微生物學實驗指導-資料下載頁
2025-04-04 23:23本頁面
【正文】 ，長成單菌落，一個單菌落對應于原土樣（或活性污泥）中的一個微生物，乘以相應的稀釋倍數(shù)可以計算出土樣的微生物濃度；將單菌落進一步劃線純化可分離到純種微生物。四、實驗內(nèi)容和步驟（一）梯度稀釋平板法制備土壤（或活性污泥）稀釋液準確稱取土樣10g或活性污泥10ml，加入裝有90ml無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中，振蕩約20min，使土樣與水充分混勻，將細胞分散。用一支無菌吸管從中吸取1ml土壤或活性污泥懸液加入裝有9ml無菌水的試管中，吹吸3次，讓菌液混合均勻，即成102稀釋液；再換一支無菌吸管吸取102稀釋液1 ml，移入裝有9ml無菌水的試管中，也吹吸三次，即成l03稀釋液；以此類推，連續(xù)稀釋，制成101010101010等一系列稀釋菌液。如圖（31）所示。加菌將無菌平板編上1010106號碼，每一號碼設置三個重復，用無菌吸管按無菌操作要求吸取106稀釋液各1ml放入編號106的3個平板中，同法吸取105稀釋液各lml放入編號105的3個平板中，再吸取104稀釋液各lml放入編號104的3個平板中（由低濃度向高濃度時，吸管可不必更換）。倒平板上述操作的同時，將培養(yǎng)基加熱融化，再冷卻到40~50186。C，傾注10~15ml培養(yǎng)基入已含有菌液的培養(yǎng)皿內(nèi)（約2~3mm厚）。迅速蓋上皿蓋，平放在工作臺上，輕輕轉(zhuǎn)動，是培養(yǎng)基和稀釋的菌液充分混合均勻，冷卻后，即制成平板。培養(yǎng)將培養(yǎng)皿倒置，放于30186。C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~36h，觀察結(jié)果。圖31 梯度稀釋分離純種微生物的過程（二）平板劃線平板劃線的主要目的是長出單菌落，得到純培養(yǎng)。將融化的培養(yǎng)基無菌操作倒入無菌的空培養(yǎng)皿中。接種環(huán)在火焰上徹底殺菌并冷卻后，蘸取少量菌種，在平板表面輕輕地劃線（如圖），使得初始聚集在一起的細胞漸漸稀釋，最后有單個分散的細胞，長出單菌落，達到分離純化的目的。將劃好線的培養(yǎng)皿倒置于30186。C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~36h，觀察結(jié)果。圖32 平板劃線圖33 斜面接種（三）斜面接種斜面接種的主要目的是獲得純種微生物的菌體，進行短期保存。在待接種的斜面培養(yǎng)基的試管上部，貼上標簽，寫上菌名、接種日期等。將一支斜面菌種和一支待接的斜面培養(yǎng)基放在左手上，拇指壓住兩只試管，中指位于兩只試管之間，斜面向上，管口齊平。右手先將棉塞擰松動，以便接種時拔出。右手拿接種環(huán)，將接種環(huán)可能進入試管的部分在火焰上灼燒滅菌。在火焰旁，用右手小指、無名指和手掌夾住棉塞將它拔出。試管口在火焰上微燒一周，將管口上可能沾染的少量菌燒掉。將燒過的接種環(huán)伸入菌種管內(nèi)，先觸及沒長菌的培養(yǎng)基使環(huán)冷卻，然后輕輕挑取少許菌種，將接種環(huán)抽出管外迅速伸入另一試管底部，在斜面上由底部向上劃曲線。抽出接種環(huán)，將試管塞上棉塞，最后再次灼燒接種環(huán)，則接種完畢。五、思考題梯度平板稀釋法分離純種微生物的方法和原理是什么？平板培養(yǎng)皿為什么要倒置培養(yǎng)？觀察實驗結(jié)果，并對結(jié)果進行分析。
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