細胞生物學實驗技術-資料下載頁
2025-01-16 21:12本頁面
【正文】 密度相等的介質處 ， 并停留在那里達到平衡 ， 從而將不同密度的成分分離 。 Velocity (A) and Equilibrium (B) sedimentation 分離密度相近而大小不等的細胞或細胞器 分離密度不等的顆粒 介質的最大密度應小于被分離生物顆粒的最小密度 介質的最高密度應大于被分離組分的最大密度 二、流式細胞術 ? 用途：對單個細胞進行 快速定量分析與分選 的一門技術 。 ? 原理： 包在鞘液中的細胞通過高頻振蕩控制的噴嘴 ， 形成包含單個細胞的液滴； 在激光束的照射下 ， 這些細胞發(fā)出散射光和熒光 ， 經探測器檢測 ，轉換為電信號 ， 送入計算機處理 ， 輸出統(tǒng)計結果 ， 并可根據(jù)這些性質分選出高純度的細胞亞群 ， 分離純度可達 99%。 包被細胞的液流稱為鞘液 ， 所用儀器稱為流式細胞計 （ flow cytometer） 。 第四節(jié) 細胞培養(yǎng)與細胞雜交 一、細胞培養(yǎng) （一）動物細胞培養(yǎng) ? 群體培養(yǎng) （ mass culture） ：將含有一定數(shù)量細胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中 ， 讓細胞貼壁生長 ， 匯合 （ confluence） 后形成均勻的單細胞層； （ 細胞類型不同 ） ? 克隆培養(yǎng) （ clonal culture） ：培養(yǎng)高度稀釋的細胞懸液 ，細胞貼壁生長 ， 每一個細胞形成一個細胞集落 ， 稱為克隆（ 細胞類型相同 ） ? 原代培養(yǎng) （ primary culture） ：培養(yǎng)直接來自動物機體的細胞群 ， 將細胞從一個培養(yǎng)瓶轉移到另外一個培養(yǎng)瓶稱為傳代或 傳代培養(yǎng)（ Passage） 。 ? 細胞系 （ cell line） ：原代培養(yǎng)物經首次傳代成功后即為細胞系 (cell line)。 ? 細胞株 （ cell strain） ：從一個經過生物學鑒定的細胞系由單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法由單細胞增殖形成的細胞群稱細胞株 (cell strain)。 ? 細胞系先有 ， 然后經過選擇培養(yǎng)才有細胞株 ? 克隆 （ clone） ：亦稱無性系 。 指由同一個祖先細胞通過有絲分裂產生的遺傳性狀一致的細胞群 。 表三、實驗室中常用的幾種細胞系 細胞系名稱 細胞類型 來源 3T3 成纖維細胞 小鼠 HeLa 宮頸癌上皮細胞 Henrietta Lacks BHK21 成纖維細胞 敘利亞倉鼠 PtKl 上皮細胞 袋鼠 L6 成肌細胞 大鼠 PCI2 嗜鉻細胞 大鼠 SP2 漿細胞 小鼠 SP2／ 0 骨髓瘤漿細胞 小鼠 CHO 卵巢細胞 中國地鼠 Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 二、細胞融合 ? 通過培養(yǎng)和介導 ， 兩個或多個細胞合并成一個雙核或多核細胞的過程稱為細胞融合 （ cell fusion） 或細胞雜交 。 ? 同核體 ：相同基因型的細胞融合而成 。 ? 異核體： 不同基因型的細胞融合而成 。 ? 自發(fā)融合： 同種細胞在培養(yǎng)過程中自發(fā)合并的現(xiàn)象 。 ? 誘發(fā)融合： 異種間的細胞必須經誘導劑處理才能融合 。 ? 誘導細胞融合的方法： 生物方法 （ 仙臺病毒 、 副流感病毒和新城雞瘟病毒 ） 、 化學方法 （ 聚乙二醇 PEG） 、 物理方法 （ 電擊和激光 ） 。 謝 謝！
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