【導(dǎo)讀】，并做好實(shí)驗(yàn)前的各項(xiàng)準(zhǔn)備工作。，不準(zhǔn)吸煙、吃東西及用手觸摸面部。盡量減少室內(nèi)活動(dòng)，以免引起。風(fēng)動(dòng)，無(wú)關(guān)人員禁入。，必要資料和書籍帶入后，應(yīng)遠(yuǎn)離操作臺(tái)。、編號(hào)及試驗(yàn)記錄。未發(fā)出報(bào)告前，請(qǐng)勿丟棄標(biāo)本。用后應(yīng)浸泡在消毒液內(nèi)。實(shí)際情況服用有關(guān)藥物。染工作服，應(yīng)立即脫下，高壓滅菌。，應(yīng)沉著處理，切勿慌張，立即關(guān)閉電閘，積極滅火。棄物扔進(jìn)污物桶，有菌廢棄物應(yīng)送高壓滅菌后處理。泡后，經(jīng)煮沸消毒，才能清洗或丟棄。在工作區(qū)內(nèi)禁止飲食，吸煙和存放食物及使用化妝品。工作人員在處理傳染性物質(zhì)或動(dòng)物之后，以及在離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)要洗手。一旦發(fā)現(xiàn)失控，及時(shí)采取相應(yīng)措施，糾正失控結(jié)果。理,防止擴(kuò)散,并視污染情況向上級(jí)報(bào)告。菌分布，耐藥變遷，并將其結(jié)果反饋臨床。10工作人員被細(xì)菌培養(yǎng)物污染應(yīng)消毒處理，必要時(shí)給予藥物治療，并向主管負(fù)責(zé)人報(bào)告，每一個(gè)工作人員必須樹立無(wú)菌觀念，嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作。

　　

【正文】 m)、微小桿菌 (Exiguobaxterium sp)、格氏李斯特菌 (Listeria grayi)、化膿放線菌 (Actinomyces pyogenes) 檢驗(yàn)科 作業(yè)指導(dǎo)書 RapID ANAⅡ 系統(tǒng)操作規(guī)程 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ033 RapID ANAⅡ 系統(tǒng)操作規(guī)程 ，編號(hào)。 ，接種至 RapID 接種液 2ml（貨號(hào) 8325102）中制成懸液 ，相當(dāng)于 3 號(hào)麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)的濁度。菌懸液充分混勻，懸液應(yīng)在制備后 15 分鐘內(nèi)使用。 ， 35～ 37℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時(shí)以備可能需要的附加試驗(yàn)。 “ 撕口 ” （ “peel to inoculate” ）處向左撕開接種板條上的封蓋。 ，重新蓋上封蓋，封好封條。 45176。 ，輕輕搖動(dòng)板條直至接種液沿板條后部在各檔板間分布均勻，在保持水平位置的情況下，慢慢地朝反應(yīng)孔方向傾斜板條，直至板條后部所有 的接種液沿?fù)醢寰鶆蛄魅敕磻?yīng)孔。檢查每個(gè)反應(yīng)孔，所有的反應(yīng)孔都應(yīng)沒(méi)有氣泡且充注均勻。 35～ 37℃ 培養(yǎng) 4～ 6 小時(shí)。 （ URE）至第 10 孔（ PO4）的結(jié)果。 。在反應(yīng)孔中加入試劑：在第 3（ LGY）至 9（ PYR）孔中加 2 滴 RapID ANAⅡ 試劑，在第 10 號(hào)（ IND）中滴加 2滴 INNOVASPOT 吲哚試劑， 30 秒后讀取并記錄結(jié)果，不超過(guò) 2 分鐘。 ANAⅡ 系統(tǒng)的所有試驗(yàn)組合為一組特殊的數(shù)字化編 碼。即將 18 項(xiàng)試驗(yàn)組成 6 組，每組 3 項(xiàng)，從而組成一個(gè) 6 位的數(shù)字。陰性結(jié)果為 0，當(dāng)試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，則根據(jù)此項(xiàng)試驗(yàn)在組中的位置，第一位為 1，第二位為 2，第三位為 4 來(lái)表示。然后累加每組中的所有數(shù)字，組成一個(gè) 6 位的編碼。根據(jù)編碼號(hào)查找 RapID ANAⅡ 編碼手冊(cè)或 ECC 電子編碼系統(tǒng)確定鑒定結(jié)果。 RapID ANAⅡ 板條、封蓋和其它被污染的材料經(jīng)高壓滅菌處理。 ANAⅡ 系統(tǒng)用索氏梭菌（ ATCC 9714）、迪氏擬桿菌（ ATCC 8502）、單形擬桿菌（ ATCC 8492）作為質(zhì)控菌株， 每一批 RapID ANAⅡ 板條均應(yīng)用這三種質(zhì)控菌株檢測(cè)。 Vitek32 型細(xì)菌鑒定 /藥敏分析儀 24h 內(nèi)的純單個(gè)菌落配制成菌懸液，按鑒定要求制成不同使用麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊木鷳乙海ū葷岱ǎ? 、藥敏卡，編上卡號(hào)，接上充填裝置。 ：把充填裝置放入充填箱，先按 ON，再按 FILL 鍵即開始充填工作。 ，從熒屏中打開 Vitek 查看 reader status，了解儀器即將讀的卡片架編號(hào)。 ，關(guān)閉箱門。 ，全日自動(dòng)工作，當(dāng)儀器 遇需要搬動(dòng)移位時(shí)才可關(guān)機(jī)。 ，關(guān)機(jī)步驟： 開機(jī)：插上電源，待 UPS 亮燈穩(wěn)定、打印機(jī)和顯示器啟動(dòng)，再打開讀數(shù)箱 2 個(gè)開關(guān)，打開 VITEK，點(diǎn)擊 reader status，點(diǎn)擊 process on、點(diǎn)擊 go，查看溫度。 關(guān)機(jī)：點(diǎn)擊 system，再點(diǎn)擊 system maintenance，選擇 stop the system 并運(yùn)行 0分鐘，按順序關(guān)閉顯示器、讀數(shù)箱、打印機(jī)、 UPS，最后拔除電源。 ： 菌落要純且新鮮（培養(yǎng)不超過(guò) 48 小時(shí)）。 混懸液濃度要符合要求（按 VITEK 技 術(shù)指南操作）。 卡里不能混有氣泡。 在打開讀數(shù)箱時(shí)，一定要查看熒屏上 reader status。 充卡完成后 20 分鐘內(nèi)要將卡片放進(jìn)讀數(shù)箱（ YBC、 NHI、 ANI 除外），否則會(huì)影響讀數(shù)效果。 作業(yè)指導(dǎo)書 GPI、 GPS 操作規(guī)程 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ036 GPI、 GPS 操作規(guī)程 ，做革蘭氏染色鏡檢，為革蘭氏陽(yáng)性球菌或無(wú)芽胞桿菌。 ，陽(yáng)性者記錄在卡片上（小圓圈涂黑）。 ：挑取 3～ 5 個(gè)菌落于稀釋人 血漿 (血漿 100μl 加 %生理鹽水 300μl) ，置 35℃ 孵箱內(nèi) 4～ 6 小時(shí)記錄結(jié)果。如凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性，需將卡片上的橢圓涂黑。 （ GPI）、藥敏卡 (GPS)，待恢復(fù)至室溫后取出編號(hào)，放到卡片架上。 100%，用裝有結(jié)晶紫的試管調(diào)零，用 %的鹽水管調(diào) 100%。 ，用濃度為 %鹽水 2ml，配制成 麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊木鷳乙?，吸?200μl 該菌懸液到 %的鹽水中，用于藥敏試驗(yàn)。 ，待填充完成后用塞子封口， 檢查和排除氣泡。 Vitek32 閱讀箱內(nèi)，機(jī)器自動(dòng)讀卡。 作業(yè)指導(dǎo)書 GNI﹑ GNS 操作規(guī)程 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ037 ，做革蘭氏染色鏡檢，為陰性球菌或無(wú)芽胞桿菌。 ，陽(yáng)性者記錄在卡片上（空圈涂黑）。 （ GNI）、藥敏卡 (GNS)，待恢復(fù)至室溫后取出編號(hào)，放到卡片架上。 100%，用裝有結(jié)晶紫的試管調(diào)零，用 %的鹽水管調(diào) 100%。 ，用濃度為 %鹽水 2ml，配制成 1 麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊木鷳乙海?50μl 該菌懸液到 %的鹽水中，用于藥敏試驗(yàn)。 ，待填充完成后用塞子封口，檢查和排除氣泡。 Vitek32 閱讀箱內(nèi)，機(jī)器自動(dòng)讀卡。 作業(yè)指導(dǎo)書 NHI 操作規(guī)程 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ038 ，革蘭氏染色鏡檢，為革蘭氏陰性球菌或革蘭氏陰性桿菌。 （ NHI），待恢復(fù)至室溫后取出編號(hào)，放到卡片架上。 100%，用裝有結(jié)晶紫的試管調(diào)零， 用 %的鹽水管調(diào) 100%。 ，用濃度為 %鹽水 2ml，配制成 3 麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊木鷳乙骸? ，待填充完成后用塞子封口，檢查和排除氣 37℃ 孵箱，培養(yǎng) 18～ 24h 后與標(biāo)準(zhǔn)板對(duì)照讀取 NHI 結(jié)果，并記錄在電腦上由電腦分析結(jié)果 ：配制 麥?zhǔn)蠁挝粷岫仍摼?，用棉簽均勻涂?HTM 平板上， 5min 后貼相應(yīng)藥敏紙片（根據(jù) NCCLS 標(biāo)準(zhǔn)選擇藥敏紙片）， 24h 后測(cè)量抑菌環(huán)大小并報(bào)告藥敏結(jié)果。 作業(yè)指導(dǎo)書 YBC 操作規(guī)程 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ039 YBC 操作規(guī)程 ，做革蘭氏染色鏡檢證實(shí)為真菌。 2 從冰箱取出鑒定卡（ YBC），待恢復(fù)至室溫后取出編號(hào)，放到卡片架上。 100%，用裝有結(jié)晶紫的試管調(diào)零，用 %的鹽水管調(diào) 100%。 ，用濃度為 %鹽水，配制成 2 麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊木鷳乙骸? ，待填充完成后用塞子封口，檢查和排除氣 30℃ 的孵箱內(nèi)孵育 18～ 24 小時(shí)，然后放入 Vitek32 閱讀箱內(nèi)，儀器自動(dòng)讀卡。 7．同時(shí)做手工藥敏試 驗(yàn)：有 2 種方法 配制 麥?zhǔn)蠁挝粷岫仍摼?，用棉簽均勻涂于念珠菌藥敏平板上，?5min 后貼相應(yīng) ETest 藥敏紙片， 35℃ 培養(yǎng) 24～ 48 小時(shí)，讀取最低抑菌濃度（ MIC）并報(bào)告。 用 %生理鹽水配制 麥?zhǔn)蠁挝粷岫仍摼?，再?%生理鹽水 1﹕ 1 稀釋，吸取 0.5ml 菌懸液到念球菌藥敏平板，用棉簽均勻涂布，棄去多余的菌懸液，放置 5 分鐘后貼藥片，35℃ 培養(yǎng) 18～ 24h，測(cè)量抑菌環(huán)直徑并報(bào)告。 作業(yè)指導(dǎo)書 葡萄球菌屬的常規(guī)鑒定 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ040 葡萄球菌屬的常規(guī)鑒定 、革蘭染色并鏡檢，葡萄球菌為革蘭陽(yáng)性球菌，呈單個(gè)、成雙或葡萄狀排列，菌體呈圓形。 ，成圓形、凸起、邊緣整齊、表面光滑、濕潤(rùn)的不透明菌落，可產(chǎn)生脂溶性色素，在血平板上多數(shù)葡萄球菌表現(xiàn)為 β 溶血。 （ 3%過(guò)氧化氫試驗(yàn)）陽(yáng)性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸試驗(yàn)陽(yáng)性。 （用混合的人血漿）。取 1﹕ 4 稀釋枸櫞酸鈉抗凝血漿 ，加入 3～ 5個(gè)菌落，置 35℃ 培養(yǎng)箱 4～ 6 小時(shí)，觀察血漿有無(wú)凝固發(fā)生。 ，用 VITEK 32 系統(tǒng) GPI 鑒定卡及 GPS 藥敏卡進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)，如有必要加做補(bǔ)充試驗(yàn)。 MRSA，耐苯唑西林的凝固酶陰性葡萄球菌為 MRSCN。 臨床意義：葡萄球菌是人類化膿性感染中最重要的病原菌，能引起多組織、多系統(tǒng)的化膿性感染，另外還可引起腦膜炎、敗血癥等 作業(yè)指導(dǎo)書 鏈球菌屬的常規(guī)鑒定 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ041 鏈球菌屬的常規(guī)鑒定 1. 取平板上的菌落直接涂片、革蘭染色并鏡檢，鏈球菌為革蘭陽(yáng)性球菌，單個(gè)、成雙或鏈狀排列。無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛。肺炎鏈球菌為革蘭陽(yáng)性雙球菌，呈矛頭狀，寬端相對(duì)，尖 端向外，成雙排列，有莢膜。 35～ 37℃ ，在 5％ CO2 環(huán)境下生長(zhǎng)更好。鏈球菌在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)表現(xiàn)為絮狀或顆粒狀沉淀，易形成長(zhǎng)鏈。在血平板上生長(zhǎng) 18～ 24h 后可形成直徑為 ～ 2mm的圓形突起菌落和環(huán)繞菌落形成的三種特征性溶血現(xiàn)象： ① 甲型（ α ）溶血：即草綠色鏈球菌； ② 乙型（ β ）溶血：即乙型溶血性鏈球菌， ③ 丙型（ γ ）溶血：即不溶血鏈球菌。 ，置于 5％～ 10％的 CO2 環(huán)境下培養(yǎng)。 4. 觸酶試驗(yàn)（ 3%過(guò)氧化氫試驗(yàn)）：陰性 、膽汁溶 菌陰性、 CAMP 試驗(yàn)陰性可初步鑒定為 A 群鏈球菌（化膿性鏈球菌）。 試驗(yàn)陽(yáng)性、馬尿酸鈉試驗(yàn)陽(yáng)性、 β 溶血可初步鑒定為 B 群鏈球菌（無(wú)乳鏈球菌）。 敏感試驗(yàn)陽(yáng)性、膽鹽溶菌和莢膜腫脹試驗(yàn)陽(yáng)性，可初步鑒定為肺炎鏈球菌。 ：肺炎鏈球菌產(chǎn)生自溶。 VITEK32 系統(tǒng) GPI 鑒定卡和 GPS 藥敏卡進(jìn)行全自動(dòng)細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)，如有必要加做補(bǔ)充試驗(yàn)。 臨床意義： A 群鏈球菌（化膿性鏈球菌）臨床上常引起癰、蜂窩織炎、急性咽炎、丹毒，膿皰瘡、猩紅熱、醫(yī)源性傷口感染和產(chǎn)后感染 等，此外，化膿性鏈球菌感染后也可發(fā)生急、慢性風(fēng)爆濕熱和急性腎小球腎炎等嚴(yán)重變態(tài)反應(yīng)性并發(fā)癥。肺炎鏈球菌為口腔和鼻咽部正常菌群，一般不致病，當(dāng)機(jī)體抵抗力下降時(shí)，如在寒冷刺激、感冒和麻疹后，可引起大葉性肺炎或支氣管肺炎，還可引起化膿性腦膜炎、中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膿腫及菌血癥和心內(nèi)膜炎等。近年來(lái)耐青霉素的肺炎鏈球菌及多重耐藥菌株的增加，給臨床治療帶來(lái)一定困難。星座鏈球菌廣泛分布一外部環(huán)境，以及人和動(dòng)物人體表、口鼻腔和腸道，也是化膿性鏈球菌之一，可引起心內(nèi)膜炎、肺炎、菌血癥、腹腔或皮膚感染。 作業(yè)指導(dǎo)書 腸 球菌屬的常規(guī)鑒定 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ042 腸球菌屬的常規(guī)鑒定 ，呈單個(gè)、成雙或短鏈狀排列，卵圓形、無(wú)芽胞、無(wú)莢膜、部分有稀疏鞭毛。 、不透明、表面光滑、中等大小的圓形菌落，在血平板上主要表現(xiàn)為 γ 或 α 溶血現(xiàn)象。 3. 觸酶陰性，能在高鹽（ 65g/L 氯化鈉）、高堿（ ）條件下， 40%膽汁培養(yǎng)基上和 10～ 45℃ 的環(huán)境下生長(zhǎng)，并對(duì)許多抗菌藥物表現(xiàn)為固有耐藥。 ：陽(yáng)性 ：能在含 ％ NaCI 的心浸液肉湯中生長(zhǎng)。 VITEK 32 系統(tǒng) GPI 及 GPS 進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)，如有必要加做補(bǔ)充試驗(yàn)。 臨床意義：糞腸球菌主要引起醫(yī)院感染，最常見(jiàn)為尿道感染，其中大部分與尿道器械操作、導(dǎo)尿等有關(guān)；其次為腹部和盆腔等部位的創(chuàng)傷和外科術(shù)后感染。近年來(lái)，腸球菌屬氨芐青霉素耐藥株和慶大霉素高耐藥逐漸增多，耐萬(wàn)古霉素的腸球菌也有較多報(bào)道。 作業(yè)指導(dǎo)書 奈瑟菌屬的常規(guī)鑒定 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ043 奈瑟菌屬的常規(guī)鑒定 ，革蘭染色并鏡檢。 ，呈卵圓形和腎形，成雙或短鏈狀 排列。 ：陽(yáng)性。 ：陽(yáng)性。 。 VITEK32 NHI 奈瑟氏菌屬鑒定卡， 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時(shí)，鑒定。 ，用 KB 法做藥敏試驗(yàn)，用硝基頭孢做 β 內(nèi)酰氨酶測(cè)定。 作業(yè)指導(dǎo)書 布蘭漢菌屬的常規(guī)鑒定 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ044 布蘭漢菌屬的常規(guī)鑒定 ，革蘭染色并鏡檢。 ，菌體小，呈成蔟、雙、短鏈狀排列。 ；觸酶陽(yáng)性。 ：陽(yáng)性。 驗(yàn)：陰性。 酶試驗(yàn)：陽(yáng)性。 β 內(nèi)酰氨酶測(cè)定。 KB 法做藥敏， β 內(nèi)酰氨酶陽(yáng)性者用紅霉素、氯霉素、磺胺類、環(huán)丙沙星、四環(huán)素、亞胺培南； β 內(nèi)酰氨酶陰性者用紅霉素、氯霉素、頭孢菌素、環(huán)丙沙星。 臨床意義：卡他布蘭漢菌是人類和其他動(dòng)物上呼吸道的正常寄生菌之一，現(xiàn)已證實(shí)本菌可引起下呼吸道感染和結(jié)膜炎、中耳炎、鼻竇炎、支氣管炎，偶爾引起菌血癥、心內(nèi)膜炎、膿胸、腦膜炎、尿道炎等。 棒狀桿菌屬的常規(guī)鑒定 ，革蘭染色并鏡檢。 ，菌體一端或 兩端膨大呈棒狀，排列不規(guī)則，常呈 X、 V、 L、 Y 或柵狀等多形性，菌體一端或兩端可見(jiàn)濃染顆粒（異染顆粒）。 ：陽(yáng)性；硝酸鹽還原試驗(yàn)：陽(yáng)性；分解葡萄糖、麥芽糖；蔗糖、尿素酶：陰性。 ；無(wú)芽孢。 5. 用 API Coryne 系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定。 麥?zhǔn)蠞岫葐挝痪鷳乙?，? KB 法作藥敏試驗(yàn)。 ℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時(shí)后，報(bào)告細(xì)菌鑒定及藥敏結(jié)果。 臨床意義：白喉棒狀桿菌是白喉的病原菌，該菌侵犯口咽、鼻咽等部位，局部形成灰白色假膜。一般不進(jìn)入血液，產(chǎn)生的外毒素可損害心肌和神經(jīng)系統(tǒng)，病 死率高。本菌還可侵犯眼結(jié)膜、外耳道、陰道和皮膚傷口等。