細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)-在線瀏覽
2025-03-05 21:12本頁面
【正文】 、 病毒等活機(jī)體的圖像 ， 因?yàn)橥ㄟ^樣品的光線變化差別 （ 反差 ） 很小 。 但是染色會(huì)引起樣品變形 ， 也可使有生命的機(jī)體死亡 。 ? 在構(gòu)造上 ， 相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個(gè)特殊之處 。 2. 相位板 （ annular phaseplate） ：物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板 ， 可將直射光或衍射光的相位推遲 1/4λ。 ? 起偏鏡片 檢偏鏡片 ? 標(biāo)本略厚一點(diǎn) ， 折射率差別更大 ，影像的立體感更強(qiáng) 。 （八）當(dāng)代顯微鏡的發(fā)展趨勢 ? 采用組合方式 ， 集普通光鏡加相差 、熒光 、 暗視野 、DIC、 攝影裝置于一體 。 二、電子顯微鏡 （ 一）透射電子顯微鏡 transmission electron microscope, TEM ? 以電子束作光源 ， 電磁場作透鏡 。 ? 由電子照明系統(tǒng) 、 電磁透鏡成像系統(tǒng) 、 真空系統(tǒng) 、 記錄系統(tǒng) 、 電源系統(tǒng)等 5部分構(gòu)成 。 ? 用于觀察超微結(jié)構(gòu) （ ultrastructure） ， 即小于 、 光學(xué)顯微鏡下無法看清的結(jié)構(gòu) ， 又稱亞顯微結(jié)構(gòu)（ submicroscopic structures） 。 ? 通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，丙酮逐級脫水，環(huán)氧樹脂包埋，以熱膨脹或螺旋推進(jìn)的方式切片，重金屬（鈾、鉛）鹽染色。 標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍 。 ? 向斷裂面上噴涂一層蒸汽碳和鉑 。 A Yeast Cell ? 20世紀(jì) 60年代問世 ， 用來觀察標(biāo)本表面結(jié)構(gòu) 。 （二）掃描電子顯微鏡 Scanning electron microscope（ SEM） ? 工作原理：是用一束極細(xì)的電子束掃描樣品，在樣品表面激發(fā)出次級電子，次級電子的多少與樣品表面結(jié)構(gòu)有關(guān)，次級電子由探測器收集，信號(hào)經(jīng)放大用來調(diào)制熒光屏上電子束的強(qiáng)度，顯示出與電子束同步的掃描圖像。 掃描電子顯微鏡原理 人類紅細(xì)胞 酵母 人類精子 三、顯微操作技術(shù) micromanipulation technique ? 在倒置顯微鏡下利用 顯微操作器 進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎操作的一種方法 。 ? 顯微操作技術(shù)包括細(xì)胞核移植 、 顯微注射 、 嵌合體技術(shù) 、 胚胎移植以及顯微切割等 。 ? （ 一 ） 固定 1. 物理固定：血膜空氣快速干燥 、 冷凍干燥 。 顯示多糖常用乙醇固定 ， 顯示酶類多用甲醛丙酮緩沖液固定 。 2. Schiff反應(yīng)：細(xì)胞中的醛基可使 Schiff試劑中的無色品紅變?yōu)榧t色 。 3. 聯(lián)苯胺反應(yīng)：過氧化酶分解 H202。 4. 脂溶染色法：借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色 。 二、免疫細(xì)胞化學(xué) immunocytochemistry ? 根據(jù)免疫學(xué)原理 ， 利用抗體同特定抗原專一結(jié)合 ， 對抗原進(jìn)行定位測定的技術(shù) 。 ? 免疫熒光法 （ immunofluorescent technique） ：常用的螢光素有異硫氰酸熒光素 、 羅丹明等 。 三、放射自顯影術(shù) ? 用于研究標(biāo)記化合物在機(jī)體 、 組織和細(xì)胞中的分布 、 定位 、排出以及合成 、 更新 、 作用機(jī)理 、 作用部位等等 。 ? 一般用 14C和 3H標(biāo)記 。 – 14C半衰期為 5730年 ， 3H為 。 這種技術(shù)可用來測定單鏈分子核苷酸序列間是否具有互補(bǔ)關(guān)系 。 ? 將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交 。 （二） Southern雜交 ? 是體外分析特異 DNA序列的方
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1