分子生物學(xué)問答題-資料下載頁
2025-04-07 03:17本頁面
【正文】 鏈DNA轉(zhuǎn)化到E．coli細(xì)胞，由于環(huán)狀DNA復(fù)制的特點(diǎn)，就會(huì)同時(shí)產(chǎn)生野生型與誘變型兩種DNA分子，最后通過篩選，將誘變型DNA分子篩選出來。55. Klenow片段的主要用途有哪些 答：(1)補(bǔ)齊雙鏈DNA的3’末端。(2)通過補(bǔ)齊3’端，標(biāo)記3’末端。(3)在cDNA克隆中，合成第二股鏈。(4)DNA序列分析。56. 末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶的作用。答；末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶能將脫氧核苷酸加到DNA的3，OH~，主要用于探針標(biāo)記；或者在載體和待克隆的片段上形成同聚物尾，以便于進(jìn)行克隆57. 將DNA分子進(jìn)行體外連接的方法：黏性末端連接、平端連接、同聚物加尾連接、人工接頭連接58. 表達(dá)融合蛋白有何優(yōu)點(diǎn) 答：表達(dá)融合蛋白的優(yōu)點(diǎn)如下：(1)融合蛋白較穩(wěn)定，不易被細(xì)菌蛋白酶水解；(2)如果融合蛋白中有信號(hào)肽序列，可產(chǎn)生分泌型產(chǎn)物．(3)可利用針對(duì)原核部分的單抗進(jìn)行親和層析，便于純化．59. 堿性磷酸酶在基因克隆中的作用。答：堿性磷酸酶能去除DNA或RNA 5’端的磷酸根。制備載體時(shí)，用堿性磷酸酶處理后，可防止載體自身環(huán)化，提高重組效率。60. 基因克隆過程中，獲得目的基因的途徑有哪些? 答：(1)從基因組文庫中獲得 (2)從cDNA文庫中獲得 (3)PCR擴(kuò)增特定基因61. 什么是基因突變?它有哪些主要類型? 在特定DNA序列中，堿基組成及排列順序可因機(jī)體內(nèi)外因素的作用發(fā)生改變，導(dǎo)致DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)變化，稱為基因突變。主要類型分為：1)點(diǎn)突變，在DNA序列某個(gè)位點(diǎn)上，一種堿基(核苷酸)被另一種取代所產(chǎn)生的改變 2)缺失，一個(gè)堿基或一段堿基序列丟失的改變。3)插人，某個(gè)位置增加一個(gè)堿基或一段堿基序列的改變4)重排，常見有反置或遷移倒位，即基因DNA序列內(nèi)部重組5)配子突變和體細(xì)胞突變；6)動(dòng)態(tài)突變，微衛(wèi)星序列串聯(lián)重復(fù)拷貝數(shù)隨著世代傳遞而不斷增加的現(xiàn)象62. 簡述基因突變的不同遺傳學(xué)效應(yīng)。 基因突變的遺傳學(xué)效應(yīng)包括錯(cuò)義突變、無義突變、同義突變和移碼突變。1)錯(cuò)義突變 是因DNA分子中堿基對(duì)被取代，突變基因中相應(yīng)密碼子所編碼氨基酸被另一種所取代。2)無義突變 是由于堿基取代、缺失或插入后使得編碼某種氨基酸的密碼子變成了終止密碼子，導(dǎo)致蛋白質(zhì)翻譯過程被提前終止。3)同義突變 是由于遺傳密碼的簡并性，使突變前后相應(yīng)密碼子編碼同一氨基酸。4)移碼突變 是指DNA序列中發(fā)生單堿基，多個(gè)堿基或DNA片段的缺失或插入，導(dǎo)致突變點(diǎn)后三聯(lián)密碼閱讀框改變。63. 何謂基因診斷?與傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)診斷相比，它具有哪些特點(diǎn)?答：用分子生物學(xué)的理論和技術(shù)，通過直接探查基因的存在狀態(tài)或缺陷，從基因結(jié)構(gòu)、定位、復(fù)制、轉(zhuǎn)錄或翻譯水平分析基因的功能，從而對(duì)人體狀態(tài)與疾病作出診斷的方法。具有高特異性、高靈敏性、早期診斷性、應(yīng)用的廣泛性等特點(diǎn)。64. 簡述SSCP分析的原理。答：在非變性條件下，DNA分子為維持其穩(wěn)定而自身折疊形成具有一定空間結(jié)構(gòu)的構(gòu)象，這種構(gòu)象是由單鏈DNA分子中的堿基順序所決定，DNA分子中的堿基變異(即使只有一個(gè)堿基)可導(dǎo)致其空間構(gòu)型的改變，形成不同的構(gòu)象，導(dǎo)致電泳遷移率發(fā)生改變。65. 單核苷酸多態(tài)性用作遺傳標(biāo)志具有那些突出優(yōu)勢(shì) 答：分布更廣泛；高度穩(wěn)定性；部分位于基因內(nèi)部，直接影響基因功能發(fā)揮；是雙等位基因型的，易于自動(dòng)化分析。66. 簡述DNA指紋分析的基本流程。答：DNA指紋分析的基本流程為：DNA的提純與純化限制性內(nèi)切酶消化一電泳分離_分子雜交+指紋圖的顯示。67. 簡述基因診斷在傳染病檢測(cè)中的應(yīng)用。答：任何類型的病原體，包括病毒、支原體、細(xì)菌、真菌和寄生蟲，它們感染宿主細(xì)胞后均攜帶有自身特異的遺傳信息DNA影或RNA，它們侵入機(jī)體后引起的傳染病和寄生蟲病等，都可以用基因診斷技術(shù)來進(jìn)行檢測(cè)或診斷。68. 試述內(nèi)源基因結(jié)構(gòu)突變的主要類型以及內(nèi)源基因結(jié)構(gòu)突變所致的疾病。答：內(nèi)源基因結(jié)構(gòu)突變包括點(diǎn)突變、缺失或插入突變、染色體易位、基因重排、基因擴(kuò)增等。突變?nèi)舭l(fā)生在生殖細(xì)胞，可引起各種遺傳性疾病；若發(fā)生在他細(xì)胞，可導(dǎo)致腫瘤、心血管疾病等69. 熒光原位雜交的特點(diǎn)及應(yīng)用包括哪些?答：(1)其探針比放射性探針更穩(wěn)定，不需要特殊的安全防護(hù)和污物處理措施；．(2)與原位雜交一樣，不需要提取和純化核酸；(3)多色TLSII可以在同一核中顯示不同的顏色，從而同時(shí)檢測(cè)兩種或多種序列；(4)應(yīng)用不同的探針可以顯示某一物種的全部基因或某一染色體、染色體片段及單拷貝序列。70. 簡述自殺基因治療的原理。答：將“自殺基因?qū)胨拗骷?xì)胞中，這種基因編碼的酶能使無毒性的藥物前體轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性代謝物，誘導(dǎo)靶細(xì)胞產(chǎn)生“自殺”效應(yīng)，從而達(dá)到清除腫瘤細(xì)胞的目的。為惡性腫瘤基因治療的主要方法之一。71. 簡述eX vivo和in vivo兩種基因治療途徑。答：根據(jù)基因轉(zhuǎn)移的途徑不同，基因治療分為：(經(jīng)活體)是指在體外將目的基因?qū)税屑?xì)胞，經(jīng)過篩選和增殖后將細(xì)胞回輸給患者，使該基因在體內(nèi)有效地表達(dá)相應(yīng)產(chǎn)物，以達(dá)到治療的目的。in vivo(活體內(nèi))是指將目的基因直接應(yīng)用于患者體內(nèi)。72. 簡述RNA干擾的作用機(jī)制。答 RNA干擾包括起始階段和效應(yīng)階段。在起始階段，加人的小分子RNA被切割為21～23核苷酸長的小分子干擾RNA片段。證據(jù)表明一個(gè)稱為Dicer的酶，是l~aseⅢ家族中特異識(shí)別雙鏈RNA的一員，它能以一種ATP依賴的方式逐步切割由外源導(dǎo)入或者由轉(zhuǎn)基因、病毒感染等各種方式引入的雙鏈RNA，將其切割將DNA降解為19～21bp的雙鏈RNAs(siRNAs)，每個(gè)片段的3’端都有2個(gè)堿基突出。在RNAi效應(yīng)階段，siRNA雙鏈結(jié)合一個(gè)核酶復(fù)合物從而形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物。激活RISC需要一個(gè)ATP依賴的將小分子RNA解雙鏈的過程。激活的RISC通過堿基配對(duì)定位到同源轉(zhuǎn)錄的mRNA，并在距離siRNA 3’端12個(gè)堿基的位置切割mRNA。73. 治療基因的受控表達(dá)策略有哪些?答：治療基因的受控表達(dá)包括控制治療基因表達(dá)的時(shí)間、空間和水平三個(gè)方面。要實(shí)現(xiàn)治療基因的受控表達(dá)，必須建立完善的基因表達(dá)調(diào)控體系?；蛘{(diào)控策略大致有以下幾種：基因內(nèi)部調(diào)節(jié)機(jī)制、基因外部調(diào)節(jié)機(jī)制、利用病灶微環(huán)境使治療基因特異性表達(dá)以及治療基因的誘導(dǎo)表達(dá)等。74. 列舉腫瘤基因治療的常用方法。答：通過基因置換和基因添加，導(dǎo)入多種抑癌基因以抑制癌癥的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移；抑制癌基因的活性，通過于擾癌基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，發(fā)揮抑癌作用；增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫原性，通過對(duì)腫瘤組織進(jìn)行細(xì)胞因子修飾，刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生對(duì)腫瘤細(xì)胞的溶解和排斥反應(yīng)；通過導(dǎo)入“自殺基因殺傷癌細(xì)胞。75. 簡述基因治療的幾種策略。答：(1)基因置換。(2)基因添加。(3)基因干預(yù)。(4)自殺基因治療。5）基因免疫治療
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