細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 n ? 用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。 ? 分辨力是普通光學(xué)顯微鏡的 3倍。 ? 普通光學(xué)顯微鏡看不見未染色的組織 、 細(xì)胞和細(xì)菌 、 病毒等活機(jī)體的圖像 ， 因?yàn)橥ㄟ^(guò)樣品的光線變化差別 （ 反差 ） 很小 。 ? 在構(gòu)造上 ， 相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個(gè)特殊之處 。 ? 起偏鏡片 檢偏鏡片 ? 標(biāo)本略厚一點(diǎn) ， 折射率差別更大 ，影像的立體感更強(qiáng) 。 二、電子顯微鏡 （ 一）透射電子顯微鏡 transmission electron microscope, TEM ? 以電子束作光源 ， 電磁場(chǎng)作透鏡 。 ? 用于觀察超微結(jié)構(gòu) （ ultrastructure） ， 即小于 、 光學(xué)顯微鏡下無(wú)法看清的結(jié)構(gòu) ， 又稱亞顯微結(jié)構(gòu)（ submicroscopic structures） 。 標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍 。 A Yeast Cell ? 20世紀(jì) 60年代問(wèn)世 ， 用來(lái)觀察標(biāo)本表面結(jié)構(gòu) 。 掃描電子顯微鏡原理 人類紅細(xì)胞 酵母 人類精子 三、顯微操作技術(shù) micromanipulation technique ? 在倒置顯微鏡下利用 顯微操作器 進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎操作的一種方法 。 ? （ 一 ） 固定 1. 物理固定：血膜空氣快速干燥 、 冷凍干燥 。 2. Schiff反應(yīng)：細(xì)胞中的醛基可使 Schiff試劑中的無(wú)色品紅變?yōu)榧t色 。 4. 脂溶染色法：借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色 。 ? 免疫熒光法 （ immunofluorescent technique） ：常用的螢光素有異硫氰酸熒光素 、 羅丹明等 。 ? 一般用 14C和 3H標(biāo)記 。 這種技術(shù)可用來(lái)測(cè)定單鏈分子核苷酸序列間是否具有互補(bǔ)關(guān)系 。 （二） Southern雜交 ? 是體外分析特異 DNA序列的方法 ， 操作時(shí)先用限制性內(nèi)切酶將核 DNA或線粒體 DNA切成 DNA片段 ，經(jīng)凝膠電泳分離后 ， 轉(zhuǎn)移到醋酸纖維薄膜上 ， 再用探針雜交 ， 通過(guò)放射自顯影 ， 即可辨認(rèn)出與探針互補(bǔ)的特殊核苷序列 。⑤緩沖體系和 Mg2+。 ? 轉(zhuǎn)速 25kr/min， 離心力 89Kｇ者稱為超速離心機(jī) 。 ? 沉降順序：核 ——線粒體 ——溶酶體與過(guò)氧化物酶體 ——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體 ——核蛋白體 。 ? 常用介質(zhì)：氯化銫 、 蔗糖 、 多聚蔗糖 。 ? 原理：介質(zhì)密度梯度平緩 ， 分離物按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達(dá)到分離 。 ? 原理：樣品各成分在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的離心則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處 ， 并停留在那里達(dá)到平衡 ， 從而將不同密度的成分分離 。 第四節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞雜交 一、細(xì)胞培養(yǎng) （一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) ? 群體培養(yǎng) （ mass culture） ：將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中 ， 讓細(xì)胞貼壁生長(zhǎng) ， 匯合 （ confluence） 后形成均勻的單細(xì)胞層； （ 細(xì)胞類型不同 ） ? 克隆培養(yǎng) （ clonal culture） ：培養(yǎng)高度稀釋的細(xì)胞懸液 ，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng) ， 每一個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞集落 ， 稱為克?。?細(xì)胞類型相同 ） ? 原代培養(yǎng) （ primary culture） ：培養(yǎng)直接來(lái)自動(dòng)物機(jī)體的細(xì)胞群 ， 將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個(gè)培養(yǎng)瓶稱為傳代或 傳代培養(yǎng)（ Passage） 。 指由同一個(gè)祖先細(xì)胞通過(guò)有絲分裂產(chǎn)生的遺傳性狀一致的細(xì)胞群 。 ? 自發(fā)融合： 同種細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中自發(fā)合并的現(xiàn)象
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