獸醫(yī)生物制品的免疫學基礎-資料下載頁
2025-01-13 07:03本頁面
【正文】 性相結合的免疫學標記技術 。其基本原理是 ， 熒光色素 (常用異硫氰酸熒光素 )與抗體分子結合后 ， 并不影響抗體蛋白分子的免疫活性 ， 當標木涂片(或切片 )中有特異性抗原存在時 ， 熒光素標記的抗體可與之特異性結合 ， 且這種結合較為牢固 ， 用緩沖液浸洗時不會洗脫 ， 在熒光顯微鏡下檢查時 ， 可見到熒光 ， 從而判斷抗原或抗體的存在 、 定位和分布情況 。 IF技術已用于多種禽病抗原或抗體的檢測 ， 成為禽病診斷的常用血清學手段 。 免疫熒光杭體技術 ? ? (1)染色標本片的準備 ①檢測抗原的標本片 ②檢測抗體的標木片 ? (2)標本片的固定 ? (3)染色方法 ①直接法 ②間接法 第二節(jié)免疫血清學技術 ? (二 )酶聯(lián)免疫吸附試驗 ? 酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA)是將抗原抗體反應的特異性與酶促反應的敏感性相結合而建立起來的免疫學標記技術。其基本原理是，酶分子 【 常用辣根過氧化物酶 ( HRP)】 與抗體或抗抗體分子可共價結合，這種結合既不改變抗體的免疫反應活性，也不影響酶的生物化學活性。這種酶標記抗體可與標本巾的抗原或抗體特異性結合后，在底物溶液的參與下，產(chǎn)生肉眼可見的顏色反應，顏色反應的深淺與標本中抗原或抗體的量成正比。 酶聯(lián)免疫吸附試驗 ? ELISA是將抗原 (或抗體 )吸附于聚苯乙烯酶標反應板等固相載體，在載體上進行免疫酶染色，加底物四甲基聯(lián)苯胺 (TMBH2O2)或鄰苯二胺（ OPDH2O2）顯色后，用肉眼或分光光度計判定結果。在禽病的診斷和血清抗體檢測上，常用的 ELISA法有間接法 ELISA、雙抗體夾心 ELISA和斑點 ELISA。 (1)間接法 ELISA (2)雙抗體夾心 ELISA (3)斑點 ELISA(DotELISA) 第二節(jié)免疫血清學技術 ? (三 )單克隆杭體技術 1975年英國學者首次提出了單克隆抗體雜交瘤技術，它是將產(chǎn)生特異性抗體 (針對單個抗原決定簇 )的 B淋巴細胞與能無限生長的骨髓瘤細胞融合，形成 H淋巴細胞雜交瘤，由該雜交瘤細胞所分泌的抗體即是單克隆抗體，簡稱單抗。由于單抗在分子結構、氨基酸排列順序等方面都是一致的 .因而其純度高，特異性強，重復性好，并可以大量、快速、連續(xù)地在動物體內或體外產(chǎn)生同質性單抗。正由于此，使用單克隆抗體替代多克隆抗血清進行疫病的檢測將更有利于各種血清學診斷方法的標準化和規(guī)范化，因而單抗已被廣泛地用于疫病的診斷、毒 (菌 )株鑒定、檢疫、治療及預防等各個方面。 單克隆杭體技術 十幾年來我國在動物用單抗研究方面發(fā)展迅速，其中包括國內流行較廣’、危害較嚴重的大多數(shù)雞病毒性和細菌性疫病病原的單抗，如抗雞馬立克氏病病毒、新城疫病毒、傳染性法氏囊病病毒、傳染性支氣管炎病毒、傳染性喉氣管炎病毒、禽痘病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒及沙門氏菌 OH抗原的單抗等，這些單抗多能替代多克隆抗血清，用于有關疫病的診斷和檢疫?？闺u IgMμ鏈(重鏈 )單抗的成功研制為雞疫病的早期診斷提供了快速、特異、靈敏的方法。 第二節(jié)免疫血清學技術 ? (四 )核酸探針技術 核酸探針技術是 20世紀 80年代中期才異軍突起的一種新的診斷技術。其基本原理是將某種微生物特異的核昔酸序列與樣品的核普酸序列互補時，發(fā)生雜交，形成雙股核酸，不發(fā)生雜交的單股核酸被去除。雜交的探針可用放射自顯影(放射性分子標記 )檢測或比色 (非放射性分子標記 )測定。 核酸探針是以病原體的核酸為檢測目標，其診斷原理與以抗原抗體特異性反應為基礎的血清學診斷原理有著明顯的區(qū)別。 第二節(jié)免疫血清學技術 ? (五 )多聚酶鏈式反應 聚合酶鏈反應模擬體內 DNA復制過程，它利用兩個引物，經(jīng)過高溫 (模板 DNA)變性、低溫 (模板DNA物 )退火和適溫 (在 DNA聚合酶催化下發(fā)生引物鏈 )延伸反應，形成一個周期，進行模板 DNA的合成，新合成的產(chǎn)物再經(jīng)高溫變性后又可作為與引物退火的模板，并再發(fā)生引物鏈延伸反應，如此循環(huán)數(shù)次，可使靶 DIVA序列成幾何級數(shù)量倍增。 ? (五 )多聚酶鏈式反應 PCR技術具有操作簡便、快速、高度特異性、選擇性和敏感性等特點，且對樣品要求不高，無論新鮮組織或陳舊組織、細胞或體液、粗提或純化RNA和 DNA均可，加之 Taq DNA聚合酶的使用促進了 PCR技術自動化，因而 PCR非常適合于感染性疫病的監(jiān)測和診斷。 PCR已成功地用于傳染性支氣管炎病毒、傳染性喉氣管炎病毒、傳染性法氏囊病病毒、馬立克氏病病毒、雞敗血霉形體、貧血病毒和禽流感病毒等的診斷和研究。 復習思考題 ? 。初次應答和再次應答的抗體產(chǎn)生有何特點 ? ? ，其基本原理是什么 ?
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