細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)(存儲(chǔ)版)
【正文】 究多糖 。 ? 將 RNA轉(zhuǎn)移到薄膜上 ， 用探針雜交 ， 則稱(chēng)為Northern雜交 。 ? 目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá) 100000r/min， 離心力超過(guò) 500Kg。 ? 分離活細(xì)胞的介質(zhì)要求： – 1） 能產(chǎn)生密度梯度 ， 且密度高時(shí) ， 粘度不高； – 2） PH中性或易調(diào)為中性； – 3） 濃度大時(shí)滲透壓不大； – 4） 對(duì)細(xì)胞無(wú)毒 。 Velocity (A) and Equilibrium (B) sedimentation 分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器 分離密度不等的顆粒 介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的最小密度 介質(zhì)的最高密度應(yīng)大于被分離組分的最大密度 二、流式細(xì)胞術(shù) ? 用途：對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行 快速定量分析與分選 的一門(mén)技術(shù) 。 表三、實(shí)驗(yàn)室中常用的幾種細(xì)胞系 細(xì)胞系名稱(chēng) 細(xì)胞類(lèi)型 來(lái)源 3T3 成纖維細(xì)胞 小鼠 HeLa 宮頸癌上皮細(xì)胞 Henrietta Lacks BHK21 成纖維細(xì)胞 敘利亞倉(cāng)鼠 PtKl 上皮細(xì)胞 袋鼠 L6 成肌細(xì)胞 大鼠 PCI2 嗜鉻細(xì)胞 大鼠 SP2 漿細(xì)胞 小鼠 SP2／ 0 骨髓瘤漿細(xì)胞 小鼠 CHO 卵巢細(xì)胞 中國(guó)地鼠 Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 二、細(xì)胞融合 ? 通過(guò)培養(yǎng)和介導(dǎo) ， 兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞合并成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的過(guò)程稱(chēng)為細(xì)胞融合 （ cell fusion） 或細(xì)胞雜交 。 謝 謝！ 。 ? 細(xì)胞系先有 ， 然后經(jīng)過(guò)選擇培養(yǎng)才有細(xì)胞株 ? 克隆 （ clone） ：亦稱(chēng)無(wú)性系 。 – 所需的力場(chǎng)通常比速率沉降法大 10~100倍 ， 往往需要高速或超速離心 。 ? 類(lèi)型：速度沉降 、 等密度沉降 。 ? 轉(zhuǎn)速為 10~25kr/min的離心機(jī)稱(chēng)為高速離心機(jī) 。 ? 使用 DNA或者 RNA探針來(lái)檢測(cè)與其互補(bǔ)的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置 。 ? 原理：將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi) ， 經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后 ， 制取切片 ， 涂上鹵化銀乳膠 ， 經(jīng)放射性曝光 ，使乳膠感光 。 產(chǎn)生新生氧 ， 后者再將無(wú)色聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán) ， 進(jìn)而變成棕色化合物 。 顯微操作儀 第二節(jié) 生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù) 一、細(xì)胞化學(xué)技術(shù) ? 組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色方法 （ histochemical and cytochemical staining method） 用于對(duì)某些細(xì)胞成分進(jìn)行定性和定位研究 。 然后將組織溶掉 ，把碳和鉑的膜剝下來(lái) ， 此膜即為復(fù)膜 （ replica） 。 ? 分辨力 ， 放大倍數(shù)可達(dá)百萬(wàn)倍 。 （五）相差顯微鏡 相位板上的環(huán)形光闌 相位檢測(cè)環(huán) 用途：觀(guān)察未經(jīng)染色的玻片活體標(biāo)本 （六）微分干涉差顯微鏡 Differential interference contrast microscope （ DIC） ? 1952年 ， 法國(guó)物理學(xué)家 諾曼爾斯基()發(fā)明 ， 利用兩組平面偏振光的干涉 ， 加強(qiáng)影像的明暗效果 ， 能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影 。 ? 可觀(guān)察 4~200nm的微粒子。 ? R=． A． λ為入射光線(xiàn)波長(zhǎng)； 鏡口率 N． A． ＝ｎ sinα/2， n=介質(zhì)折射率；
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