進行核苷酸和氨基酸水平的同源性比較,從而獲得新基因.:(1)血吸蟲存在免疫逃避機制,血吸蟲可以多種方式逃避的免疫攻擊．,包括獲得宿主抗原、蟲體表面抗原或表達喪失或抑制宿主免疫反應等.(2)在動物模型和人體內的免疫機制差異,雖然血吸蟲抗原誘導的效應機制已在實驗模型中得到了闡明,人類免疫效應的體外實驗和流行病學調查結果也支持這些結論,但究竟那種動物模型的免疫效應更與人接近,仍不完全清楚,且由于實際的原因,要在人體體內闡明對血吸蟲的獲得性免疫是很困難的.(3)免疫效應機制的選擇誘導,已知宿主體液的保護效應抗同一分子甚至同一表位時,效應抗體和阻斷抗體可產生不同的免疫表達,影響宿主的最佳抗體的表達.(4)抗原表位的鑒定,鑒定血吸蟲抗原普遍采用的是產生能被動轉移抗性抗體或含T細胞豐富的脾細胞. (5)糖基表位,已有研究表明多糖是未成熟蟲卵和童蟲的重要抗原,但由于分離純化操作上的困難,有關血吸蟲多糖的免疫原性的研究遠不如蛋白質那樣深.(6)保護水平,盡管已有多種天然的或充足的抗原分子在動物實驗那種能誘導一定保護性免疫力,但現(xiàn)在還沒有發(fā)現(xiàn)一種人們一直希望找到的“超級”抗原能接近至弱尾蚴感染誘導哦啊的保護水平.(7)超敏反應,體液免疫作為血吸蟲的主要效應機制,激發(fā)的抗體IgE和有過敏特性的IgG亞類等具有超敏反應特性,從人用疫苗安全性的角度考慮,如何使疫苗抗原既能產生較強的免疫保護效應,又不至于激發(fā)有害作用的超敏反應也是一個需要考慮問題.第九章 :是指在已感染病原生物或患某些疾病的機體中,通過誘生機體的特異性或非特異性免疫應答,以達到治療或防止疾病惡化的天然、AI修飾合成或用基因重組技術表達的產品或生物制品.(AID):是臨床常見、治療困難的一大類疾病,是由于機體識別“自我”的耐受機制在某些情況下遭到破壞,機體免疫系統(tǒng)針對自身抗原產生過度應答,破壞正常組織結構,從而導致一系列病變.:是由細胞毒T細胞介導的、侵犯中樞神經系統(tǒng)白質的慢性進行AID.:是由T細胞調節(jié)關節(jié)失調引起的疾病,是由乙酰膽堿受體抗體介導的AID,這些抗體通過減少肌肉中AchR的數(shù)量或阻礙乙酰膽堿與受體結合,影響突觸傳遞而使骨骼肌變得無力,抗乙酰膽堿受體的抗體發(fā)揮病理效應.:是一種累及多個器官或系統(tǒng)的、由多種自身抗體介導的AID,其發(fā)病涉及遺傳和環(huán)境等多種因素.:,再用一定方法免疫動物或人體,使其在宿主體