細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)-全文預(yù)覽
【正文】 度大時(shí)滲透壓不大； – 4） 對(duì)細(xì)胞無毒 。 ? 可將細(xì)胞器初步分離 ， 常需進(jìn)一步通過密度梯離心再行分離純化 。 ? 目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá) 100000r/min， 離心力超過 500Kg。 ? 反應(yīng)過程：①變性：約 9095℃ ；②復(fù)性：約 60℃ 左右；③延伸： 7075℃ ；④重復(fù) “變性 ——復(fù)性 ——延伸” 過程 2030次循環(huán)。 ? 將 RNA轉(zhuǎn)移到薄膜上 ， 用探針雜交 ， 則稱為Northern雜交 。 ? （ 一 ） 原位雜交 （ in situ hybridization） 。 常用 3HTDR來顯示 DNA， 用 3HUDR顯示 RNA；用 3H氨基酸研究蛋白質(zhì) ， 用 3H甘露糖 、3H巖藻糖研究多糖 。 ? 酶標(biāo)免疫法 （ enzymelabeled antibody method） ：常用的酶有辣根過氧化物酶 ， 酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成不透明的沉積物 ， 從而顯示出抗原存在的部位 。 5. 茚三酮反應(yīng)：顯示蛋白質(zhì) 。 用于顯示糖和脫氧核糖核酸 （ Feulgen反應(yīng) ） 。 2. 化學(xué)固定：如甲醇 、 乙醇 、 丙酮 、 甲醛 、 戊二醛和鋨酸等試劑 。 ? 顯微操作器 是用以 控制 顯微注射針 在顯微鏡視野內(nèi)移動(dòng)的機(jī)械裝置 。 ? 分辨力為 6~10nm， 由于人眼的分辨力 （ 區(qū)別熒光屏上距離最近兩個(gè)光點(diǎn)的能力 ） 為 ， 掃描電鏡的有效放大倍率為 。 然后斷開 ， 升溫后 ， 冰升華 ，暴露出了斷面結(jié)構(gòu) 。 1. 原理 透射電子顯微鏡 TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPE， TEM 電子束 名 稱 可見光 紫外光 X 射線 α 射線 0. 1Kv 10Kv 波長(zhǎng)（ nm ） 390~ 760 13~ 390 0. 05~ 13 0. 005~ 1 0. 123 0. 0122 不同光線的波長(zhǎng) 制樣技術(shù) ? 1）超薄切片 ? 電子束穿透力很弱，用于電鏡觀察的標(biāo)本須制成厚度僅50nm的超薄切片，用超薄切片機(jī)（ ultramicrotome）制作。 電子束的波長(zhǎng)短 ， 并且波長(zhǎng)與加速電壓 (通常 50~120KV)的平方根成反比 。 （七 ）倒置顯微鏡 inverse microscope ? 物鏡與照明系統(tǒng)顛倒 ， 前者在載物臺(tái)之下 ， 后者在載物臺(tái)之上 ， 用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞 ， 通常具有相差物鏡 ， 有的還具有熒光裝置 。 1. 環(huán)形光闌 （ annular diaphragm） ：位于光源與聚光器之間 。 ? 標(biāo)本染色后改變了振幅 （ 亮度 ） 和波長(zhǎng) （ 顏色 ） ， 影響了反差而獲得圖像 。 ? 用途類似熒光顯微鏡，但能掃描不同層次，形成立體圖像。用途：免疫熒光觀察、基因定位、疾病診斷。 — 、光學(xué)顯微鏡 ? 1. 構(gòu)成： ? ①照明系統(tǒng) ? ②光學(xué)放大系統(tǒng) ? ③機(jī)械裝置 ? 2. 原理：經(jīng)物鏡形成倒立實(shí)像，經(jīng)目鏡進(jìn)一步放大成虛像。 ? 電子顯微鏡：以電子束為光源。 分色鏡：反射和透射 屏障濾鏡：只允許特定波長(zhǎng)的熒光通過以保護(hù)眼球及降低視野暗度 激發(fā)濾鏡：只通過對(duì)標(biāo)本中熒光物質(zhì)合宜的激發(fā)光 Fluorescence image of epithelial(上皮 ) cell, DNA in blue and Microtubules in gree
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