[理學(xué)]02-蛋白質(zhì)共價(jià)結(jié)構(gòu)-資料下載頁
2025-03-21 22:17本頁面
【正文】 酶：蛋白水解酶（ protease） 常見蛋白酶： 胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶， 嗜熱菌蛋白酶，胃蛋白酶等 在肽鏈內(nèi)有固定的酶切位 點(diǎn)，也叫內(nèi)切酶或內(nèi)肽酶 （ endopeptidase） 42 1) 胰蛋白酶 (Trypsin) 特點(diǎn)：水解堿性氨基酸的 COOH形成的肽鍵 馬來酸酐可保護(hù) Lys 1,2環(huán)己二酮能修飾 Arg胍基 2） 糜蛋白酶 (Chymotrypsin) 水解 COOH端為芳香族的氨基酸 也水解疏水氨基酸 Leu、 Met或 His的 COOH端肽鍵 裂解能力受鄰近氨基酸殘基影響 堿性殘基和酸性殘基 44 3） 嗜熱菌蛋白酶 （ Thermolysin） 依賴 Zn2＋ 和 Ca2＋ ， 可用來斷裂較短的多肽鏈 4） 胃蛋白酶 （ Pepsin） 要求芳香氨基酸和疏水氨基酸，斷裂肽鍵 的二側(cè)殘基都是疏水氨基酸。 最適 pH＝ 2 5） 木瓜蛋白酶 （ Papain） 對免疫球蛋白有特殊作用 6） 葡萄球菌蛋白酶 (Staphylococcal protease) 磷酸緩沖液 (pH ): Glu和 Asp的 COOH端肽鍵 碳酸氫銨緩沖液 (pH ) 或醋酸緩沖液 (pH )： 只斷裂 Glu殘基 COOH端的肽鍵 45 (五 )、多肽鏈的部分裂解 化學(xué)法 優(yōu)點(diǎn)：專一性好 ， 肽段大 ， 適于自動(dòng)化測序 溴化氰斷裂法： CNBr 只斷裂 COOH端為 Met的肽鍵 ， 生 成肽酰高絲氨酸 C H3SC H2C H2CHCONHNB rCNB rC H3S+C H2C H2CHCONHNHC NB r甲 硫 氨 酸溴 化 氰 基 硫. . . .. . . . . . . .. . . .H3CCHCON.. . ... . .C H2N+HB rH2OH3N+肽H3CCHCON.. . .HH溴 化 亞 氨 內(nèi) 酯H肽 酰 高 絲 氨 酸 內(nèi) 酯H3C S C N+H2CO47 (六 )、肽段的氨基酸測序 第一步：偶聯(lián)反應(yīng) 條件：弱堿性， PITC只與未質(zhì)子化的游離 NH2反應(yīng) Edman化學(xué)測序法 （ 1950） H 2 N CHCHN CHCHN PR 1 O R 2 Op H 9N C SHN CSHN CHCHN CHCHNR 1 R 2 OOPP T C P苯氨基硫甲酰－肽 48 (六 )、肽段的氨基酸測序 第二步：環(huán)化斷裂 HN CSHN CHCHN CHCHNR 1 R 2 OOPP T C PC F 3 C O O H無 水CN HCR 1CSHN+ H 2 N CHCHN PR 2 OOA T Z ( 噻 唑 啉 酮 苯 胺 ）CN HCR 1CSHNOA T Z ( 噻 唑 啉 酮 苯 胺 ）1 M H C lH 2 OHN CSHN CHCR 1 OP T C 氨 基 酸O H NHCON HCSP T H 氨 基 酸R第三步：轉(zhuǎn)化反應(yīng) PTH氨基酸非常穩(wěn)定 ， λmax = 268nm 49 (六 )、肽段的氨基酸測序 優(yōu)點(diǎn)：連續(xù)測定 6070個(gè)殘基 缺點(diǎn)：繁瑣 、 工作量大 發(fā)展： DNSEdman降解 ， 熒光標(biāo)記 PITC 酶降解法： 外切酶：氨肽酶和羧肽酶 限制：只能測定末端附近很少幾個(gè)殘基 質(zhì)譜法： 電噴霧電離質(zhì)譜 (ESI)可進(jìn)行小肽測序 50 (七 )、確定肽段次序 OUS SEO PS WTOU EOVE VERL RLA APS HOWT HO 借助重疊肽段確定氨基酸順序： 末端殘基： H S 末端肽段： HOWT APS 序列 : HOWTOUSEOVERLAPS 借助于重疊肽確定肽段在原肽鏈中的順序，進(jìn)而拼湊出完整肽鏈的氨基酸順序 N末端殘基： H， C末端殘基： S 51 (八 )、二硫鍵的確定 使用切點(diǎn)多的胃蛋白酶水解肽鏈 ， 生成較小的含二硫橋的肽段混合物 ， 進(jìn)行雙向電泳
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