【正文】 鏈DNA轉化到E．coli細胞，由于環(huán)狀DNA復制的特點，就會同時產(chǎn)生野生型與誘變型兩種DNA分子，最后通過篩選，將誘變型DNA分子篩選出來。55. Klenow片段的主要用途有哪些 答：(1)補齊雙鏈DNA的3’末端。(2)通過補齊3’端，標記3’末端。(3)在cDNA克隆中，合成第二股鏈。(4)DNA序列分析。56. 末端脫氧核苷酸轉移酶的作用。答；末端脫氧核苷酸轉移酶能將脫氧核苷酸加到DNA的3，OH~，主要用于探針標記；或者在載體和待克隆的片段上形成同聚物尾，以便于進行克隆57. 將DNA分子進行體外連接的方法：黏性末端連接、平端連接、同聚物加尾連接、人工接頭連接58. 表達融合蛋白有何優(yōu)點 答：表達融合蛋白的優(yōu)點如下：(1)融合蛋白較穩(wěn)定，不易被細菌蛋白酶水解；(2)如果融合蛋白中有信號肽序列，可產(chǎn)生分泌型產(chǎn)物．(3)可利用針對原核部分的單抗進行親和層析，便于純化．59. 堿性磷酸酶在基因克隆中的作用。答：堿性磷酸酶能去除DNA或RNA 5’端的磷酸根。制備載體時，用堿性磷酸酶處理后，可防止載體自身環(huán)化，提高重組效率。60. 基因克隆過程中，獲得目的基因的途徑有哪些? 答：(1)從基因組文庫中獲得 (2)從cDNA文庫中獲得 (3)PCR擴增特定基因61. 什么是基因突變?它有哪些主要類型? 在特定DNA序列中，堿基組成及排列順序可因機體內(nèi)外因素的作用發(fā)生改變，導致DNA一級結構變化，稱為基因突變。主要類型分為：1)點突變，在DNA序列某個位點上，一種堿基(核苷酸)被另一種取代所產(chǎn)生的改變 2)缺失，一個堿基或一段堿基序列丟失的改變。3)插人，某個位置增加一個堿基或一段堿基序列的改變4)重排，常見有反置或遷移倒位，即基因DNA序列內(nèi)部重組5)配子突變和體細胞突變；6)動態(tài)突變，微衛(wèi)星序列串聯(lián)重復拷貝數(shù)隨著世代傳遞而不斷增加的現(xiàn)象62. 簡述基因突變的不同遺傳學效應。 基因突變的遺傳學效應包括錯義突變、無義突變、同義突變和移碼突變。1)錯義突變 是因DNA分子中堿基對被取代，突變基因中相應密碼子所編碼氨基酸被另一種所取代。2)無義突變 是由于堿基取代、缺失或插入后使得編碼某種氨基酸的密碼子變成了終止密碼子，導致蛋白質翻譯過程被提前終止。3)同義突變 是由于遺傳密碼的簡并性，使突變前后相應密碼子編碼同一氨基酸。4)移碼突變 是指DNA序列中發(fā)生單堿基，多個堿基或DNA片段的缺失或插入，導致突變點后三聯(lián)密碼閱讀框改變。63. 何謂基因診斷?與傳統(tǒng)醫(yī)學診斷相比，它具有哪些特點?答：用分子生物學的理論和技術，通過直接探查基因的存在狀態(tài)或缺陷，從基因結構、定位、復制、轉錄或翻譯水平分析基因的功能，從而對人體狀態(tài)與疾病作出診斷的方法。具有高特異性、高靈敏性、早期診斷性、應用的廣泛性等特點。64. 簡述SSCP分析的原理。答：在非變性條件下，DNA分子為維持其穩(wěn)定而自身折疊形成具有一定空間結構的構象，這種構象是由單鏈DNA分子中的堿基順序所決定，DNA分子中的堿基變異(即使只有一個堿基)可導致其空間構型的改變，形成不同的構象，導致電泳遷移率發(fā)生改變。65. 單核苷酸多態(tài)性用作遺傳標志具有那些突出優(yōu)勢 答：分布更廣泛；高度穩(wěn)定性；部分位于基因內(nèi)部，直接影響基因功能發(fā)揮；是雙等位基因型的，易于自動化分析。66. 簡述DNA指紋分析的基本流程。答：DNA指紋分析的基本流程為：DNA的提純與純化限制性內(nèi)切酶消化一電泳分離_分子雜交+指紋圖的顯示。67. 簡述基因診斷在傳染病檢測中的應用。答：任何類型的病原體，包括病毒、支原體、細菌、真菌和寄生蟲，它們感染宿主細胞后均攜帶有自身特異的遺傳信息DNA影或RNA，它們侵入機體后引起的傳染病和寄生蟲病等，都可以用基因診斷技術來進行檢測或診斷。68. 試述內(nèi)源基因結構突變的主要類型以及內(nèi)源基因結構突變所致的疾病。答：內(nèi)源基因結構突變包括點突變、缺失或插入突變、染色體易位、基因重排、基因擴增等。突變?nèi)舭l(fā)生在生殖細胞，可引起各種遺傳性疾??；若發(fā)生在他細胞，可導致腫瘤、心血管疾病等69. 熒光原位雜交的特點及應用包括哪些?答：(1)其探針比放射性探針更穩(wěn)定，不需要特殊的安全防護和污物處理措施；．(2)與原位雜交一樣，不需要提取和純化核酸；(3)多色TLSII可以在同一核中顯示不同的顏色，從而同時檢測兩種或多種序列；(4)應用不同的探針可以顯示某一物種的全部基因或某一染色體、染色體片段及單拷貝序列。70. 簡述自殺基因治療的原理。答：將“自殺基因導入宿主細胞中，這種基因編碼的酶能使無毒性的藥物前體轉化為細胞毒性代謝物，誘導靶細胞產(chǎn)生“自殺”效應，從而達到清除腫瘤細胞的目的。為惡性腫瘤基因治療的主要方法之一。71. 簡述eX vivo和in vivo兩種基因治療途徑。答：根據(jù)基因轉移的途徑不同，基因治療分為：(經(jīng)活體)是指在體外將目的基因導人靶細胞，經(jīng)過篩選和增殖后將細胞回輸給患者，使該基因在體內(nèi)有效地表達相應產(chǎn)物，以達到治療的目的。in vivo(活體內(nèi))是指將目的基因直接應用于患者體內(nèi)。72. 簡述RNA干擾的作用機制。答 RNA干擾包括起始階段和效應階段。在起始階段，加人的小分子RNA被切割為21～23核苷酸長的小分子干擾RNA片段。證據(jù)表明一個稱為Dicer的酶，是l~aseⅢ家族中特異識別雙鏈RNA的一員，它能以一種ATP依賴的方式逐步切割由外源導入或者由轉基因、病毒感染等各種方式引入的雙鏈RNA，將其切割將DNA降解為19～21bp的雙鏈RNAs(siRNAs)，每個片段的3’端都有2個堿基突出。在RNAi效應階段，siRNA雙鏈結合一個核酶復合物從而形成RNA誘導沉默復合物。激活RISC需要一個ATP依賴的將小分子RNA解雙鏈的過程。激活的RISC通過堿基配對定位到同源轉錄的mRNA，并在距離siRNA 3’端12個堿基的位置切割mRNA。73. 治療基因的受控表達策略有哪些?答：治療基因的受控表達包括控制治療基因表達的時間、空間和水平三個方面。要實現(xiàn)治療基因的受控表達，必須建立完善的基因表達調控體系?；蛘{控策略大致有以下幾種：基因內(nèi)部調節(jié)機制、基因外部調節(jié)機制、利用病灶微環(huán)境使治療基因特異性表達以及治療基因的誘導表達等。74. 列舉腫瘤基因治療的常用方法。答：通過基因置換和基因添加，導入多種抑癌基因以抑制癌癥的發(fā)生、發(fā)展和轉移；抑制癌基因的活性，通過于擾癌基因的轉錄和翻譯，發(fā)揮抑癌作用；增強腫瘤細胞的免疫原性，通過對腫瘤組織進行細胞因子修飾，刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生對腫瘤細胞的溶解和排斥反應；通過導入“自殺基因殺傷癌細胞。75. 簡述基因治療的幾種策略。答：(1)基因置換。(2)基因添加。(3)基因干預。(4)自殺基因治療。5）基因免疫治療