分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)-資料下載頁
2025-04-04 23:13本頁面
【正文】 6560，4360，2320，2030，560，130 bp）。 5．實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 配制TAE電泳緩沖液（50180。儲存液，：Tris堿 242g， ，dd water 定容至1L），1000180。溴化乙錠儲存液（：50mg溴化乙錠溶于100mL dd water，4176。C避光儲存），10180。加樣緩沖液（20% Ficoll 400，% SDS，%溴酚藍(lán)）；6180。加樣緩沖液（%溴酚藍(lán)，40%蔗糖水溶液）；（滅菌）、移液器吸頭裝入相應(yīng)的吸頭盒（滅菌）。6．操作步驟（1），放入三角瓶，加入50ml TAE電泳緩沖液(1180。)，放入微波爐中燒開（1min）。50ml 正好倒兩塊小膠。（2）注意觀察燒瓶中的瓊脂糖粉末，待完全熔化后停止微波爐（切不可讓膠溶液溢出到微波爐中?。＃?）戴上線手套，從微波爐中取出三角瓶，置桌面上冷卻致不燙手（約5060176。C）。（4）把梳子插到凝膠灌制模具的正確位置后緩緩倒入膠溶液。膠溶液倒至與模具的矮邊緣相平即可，不要把膠溶液溢到外面。在桌面上靜置1020分鐘待膠完全凝固。（剩下的膠溶液封口后留待以后再熔化使用）。（5）在水平電泳槽中加滿1180。TAE電泳緩沖液。根據(jù)電泳槽的長度把電泳儀的電壓調(diào)至170V(10V/cm)，注意正負(fù)電極的位置連接正確。（6）待膠完全凝固后（1520分鐘），小心拔出梳子。用手指捏住模具兩側(cè)的高邊緣取出模具和凝膠放入電泳槽中間的平臺上，凝膠要沒入電泳液中。凝膠上有樣品孔的一側(cè)要朝向電泳槽的負(fù)極。（7）剪1片光面紙（或封口膜），點(diǎn)6ml蒸餾水、1ml 10180。加樣緩沖液，再加入3ml質(zhì)粒DNA溶液制成10ml DNA樣品。（8）在凝膠上選擇相鄰的加樣孔。用10ml的吸液頭分別將管中的樣品加入凝膠的加樣孔中（如果需要時(shí)， DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)物）。加樣時(shí)持移液器的手以肘部固定在桌上，用另一只手扶住這只手的手腕，以減少移液器的抖動(dòng)?？吹剿{(lán)色的樣品吸管尖頭伸進(jìn)加樣孔后（不能伸得太深，以免穿破凝膠的底部）緩緩將藍(lán)色的樣品壓入加樣孔中。切不可使藍(lán)色樣品流到孔外。（9）打開電源開關(guān)，樣品將形成一條藍(lán)色的橫帶向前移動(dòng)（如果發(fā)現(xiàn)藍(lán)色向后移動(dòng)，立即關(guān)閉電源，調(diào)換電極）。電泳將進(jìn)行約30min。（10）當(dāng)藍(lán)色的溴酚藍(lán)遷移到距凝膠邊緣1cm時(shí)，關(guān)閉電源。取出模具和凝膠。（11）把凝膠小心反扣放入盛有EB的搪瓷盒中。放置約10分鐘后，取出用自來沖洗兩次。放入凝膠成像系統(tǒng)中拍照。（12）清理垃圾。染有EB的凝膠要放到專用的垃圾袋中作專門處理，以免污染環(huán)境。（13） 撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。7．思考（1）泳道中的質(zhì)粒DNA有幾條帶？為什么？（2）溴酚藍(lán)的遷移率相當(dāng)于多少bp的DNA?（3）影響本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有哪些？10 / 10
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