【正文】 結(jié)晶,形成冰晶粒,使細(xì)胞膨脹破碎.(4)超聲振蕩破碎法:當(dāng)聲波達(dá)到20000C/s時(shí),可使液體產(chǎn)生非常快速的震動(dòng),在液體中產(chǎn)生空穴效應(yīng)而使細(xì)胞破碎.(5)酶溶碎法:利用沒反應(yīng)分解細(xì)胞壁上的特殊結(jié)構(gòu)連鍵,破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)而達(dá)到破碎細(xì)胞的目的.,自從1950年衛(wèi)生部批準(zhǔn)成立國(guó)家生物制品檢定所以來,其中的一項(xiàng)重要任務(wù)就是抓生物制品的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)起草、修訂和落實(shí)執(zhí)行,向衛(wèi)生部和國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局寫報(bào)告,成立衛(wèi)生部生物制品委員會(huì)、衛(wèi)生部生物標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)、中國(guó)生物制品標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)、主持在不同時(shí)期負(fù)責(zé)中國(guó)《生物制品法規(guī)》和《中國(guó)生物制品規(guī)程》《生物制品法規(guī)》和《中國(guó)生物制品規(guī)程》中的各種制品規(guī)程,、生產(chǎn)、質(zhì)量鑒定、,除符合生產(chǎn)所在的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)外,還必須符合我國(guó)生物制品現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn).:(1)它是利用活的細(xì)胞作為表達(dá)系統(tǒng)來制備產(chǎn)品,因此,所獲得的蛋白質(zhì)產(chǎn)品往往分子量較大,并具有復(fù)雜的分子結(jié)構(gòu).(2)許多基因工程生物制品都是參與人體一些生理功能精密調(diào)節(jié)所必須的蛋白質(zhì),都可能貽誤病情甚至造成嚴(yán)重的危害.(3)宿主細(xì)胞中表達(dá)的外源基因,在轉(zhuǎn)錄或翻譯、工藝放大等過程中都有可能發(fā)生變化.(4)分泌量極低而生理、,但引起的生物學(xué)反應(yīng)卻有逐步放大的作用,故作為生物制品的使用劑量非常低.(5),它們引起的反應(yīng)都是通過與受體結(jié)合,以形成的受體．配體復(fù)合物而開始的,因此,生長(zhǎng)因子只對(duì)其相應(yīng)的受體細(xì)胞才有活性.(6)要求進(jìn)行理化鑒定,包括產(chǎn)品的特性、純度及與天然產(chǎn)品的一致性,如N端15個(gè)氨基酸序列、肽圖、聚丙烯酰胺凝膠電泳與等電聚焦電泳、高效液相色譜等分析.(7)要求進(jìn)行外源核酸合抗原檢測(cè),規(guī)定每劑量DNA含量不超過100pg,包括色譜柱試劑和親和色譜用的鼠IgG等.(8)生物活性或效力實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)與天然產(chǎn)品進(jìn)行比較.:技術(shù)條件要溫和,要抑制宿主細(xì)胞或分泌產(chǎn)物中相應(yīng)的酶活性,防止其消化降解待提純產(chǎn)物,以保持目的產(chǎn)物的生物活性。整個(gè)分離純化過程要快,時(shí)間短,能夠滿足高生產(chǎn)率要求。選擇性強(qiáng)可變參數(shù)多,以適應(yīng)各種不同樣品的分離要求。高靈敏度的在線檢測(cè).:有效成分含量高,新鮮。,富含所需目的物并易于獲得。這種提取與去蛋白工程要重復(fù)幾次,最后所獲得的核酸溶液,再用乙醇等使其沉淀、另外,核酸純化的原理是根據(jù)分子大小,(MAK),因?yàn)閱捂淒NA比雙鏈結(jié)合更牢固。在培養(yǎng)工程中,要求工程菌所含有的質(zhì)粒穩(wěn)定,始終無突變。另外,用于重癥患者的生物制品,對(duì)純度的要求可能也是千差萬別.:低溫保存,液體蛋白質(zhì)樣品在2010度以下冰凍保存比較理想。加保護(hù)劑保存.第四章 :再I臨床輸血的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,它通過將血漿中的有效組分分離出來并用于治療,較好地解決了全血不易運(yùn)輸和大量長(zhǎng)期儲(chǔ)存中的問題. :專指用物理的和機(jī)械的方法分離出來的血液的一部分,如各種血細(xì)胞、血漿等,屬于“單供者制品”,即從單個(gè)和血型相同的供者血液中采集的.:新鮮采集的抗凝全血在4℃條件下離心后分離出的血漿.:又稱冷凍血漿,與新鮮冷凍血漿的區(qū)別是來源不同. :冷沉淀又稱冷沉淀抗血友病因子.:指在3037℃中融化后的新鮮冷凍血漿,因故未輸注而在16℃保存,且保存期在5天以內(nèi).:指全血采集后24h內(nèi)分離血漿,并用．30℃冰箱或速凍冰箱冷凍成塊.:是指從人血漿中分離制備制備的有明確臨床療效和應(yīng)用意義的蛋白制品的總稱,:以前稱丙種球蛋白,現(xiàn)在稱為正常人免疫球蛋白,是由乙型肝炎疫苗免疫健康人得血漿或血清,經(jīng)低溫乙醇法提取得免疫球蛋白制劑,有液體和凍干兩種劑型,僅供肌內(nèi)注射.:通過對(duì)獻(xiàn)血者血漿的檢測(cè)篩選,或給志愿獻(xiàn)血者注射各種疫苗進(jìn)行超免疫,獲得針對(duì)某種抗原具有高效價(jià)抗體的血漿,因此稱為特異性免疫球蛋白. :是由一系列蛋白質(zhì)分子組成的,是機(jī)體的主要防御體系之一,在許多生物學(xué)反應(yīng)種,如吞噬、調(diào)理、趨化和細(xì)胞融解等,都有著重要作用. :是指利用各種組分與固定相親和力或相互作用方面的差異,實(shí)現(xiàn)各種組分的分離.:是一種有形的物質(zhì),它來源于人體的血液,經(jīng)腎臟細(xì)胞的循環(huán)與過濾作為排排出提體外,其成分包括許多人體未吸收的物質(zhì)與人體的代謝產(chǎn)物,其中的許多成分是具體有生物活性的物質(zhì),對(duì)許多疾病有治療作用,對(duì)人體有保健功能.(IL):細(xì)胞因子中由白細(xì)胞或其他體細(xì)胞產(chǎn)生且在自細(xì)胞問起調(diào)節(jié)和介導(dǎo)作用的因子.:l、效價(jià)高、療效可靠安全性好、不易產(chǎn)生副反應(yīng)穩(wěn)定性好資源有限、研究意義重大:血液制品、尿液制品、胎盤制品、人體液細(xì)胞中的活性物質(zhì).、血液成分制品、血漿蛋白制品.、白細(xì)胞制劑、血小板制劑和血漿制劑.、可經(jīng)血液制品傳播的病毒血液制品病毒滅活／去除方法,主要成分有尿素、氯化鈉、鉀、磷酸、硫酸、尿酸、肌酐、氨、馬尿酸及微量的酚、草酸、尿籃母、鈣、鎂、維生素B維生素B維生素B維生素C、葉酸、尿激酶及多種激素.,從健康男性尿液中可制備尿激酶、激態(tài)釋放酶、尿抑胃素、蛋白酶抑制劑、睡眠因子、集落刺激因子(CSF)從妊夠婦女與絕經(jīng)婦女尿液中可制備人絨毛膜促性腺激素.、激素、調(diào)節(jié)肽、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì).,一種是從健康人血漿中分離制得得人血清白蛋白,另一種是從健康產(chǎn)婦胎盤中分離制得得胎盤白蛋白.四．重點(diǎn)及難點(diǎn) :(1)全血:全血輸注主要適用用于同時(shí)需要補(bǔ)充紅細(xì)胞和血容量的患者,如各種原因引起的失血量超過全身總量的40％、血小板裂解后的殘留物,因此不適用于血容量正常的貧血、,全血傳播肝炎、梅毒、艾滋病、,“一血多用”,使寶貴的血液資源得到充分合理的利用.(2)血液成分制品 、添加液紅細(xì)胞、洗滌紅細(xì)胞、去白細(xì)胞紅細(xì)胞、冰凍紅細(xì)胞、代血漿紅細(xì)胞懸液、照射紅細(xì)胞、年輕紅細(xì)胞、,發(fā)揮其細(xì)胞吞噬作用和殺菌能力,、,對(duì)血小板缺乏性出血有糾正作用,、,使輸入的血小板遭到破壞,還會(huì)引起短期的粒細(xì)胞減少.:新鮮冷凍血漿、普通冷凍血漿、,并可能在許多l(xiāng)臨床疾病中應(yīng)用,包括先天性或獲得性凝血因子缺乏癥、,該制品含有全部穩(wěn)定地凝血因子,但缺乏不穩(wěn)定地凝血因子V和凝血因子Ⅷ.臨床上用于擴(kuò)充血容量,(4177。在單一宿主中反復(fù)連續(xù)傳代.,以誘導(dǎo)產(chǎn)生減毒的包含病毒基因組多處突變或損害的冷變異株.. ,減毒一般是以生物學(xué)或其他技術(shù)降低或削除病原體的致病性,并保存了有效的感染性,既可刺激體液免疫,也可刺激產(chǎn)生細(xì)胞免疫.,因而能削除病毒的許多無關(guān)抗原決定簇和粗制或半提純的病毒制劑誘發(fā)的不良反應(yīng). :產(chǎn)量大。副作用小。對(duì)人體是絕對(duì)安全的。(2)病毒宿主范圍廣。(6)易實(shí)現(xiàn)目的基因在宿主細(xì)胞中的高效瞬時(shí)表達(dá).:(1)必須明確記錄描述細(xì)胞的來源、表型、遺傳型以及相應(yīng)的基因標(biāo)記,此標(biāo)記可用于保證下階段生產(chǎn)的基因工程疫苗的純度和穩(wěn)定性(2)對(duì)于外源基因的克隆方法和最后完整的重組后基因的序列和結(jié)構(gòu)都要有詳細(xì)的記錄和報(bào)告. :(1)提供全部的核苷酸序列。(5)由于其復(fù)雜性,當(dāng)一些抗獨(dú)特型抗體活化保護(hù)性免疫時(shí),另一些抗獨(dú)特型抗體可能啟動(dòng)病理性反應(yīng).:(1)可以不接觸活的病原微生物及其組成成分,因而很安全。誘發(fā)針對(duì)天然蛋白質(zhì)表位抗體。 (8)易于快速篩選具有免疫保護(hù)效果的基因。(4)在細(xì)胞質(zhì)中復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯了RNA核加工、轉(zhuǎn)移等的特殊要求(5)外源基因表達(dá)高。(2)遺傳性狀穩(wěn)定,無致癌性,無致畸變或致流產(chǎn)性.(3)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單清楚,可生物降解,有生物相容性,與組織抗原無免疫交叉反應(yīng)。(3)寄生蟲形成種種逃避宿主免疫應(yīng)答的辦法,其機(jī)制尚待闡明.(4)寄生蟲一般引起慢性長(zhǎng)期感染,病期常因寄生蟲在其生活史中形態(tài)的不同而存在許多階段,所以寄生蟲不僅存在種特異性,所產(chǎn)生的保護(hù)性免疫力需要保護(hù)一個(gè)以上的感染階段.:(1)經(jīng)輻射減毒疫苗產(chǎn)生免疫保護(hù)的機(jī)制的鑒別(2)引起這些保護(hù)性免疫反應(yīng)的靶蛋白一寄生蟲蛋白的識(shí)別(3)這些能產(chǎn)生保護(hù)性免疫反應(yīng)的靶蛋白首先在齒動(dòng)物身上進(jìn)行試驗(yàn),然后再過度到人體實(shí)驗(yàn),由于對(duì)大量人群進(jìn)行此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)尚有困難,于是設(shè)想研制亞單位疫苗,并使其產(chǎn)生的免疫保護(hù)作用與經(jīng)輻射減毒孢子疫苗產(chǎn)生的免疫保護(hù)作用相似.:(1)激發(fā)機(jī)體全面的免疫應(yīng)答,這種保護(hù)性免疫應(yīng)答對(duì)不同亞型的病原體有交叉抵御作用(2)基因疫苗表達(dá)的抗原接近天然構(gòu)象,抗原性強(qiáng).(3)制備簡(jiǎn)單,成本低廉,易進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn),且運(yùn)輸保存方便.(4)聯(lián)合免疫,可將編碼不同抗原的基因構(gòu)建在同一個(gè)質(zhì)粒中,或?qū)⒉煌乖虻亩喾N質(zhì)粒聯(lián)合應(yīng)用,制備多價(jià)DNA疫苗.(5)基因疫苗既有預(yù)防作用也有治療作用. :(1)血吸蟲是寄生于血管內(nèi)吸蟲的總稱,屬于裂體科,故又稱裂體吸蟲.(2)成蟲寄生于人及多種哺乳動(dòng)物體內(nèi),門脈一腸系膜靜脈系統(tǒng),以血液和血管內(nèi)皮細(xì)胞為食物,蟲體可逆血流移行到腸黏膜下層的小靜脈末梢,雌蟲在此處產(chǎn)卵.(3)蟲卵的去路和體內(nèi)發(fā)育(4)蟲卵隨糞便排出體外,入水後很快孵出毛蚴,主動(dòng)侵入中間宿主.(5)無囊蚴期,尾蚴是感染階段. :(1)蟲原性疫苗,包括死疫苗、,攻擊感染後減蟲率可達(dá)’70％,甚至90％以上,但蟲原性疫苗受到外源限制,不易保存,現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用存在困難,此外,免疫原所致病理損害和安全性問題限制了它的進(jìn)一步研制和應(yīng)用(2)基因工程疫苗.(3)核酸疫苗,:DNA疫苗研制工藝簡(jiǎn)單,可大量生產(chǎn),成木低,貯藏方便,今年來國(guó)內(nèi)由3家實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了研制與動(dòng)物實(shí)驗(yàn),.(4)合成多肽抗原疫苗,通過對(duì)靶抗原氨基酸序列及其表位的分析,設(shè)計(jì)合成具有多個(gè)免疫效應(yīng)位點(diǎn)的分子抗原肽,誘導(dǎo)了保護(hù)性反應(yīng),初步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有較好的保護(hù)性效果.(5)抗獨(dú)特型抗體疫苗,作為抗原的模擬物Ab2,免疫動(dòng)物后,產(chǎn)生的抗Ab2獨(dú)特型抗體就與抗原發(fā)生結(jié)合,從而產(chǎn)生保護(hù)作用.:(1)死疫苗研究階段,采用不同的抗原制備方法,觀察以成蟲、蟲卵、尾蚴及排泄分泌物等免疫后的抗攻擊感染效果.(2)活疫苗研究階段,包括異種和同種減弱活疫苗免疫,采用輻射性至弱的活尾蚴,盡管免疫動(dòng)物可以產(chǎn)生高保護(hù)性,但是由于潛在的危險(xiǎn)性和生產(chǎn)困難,推廣應(yīng)用受限.(3)分子疫苗研究階段,基因工程可以大量生產(chǎn)重組抗原分子或具有保護(hù)性抗原表位的肽段,制劑純度高,副作用小,. :(1)血吸蟲期特異性抗原基因免疫學(xué)研究表面,尋找階段特異性抗原,.(2)血吸蟲特異性基因,血吸蟲雌蟲絕對(duì)依賴雄蟲才能發(fā)育成熟,以減輕雌蟲性成熟的程度或是產(chǎn)卵,則血吸蟲的生活史將完全被阻斷.(3)血吸蟲肌抗原基因,97103是脊椎動(dòng)物的肌原纖維蛋白,是一種具有潛在疫苗價(jià)值的血吸蟲非表面抗原.(4)血吸蟲酶性抗原基因,酶性抗原作為日本血吸蟲疫苗的候選靶抗原成分,是今年來研究較活躍的一個(gè)領(lǐng)域,已發(fā)現(xiàn)數(shù)種抗原性酶如酸性巰基蛋白水解酶、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶等.:(1)副肌球蛋白,是一種糖蛋白,位于日本血吸蟲蟲、尾蚴、童蟲的肌肉層.(2)照射減毒抗原,Irv5是曼氏血吸蟲肌球蛋白片段中的一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量為62x103的重組蛋白,重組的Irv5能被紫外線至弱尾蚴免疫鼠血清識(shí)別,與慢性感染鼠血清也能發(fā)生弱反應(yīng),但免疫小鼠未取得免疫保護(hù)作用.(3)磷酸丙糖異構(gòu)酶(TPI),是一種參與血吸蟲生命代謝活動(dòng)的重要功能分子,催化磷酸二羥基丙酮分子二磷酸甘油醛之間的可逆反應(yīng),是血吸蟲糖代謝的一個(gè)關(guān)鍵酶.(4)脂肪酸結(jié)合蛋白基因(FABP),血紅蛋白被血吸蟲腸管中的蛋白水解酶大量降解(6)卵黃鐵蛋白基因,是血吸蟲雌蟲特異基因的產(chǎn)物,在卵黃腺高水平表達(dá),是一種具有性別和組織特異的發(fā)育調(diào)節(jié)蛋白.(7)熱休克蛋白(HSP),是生物在不利情況下產(chǎn)生的保護(hù)機(jī)體的蛋白,又稱“看家蛋白”具有重要的的生理作用,如促進(jìn)器官組織的正常發(fā)育,作為分子伴侶參與蛋白質(zhì)的折疊、裝備、降解、修復(fù)和轉(zhuǎn)移,以保護(hù)細(xì)胞不受機(jī)體外環(huán)境不良條件的損害.(8)新基因的發(fā)現(xiàn),將生物信息學(xué)技術(shù)、表達(dá)序列標(biāo)簽法和步移法測(cè)序相結(jié)合,構(gòu)建cDNA文庫(kù),隨機(jī)挑取重組陽性口令進(jìn)行測(cè)序,對(duì)部分序列進(jìn)行步移法測(cè)序,獲取全長(zhǎng)cDNA,對(duì)同源性高的基因進(jìn)行核苷酸和氨基酸水平的同源性比較,從而獲得新基因.:(1)血吸蟲存在免疫逃避機(jī)制,血吸蟲可以多種方式逃避的免疫攻擊．,包括獲得宿主抗原、蟲體表面抗原或表達(dá)喪失或抑制宿主免疫反應(yīng)等.(2)在動(dòng)物模型和人體內(nèi)的免疫機(jī)制差異,雖然血吸蟲抗原誘導(dǎo)的效應(yīng)機(jī)制已在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械玫搅岁U明,人類免疫效應(yīng)的體外實(shí)驗(yàn)和流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果也支持這些結(jié)論,但究竟那種動(dòng)物模型的免疫效應(yīng)更與人接近,仍不完全清楚,且由于實(shí)際的原因,要在人體體內(nèi)闡明對(duì)血吸蟲的獲得性免疫是很困難的.(3)免疫效應(yīng)機(jī)制的選擇誘導(dǎo),已知宿主體液的保護(hù)效應(yīng)抗同一分子甚至同一表位時(shí),效應(yīng)抗體和阻斷抗體可產(chǎn)生不同的免疫表達(dá),影響宿主的最佳抗體的表達(dá).(4)抗原表位的鑒定,鑒定血吸蟲抗原普遍采用的是產(chǎn)生能被動(dòng)轉(zhuǎn)移抗性抗體或含T細(xì)胞豐富的脾細(xì)胞. (5)糖基表位,已有研究表明多糖是未成熟蟲卵和童蟲的重要抗原,但由于分離純化操作上的困難,有關(guān)血吸蟲多糖的免疫原性的研究遠(yuǎn)不如蛋白質(zhì)那樣深.(6)保護(hù)水平,盡管已有多種天然的或充足的抗原分子在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)欠N能誘導(dǎo)一定保護(hù)性免疫力,但現(xiàn)在還沒有發(fā)現(xiàn)一種人們一直希望找到的“超級(jí)”抗原能接近至弱尾蚴感染誘導(dǎo)哦啊的保護(hù)水平.(7)超敏反應(yīng),體液免疫作為血吸蟲的主要效應(yīng)機(jī)制,激發(fā)的抗體IgE和有過敏特性的IgG亞類等具有超敏反應(yīng)特性,從人用疫苗安全性的角度考慮,如何使疫苗抗原既能產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫保護(hù)效應(yīng),又不至于激發(fā)有害作用的超敏反應(yīng)也是一個(gè)需要考慮問題.第九章 :是指在已感染病原生物或患某些疾病的機(jī)體中,通過誘生機(jī)體的特異性或非特異性免疫應(yīng)答,以達(dá)到治療或防止疾病惡化的天然、AI修飾合成或用基因重組技術(shù)表達(dá)的產(chǎn)品或生物制品.(AID):是臨床常見、治療困難的一大類疾病,是由于機(jī)體識(shí)別“自我”的耐受機(jī)制在某些情況下遭到破壞,機(jī)體免疫系統(tǒng)針對(duì)自身抗原產(chǎn)生過度應(yīng)答,破壞正常組織結(jié)構(gòu),從而導(dǎo)致一系列病變.:是由細(xì)胞毒T細(xì)胞介導(dǎo)的、侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)的慢性進(jìn)行AID.:是由T細(xì)胞調(diào)節(jié)關(guān)節(jié)失調(diào)引起的疾病,是由乙酰膽堿受體抗體介導(dǎo)的AID,這些抗體通過減少肌肉中AchR的數(shù)量或阻礙乙酰膽堿與受體結(jié)合,影響突觸傳遞而使骨骼肌變得無力,抗乙酰膽堿受體的抗體發(fā)揮病理效應(yīng).:是一種累及多個(gè)器官或系統(tǒng)的、由多種自身抗體介導(dǎo)的AID,其發(fā)病涉及遺傳和環(huán)境等多種因素.:,再用一定方法免疫動(dòng)物或人體,使其在宿主體