細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)-資料下載頁
2025-01-16 21:12本頁面
【正文】 密度相等的介質(zhì)處 ， 并停留在那里達(dá)到平衡 ， 從而將不同密度的成分分離 。 Velocity (A) and Equilibrium (B) sedimentation 分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器 分離密度不等的顆粒 介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的最小密度 介質(zhì)的最高密度應(yīng)大于被分離組分的最大密度 二、流式細(xì)胞術(shù) ? 用途：對單個細(xì)胞進(jìn)行 快速定量分析與分選 的一門技術(shù) 。 ? 原理： 包在鞘液中的細(xì)胞通過高頻振蕩控制的噴嘴 ， 形成包含單個細(xì)胞的液滴； 在激光束的照射下 ， 這些細(xì)胞發(fā)出散射光和熒光 ， 經(jīng)探測器檢測 ，轉(zhuǎn)換為電信號 ， 送入計(jì)算機(jī)處理 ， 輸出統(tǒng)計(jì)結(jié)果 ， 并可根據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度的細(xì)胞亞群 ， 分離純度可達(dá) 99%。 包被細(xì)胞的液流稱為鞘液 ， 所用儀器稱為流式細(xì)胞計(jì) （ flow cytometer） 。 第四節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞雜交 一、細(xì)胞培養(yǎng) （一）動物細(xì)胞培養(yǎng) ? 群體培養(yǎng) （ mass culture） ：將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中 ， 讓細(xì)胞貼壁生長 ， 匯合 （ confluence） 后形成均勻的單細(xì)胞層； （ 細(xì)胞類型不同 ） ? 克隆培養(yǎng) （ clonal culture） ：培養(yǎng)高度稀釋的細(xì)胞懸液 ，細(xì)胞貼壁生長 ， 每一個細(xì)胞形成一個細(xì)胞集落 ， 稱為克?。?細(xì)胞類型相同 ） ? 原代培養(yǎng) （ primary culture） ：培養(yǎng)直接來自動物機(jī)體的細(xì)胞群 ， 將細(xì)胞從一個培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個培養(yǎng)瓶稱為傳代或 傳代培養(yǎng)（ Passage） 。 ? 細(xì)胞系 （ cell line） ：原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后即為細(xì)胞系 (cell line)。 ? 細(xì)胞株 （ cell strain） ：從一個經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系由單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群稱細(xì)胞株 (cell strain)。 ? 細(xì)胞系先有 ， 然后經(jīng)過選擇培養(yǎng)才有細(xì)胞株 ? 克隆 （ clone） ：亦稱無性系 。 指由同一個祖先細(xì)胞通過有絲分裂產(chǎn)生的遺傳性狀一致的細(xì)胞群 。 表三、實(shí)驗(yàn)室中常用的幾種細(xì)胞系 細(xì)胞系名稱 細(xì)胞類型 來源 3T3 成纖維細(xì)胞 小鼠 HeLa 宮頸癌上皮細(xì)胞 Henrietta Lacks BHK21 成纖維細(xì)胞 敘利亞倉鼠 PtKl 上皮細(xì)胞 袋鼠 L6 成肌細(xì)胞 大鼠 PCI2 嗜鉻細(xì)胞 大鼠 SP2 漿細(xì)胞 小鼠 SP2／ 0 骨髓瘤漿細(xì)胞 小鼠 CHO 卵巢細(xì)胞 中國地鼠 Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 二、細(xì)胞融合 ? 通過培養(yǎng)和介導(dǎo) ， 兩個或多個細(xì)胞合并成一個雙核或多核細(xì)胞的過程稱為細(xì)胞融合 （ cell fusion） 或細(xì)胞雜交 。 ? 同核體 ：相同基因型的細(xì)胞融合而成 。 ? 異核體： 不同基因型的細(xì)胞融合而成 。 ? 自發(fā)融合： 同種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中自發(fā)合并的現(xiàn)象 。 ? 誘發(fā)融合： 異種間的細(xì)胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合 。 ? 誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法： 生物方法 （ 仙臺病毒 、 副流感病毒和新城雞瘟病毒 ） 、 化學(xué)方法 （ 聚乙二醇 PEG） 、 物理方法 （ 電擊和激光 ） 。 謝 謝！
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