食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)-資料下載頁(yè)
2024-10-21 08:16本頁(yè)面
【導(dǎo)讀】養(yǎng)基質(zhì)，它是進(jìn)行科學(xué)研究，生產(chǎn)微生物制品及應(yīng)用等方面的基礎(chǔ)。根據(jù)培養(yǎng)目的和檢測(cè)需要不同，選擇配制不同的培養(yǎng)基。長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱之為選擇培養(yǎng)基。增加這種微生物的繁殖速度，逐漸淘汰其它微生物，這種培養(yǎng)基稱為增殖培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基常用于菌種篩選和選擇增菌中。經(jīng)培養(yǎng)后呈現(xiàn)出明顯差別，因而有助于快速鑒別某種微生物。例如食品檢驗(yàn)中常用的麥康凱培養(yǎng)基是。而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。一般培養(yǎng)基在121．3℃滅菌20分鐘即可。干熱滅菌是利用高溫使微生。但干熱滅菌溫度不能超過(guò)180℃，否則，分裝時(shí)，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。含細(xì)菌菌落總數(shù)。中細(xì)菌的種類，所以有時(shí)被稱為雜菌數(shù)，
【正文】 邊緣為淡色，周?chē)鸀橐换鞚釒В谄渫鈱佑幸煌该魅?。用接種針接觸菌落似有奶油樹(shù)膠的硬度。 革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗(yàn) 挑取金黃色葡萄球菌可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色。 結(jié)果：為革蘭氏陽(yáng)性球菌，排列是葡萄球狀，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，致病性葡萄球菌菌體較小，直徑約為 m 如發(fā)現(xiàn)葡萄球菌 ,再做血漿凝固 E 試驗(yàn) 吸取 1∶ 4 新鮮兔血漿 ，放入于 8mm 100mm 試管內(nèi) ，再加入培養(yǎng) 24h的金黃色 葡萄球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物 ，振蕩搖勻，放 36177。 1℃溫箱或水浴內(nèi)，每半小時(shí)觀察一次，觀察 6h，如呈現(xiàn)凝固，即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊者，被認(rèn)為陽(yáng)性結(jié)果。同時(shí)以已知陽(yáng)性和陰性葡萄球菌株及肉湯作為對(duì)照 結(jié)果報(bào)告 （ 1）初步報(bào)告：根據(jù)血平板培養(yǎng)計(jì)數(shù)和鏡檢，如發(fā)現(xiàn)有 G+葡萄串狀球菌存在，且有溶血性，則初步報(bào)告為：“有金黃色葡萄球菌存在， 1g 樣品約含多少。” （ 2）結(jié)果報(bào)告：根據(jù)培養(yǎng)特性、鏡檢、生化試驗(yàn)、動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果，可報(bào)告為：“是否是致病性葡萄球菌” . 五、思考題 金黃色葡萄球菌在 BP 平板 上的菌落特征如何，說(shuō)明其原理。 金黃色葡萄球菌在血平板上的菌落特征如何，說(shuō)明其原理。 確認(rèn)葡萄球菌為金黃色葡萄球菌的依據(jù)至少應(yīng)包括哪幾個(gè)試驗(yàn)？ 金黃色葡萄球菌的形態(tài)與染色、培養(yǎng)特征如何？ 實(shí)驗(yàn)六 霉菌和酵母菌的檢驗(yàn) （ 9 課時(shí)） 一、目的要求 掌握測(cè)定霉菌和酵母菌的方法和技能 熟練無(wú)菌操作技術(shù)。 二、實(shí)驗(yàn)原理 霉菌和酵母可造成食品腐敗變質(zhì)。有些霉菌的有毒代謝產(chǎn)物能引起急性和慢性中毒，特別是有些霉菌毒素具有強(qiáng)烈的致癌性。一次大量食入或長(zhǎng)期少量食入，均能誘 發(fā)癌癥。目前已知的產(chǎn)毒霉菌如青霉、曲霉和鐮刀菌在自然界中分布較廣，對(duì)食品的侵染機(jī)會(huì)較多。因此霉菌和酵母也作為評(píng)價(jià)食品衛(wèi)生質(zhì)量的指示菌，并以霉菌和酵母計(jì)數(shù)來(lái)制定食品被污染的程度。目前已有若干個(gè)國(guó)家制訂了某些食品的霉菌和酵母限量標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)已制訂了一些食品中霉菌和酵母的限量標(biāo)準(zhǔn)。 三、實(shí)驗(yàn)儀器與材料 恒溫箱、水浴鍋、天平、可調(diào)式電爐、試管、吸管、三角平等 高鹽察氏培養(yǎng)基 生理鹽水、樣品（醬油、乳粉） 四、方法步驟 （一）基本操作過(guò)程： 樣品稱量→樣品的稀釋→傾注平皿→培養(yǎng) 5 天→→計(jì)數(shù)報(bào)告。 （二）樣品的 稀釋（樣品的處理） 樣品 ：糕點(diǎn)、果脯、糖果類，或糧食類 外包裝消毒→無(wú)菌稱取樣品 25g→加無(wú)菌水→加蓋振蕩、吹吸均勻 糕點(diǎn)：如為原包裝，用滅菌鑷子夾下包裝紙，采取外部及中心部位。如為帶餡糕點(diǎn)，取外皮及內(nèi)餡 25g,奶花糕點(diǎn)，采取奶花及糕點(diǎn)部分各一半共 25g。 果脯：采取不同部位稱取 25g 檢樣，加入滅菌水 225mL，制成混懸液。 糖果：用滅菌鑷子夾取包裝紙 ,稱取數(shù)塊共 25g，加入預(yù)溫至 45℃的滅菌水 225mL，待溶化后檢驗(yàn)。 用 75%酒精棉球擦拭消毒袋口，以 無(wú)菌操作開(kāi)封取樣。稱取檢樣 25g，放入裝有適量玻璃珠的滅菌廣口瓶子中。然后加入 225mL 的滅菌水，采用振搖法（用力快速振搖 50 次 ,振幅不小于 40cm）振搖 30 min，振搖均勻，即為 1:10的稀釋液。 用 10ml 滅菌吸管，吸取 1∶ 10 稀釋液 10ml，注入無(wú)菌試管內(nèi)，另用帶橡皮乳頭的 1ml 滅菌吸管反復(fù)吹吸 50 次，使霉菌孢子充分散開(kāi)。 用 1ml 滅菌吸管，吸取上述 1∶ 10 稀釋液 1ml，注入含有 9ml 滅菌水的試管內(nèi)，換一支 1ml 滅菌吸管反復(fù)吹吸 5 次，制成 1∶ 100 稀釋液。 另取 1ml 滅菌吸管，吸取上述 1∶ 100 稀釋液 1ml，注入含有 9ml 滅水的試管內(nèi)，按上項(xiàng)操作順序作 10 倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用另一支 1ml 滅菌吸管。 根據(jù)對(duì)檢樣污染的情況估計(jì)，選擇 3 個(gè)適宜稀釋度，分別在作 10 倍遞增稀釋的同時(shí)，即以吸取該稀釋度的 1ml 稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做2 個(gè)平皿。 用 1ml 無(wú)菌水作空白對(duì)照試驗(yàn)，做 2 個(gè)平皿。 注意： ①加入檢樣液時(shí)，吸管尖端不要觸及瓶口或試管口外部，也不得觸及管內(nèi)稀釋液，并將吸管內(nèi)的液體沿管壁小心流加入，以免增加檢液 。 ②吸管插入檢樣液內(nèi)取樣稀釋時(shí)，插入深度要達(dá) 以上 ,調(diào)整時(shí)應(yīng)使管尖與容器內(nèi)緊貼。 ③每遞增稀釋一次，即換用另一支 1ml 滅菌吸管。 （三）倒平板 稀釋液移入平皿后，及時(shí)將涼至 46℃的培養(yǎng)基（可放置于 46℃水浴保溫）傾注入平皿約 15ml，并正反轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。 注意： ①培養(yǎng)基不能觸及平皿口邊沿，加入培養(yǎng)基后可正反兩個(gè)方向旋轉(zhuǎn)，但不可用力過(guò)度，以免濺起觸及上蓋。 ②檢樣從開(kāi)始稀釋到傾注最后一個(gè)平皿，所用時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。 （四）培養(yǎng)： 待瓊脂凝固后 ，翻轉(zhuǎn)平皿，置 25～ 28℃溫箱內(nèi)培養(yǎng) 5 天，從第 3 天開(kāi)始觀察后取出，共觀察培養(yǎng) 5 天。 （五）菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告： 選取菌落數(shù) 10～ 150 之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板，取兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。稀釋度選擇及菌落數(shù)報(bào)告方式可參考菌落總數(shù)測(cè)定的報(bào)告方式。 五、思考題 菌落總數(shù)測(cè)定和霉菌、酵母菌的計(jì)數(shù)中，兩者在樣品處理過(guò)程中有何不同？列表說(shuō)明？計(jì)數(shù)時(shí)又有何異同處？
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