生物制品質(zhì)量監(jiān)控ppt課件-資料下載頁
2025-01-17 18:49本頁面
【正文】 ： ：（ 1： 1）， 內(nèi)加%疊氮化鈉 ?流速： 1mL/min ?柱溫： ?檢測(cè)波長 :280nm 色譜條件： 70 71 二、生化分析法 72 （一）酶法 ?酶法 酶活力測(cè)定法 — 以酶為分析對(duì)象 ? 酶分析法 — 以酶為分析工具或分析試劑 ?酶活力測(cè)定法 ?酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。測(cè)定一個(gè)被酶所催化的化學(xué)反應(yīng)速度。酶反應(yīng)速度以單位時(shí)間底物的減少或產(chǎn)物的增加來表示。 酶活力 73 酶促反應(yīng)的影響因素 ?（ 1）底物濃度的影響：選擇 Km小的作底物 ?（ 2） pH的影響 ?（ 3）溫度的影響：溫度控制在 177。 ?（ 4）輔助因子的影響 ?（ 5）空白和對(duì)照試驗(yàn) 空白 ：雜質(zhì)反應(yīng)和自發(fā)反應(yīng)引起的變化量 對(duì)照實(shí)驗(yàn) ：用純酶或標(biāo)準(zhǔn)酶制劑測(cè)定。用 于比較或測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)。 74 酶法測(cè)定方法 ?（ 1）取樣測(cè)定法 ? 停止酶反應(yīng)的方法：添加變性劑 ? 加熱使酶失效 ?（ 2）連續(xù)測(cè)定法 75 檢測(cè)方法 ? UVVIS— 根據(jù)產(chǎn)物和底物特征吸收 差別 ? 熒光 ?旋光法 ?酶偶聯(lián)測(cè)定法 例如： ELASA ? 其他：電化學(xué)法、離子選擇電極測(cè)定等 76 （二）酶分析法 ?以酶為分析工具的方法。分析的對(duì)象可以是酶的底物、輔酶活化劑或酶抑制劑。 ?影響因素：酶和作用物的濃度、反應(yīng)時(shí)間、溫度和 pH 77 （二）電泳法 ?生物制品藥物分析的重要手段。 ?在電解質(zhì)溶液中，帶電粒子或離子在電場(chǎng)作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反方向遷移。 ? 自由界面電泳 ? 區(qū)帶電泳 :紙電泳、 醋酸纖維素薄膜電泳、PAGE、 SDSPAGE。 ? HPCE： CZE、 MECC、 CGE、 CIEF 電泳原理 電泳分類 78 79 80 常用電泳法的類型和應(yīng)用 ?紙電泳法： （ 1）操作方法； （ 2）定量方法：同紙色譜 （ 3）應(yīng)用：蛋白質(zhì)、核苷酸類 81 醋酸纖維素薄膜電泳 ?應(yīng)用：血清蛋白、脂蛋白等的分離測(cè)定 PAGE法 聚丙烯酰胺凝膠，分離效果取決于分子所帶電荷與分子大小的比例及分子篩效應(yīng)。 SDSPAGE法 測(cè)定酶和蛋白等大分子物質(zhì)分子量，蛋白分子相對(duì)遷移率的大小完全取決于分子量的高低，從已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的對(duì)數(shù)和相對(duì)遷移率的標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出 。 82 瓊脂糖凝膠電泳法 ?（ 1）操作方法 ?（ 2）染色與洗脫 ?（ 3）定量測(cè)定 ?（ 4）應(yīng)用 83 三、生物檢定法 ? 利用藥物對(duì)生物體（整體動(dòng)物、離體組織、微生物等）的作用測(cè)定其效價(jià)或生物活性的方法。以藥物的藥理作用為基礎(chǔ)，生物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，通過供試品和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品在一定條件下比較產(chǎn)生特定生物反應(yīng)的劑量比例，來測(cè)試供試品的效價(jià)。 定義 84 生物檢定法的應(yīng)用范圍 ?藥物的效價(jià)測(cè)定 ?大分子結(jié)構(gòu)的測(cè)定 ?微量生物活性物質(zhì)的測(cè)定 ?特點(diǎn)： ?結(jié)果誤差較大，重現(xiàn)性也較差，測(cè)定費(fèi)時(shí)，適用于無適當(dāng)理化方法進(jìn)行檢定的藥物 85 舉例 86 1 2 3 4 5 87 6 7 88
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