分子生物學(xué)簡介-資料下載頁
2025-04-07 03:16本頁面
【正文】 的距離差來判斷突變的有無, 這樣就避免了諸如SSCP 等技術(shù)分析中因遷移速率差異而降低的泳動(dòng)速度慢的條帶檢測率。另一方面, DSCA的有效檢測片段長度可達(dá)1 kb。由于激光系統(tǒng)的介入, DSCA的靈敏度和上樣量分別得以提高和降低, 不到1 秒的泳動(dòng)差異也足以檢測。該技術(shù)已被成功地用于囊性纖維化基因( cystic fibrosis gene) 的4 種突變, 以及HLA amp。Ntilde。型基因中131 種等應(yīng)基因的檢測。 變性 高壓液相色譜分析 變性 高壓液相色譜(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC) 是利用DNA構(gòu)型改變檢測基因突變和遺傳多態(tài)性的方法之一, 其可以檢測單核苷酸多態(tài)和可遺傳的突變。實(shí)驗(yàn)主要過程包括PCR 擴(kuò)增待測和正常DNA樣品, 將擴(kuò)增產(chǎn)物變性后再復(fù)性, 若存在突變, 在這一復(fù)性過程中可形成異源雙鏈。在部分變性條件下, 高壓液相色譜分析可以有效地區(qū)分由變異堿基與正常堿基形成的異源DNA雙鏈和正常DNA雙鏈。由于DHPLC 的分辨率可達(dá)到1bp/ kb, 而且操作過程可以全部程序化、大規(guī)?；妥詣?dòng)化,使得實(shí)驗(yàn)時(shí)間大大縮短, 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確率提高, 可作為大群體任何基因突變初篩的有力手段, 比SSCP 有更多的優(yōu)越性, 具有廣泛的應(yīng)用前景, 許多工作都已經(jīng)證實(shí)了DHPLC的敏感性、有效性和準(zhǔn)確性。 特異性等位基因擴(kuò)增 等位基因特異性擴(kuò)增法( allele specific amplificarion, ASA) 是基于PCR技術(shù)的一種單核苷酸突變檢測法, 是分析已知堿基替代或微小片段缺失和插入型突變的常規(guī)技術(shù)。在PCR 的引物設(shè)計(jì)中, 根據(jù)已知突變位點(diǎn)性質(zhì)在引物3 39。 端或中間設(shè)計(jì)一錯(cuò)配堿基, 使之僅能與突變型或野生型基因互補(bǔ)而只擴(kuò)增突變型或野生型基因。 ASA技術(shù)只需一步PCR反應(yīng), 甚至無需電泳和標(biāo)記技術(shù)。因其快速, 重復(fù)性強(qiáng), 耗資少, 無同位素污染以及高效性等特點(diǎn), 將成為有前途的適應(yīng)于人群大規(guī)模突變篩查的方法。應(yīng)用該方法最好避免錯(cuò)配堿基為G: T, 這種錯(cuò)配可能引發(fā)擴(kuò)增反應(yīng)。 化學(xué)裂解錯(cuò)配堿基法 化學(xué)裂解錯(cuò)配堿基法( chemical cleavage mismatch, CCM) 通過化學(xué)修飾并切割異源DNA雙鏈中錯(cuò)配堿基, 達(dá)到檢測點(diǎn)突變的目的。其原理是末端標(biāo)記的DNA片段暴露于可以識(shí)別并修飾異源雙鏈中錯(cuò)配堿基的化學(xué)試劑中(如錯(cuò)配的胞嘧啶可被羥胺修飾, 錯(cuò)配的胸腺嘧啶可被四氧化鋨修飾) , 被修飾的位點(diǎn)隨即可被雜氮環(huán)已烷等化學(xué)物質(zhì)裂解。DNA修飾裂解后, 電泳觀察DNA片段長度即可知道突變是否存在。該技術(shù)較其他突變檢測系統(tǒng)有更多的優(yōu)越性, 可以掃描1~ 2 kb 的大片段DNA并在隨后的順序分析中定位突變位點(diǎn), 其效率可達(dá)100%。該手段通常首先對(duì)目標(biāo)DNA和野生型DNA進(jìn)行PCR 擴(kuò)增, 然后對(duì)野生型DNA擴(kuò)增片段進(jìn)行末端標(biāo)記, 標(biāo)記片段作為探針與目標(biāo)序列復(fù)性形成異源雙鏈, 用四氧化鋨( OsO4) 或羥胺(hydroxylamine) 修飾并用哌啶( piperidine) 切割, 聚丙烯酰胺電泳分離不同長度的片段。近年來, 有人采用碳化二亞胺作為錯(cuò)配修飾劑, 進(jìn)一步提高了該方法的敏感性。CCM方法最初采用同位素DNA片段, 用熒光標(biāo)記代替同位素后, 稱之為熒光化學(xué)裂解錯(cuò)配堿基法( FCCM) , 該方法依然比較敏感并且安全, 可檢出95%~ 100%的錯(cuò)配?；瘜W(xué)裂解錯(cuò)配堿基法的不足之處在于工作量大, 需要使用有害化學(xué)物質(zhì)作為試驗(yàn)用試劑。 編輯本段分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用 分子生物學(xué)技術(shù)：可應(yīng)用于遺傳性疾病的研究和病原體的檢測及腫瘤的病因?qū)W、發(fā)病學(xué)、診斷和治療等方面的研究提高到了基因分子水平。 生物學(xué)定義：生物學(xué)是研究生命現(xiàn)象和生物活動(dòng)規(guī)律的科學(xué)。 據(jù)研究對(duì)象分為動(dòng)物學(xué)、植物學(xué)、微生物學(xué)、古生物學(xué)等；依研究內(nèi)容，分為分類學(xué)、解剖學(xué)、生理學(xué)、細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、進(jìn)化生物學(xué)、生態(tài)學(xué)等；從方法論分為實(shí)驗(yàn)生物學(xué)與系統(tǒng)生物學(xué)等體系。寧可累死在路上，也不能閑死在家里！寧可去碰壁，也不能面壁。是狼就要練好牙，是羊就要練好腿。什么是奮斗？奮斗就是每天很難，可一年一年卻越來越容易。不奮斗就是每天都很容易，可一年一年越來越難。能干的人，不在情緒上計(jì)較，只在做事上認(rèn)真；無能的人！不在做事上認(rèn)真，只在情緒上計(jì)較。拼一個(gè)春夏秋冬！贏一個(gè)無悔人生！早安！—————獻(xiàn)給所有努力的人.學(xué)習(xí)
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