細(xì)胞生物學(xué)研究方法(3)-全文預(yù)覽
【正文】 吸收曲線。 二、免疫細(xì)胞化學(xué) immunocytochemistry ? 根據(jù)免疫學(xué)原理 ， 利用抗體同特定抗原專一結(jié)合 ， 對抗原進(jìn)行定位測定的技術(shù) 。 3. 聯(lián)苯胺反應(yīng)：過氧化酶分解 H202。 顯示多糖常用乙醇固定 ， 顯示酶類多用甲醛丙酮緩沖液固定 。 我國著名學(xué)者童第周等上個(gè)世紀(jì) 70年代在魚類細(xì)胞核移植方面進(jìn)行了許多工作 ， 并取得了豐碩成果 。 掃描隧道顯微鏡原理 STM image, Benzene molecules accumulate at step edges on Cu 三、顯微操作技術(shù) micromanipulation technique ? 在倒置顯微鏡下利用顯微操作器進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎操作的一種方法 。 掃描電子顯微鏡原理 人類紅細(xì)胞 酵母 人類精子 （三）掃描隧道顯微鏡 P63 scanning tunneling microscope， STM ? 原理：根據(jù)隧道效應(yīng)而設(shè)計(jì) ， 當(dāng)原子尺度的針尖在不到一個(gè)納米的高度上掃描樣品時(shí) ， 此處電子云重疊 ， 外加一電壓 （ 2mV~2V） ， 針尖與樣品之間形成隧道電流 。 A Yeast Cell ? 20世紀(jì) 60年代問世 ， 用來觀察標(biāo)本表面結(jié)構(gòu) 。 標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍 。 1. 原理 透射電子顯微鏡 TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPE， TEM 電子束 名 稱 可見光 紫外光 X 射線 α 射線 0. 1Kv 10Kv 波長（ nm ） 390~ 760 13~ 390 0. 05~ 13 0. 005~ 1 0. 123 0. 0122 表二、不同光線的波長 制樣技術(shù) P57 ? 1）超薄切片 ? 電子束穿透力很弱，用于電鏡觀察的標(biāo)本須制成厚度僅50nm的超薄切片，用超薄切片機(jī)（ ultramicrotome）制作。 電子束的波長短 ， 并且波長與加速電壓 (通常 50~120KV)的平方根成反比 。 （八）倒置顯微鏡 inverse microscope ? 物鏡與照明系統(tǒng)顛倒 ， 前者在載物臺(tái)之下 ， 后者在載物臺(tái)之上 ， 用于觀察 培養(yǎng)的活細(xì)胞 ， 通常具有相差物鏡 ， 有的還具有熒光裝置 。 ? 光源前有偏振片 （ 起偏器 ） ， 使進(jìn)入顯微鏡的光線為偏振光 ， 鏡筒中有檢偏器 （ 與起偏器方向垂直的偏振片 ） 。 ? 把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差 ， 從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度 ， 使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見 。 ? 分辨力是普通光學(xué)顯微鏡的 3倍。 Fluorescence image of epithelial cell, DNA in blue and Microtubules in green ? 用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。 ? D=*A – 其中 λ為入射光線波長； A為鏡口率 ＝ sinα/2， N 介質(zhì)折射率； α=鏡口角（樣品對物鏡鏡口的張角） ? 思考：如何提高顯微鏡的分辨能力？ 表一、幾種介質(zhì)的折射率 介質(zhì) 空氣 水 香柏油 α 溴萘 折射率 1 ? 顯微鏡的幾個(gè)光學(xué)特點(diǎn)： – 制作光學(xué)鏡頭所用的玻璃折射率為 ~，所用介質(zhì)的折射率越接近玻璃的越好。第三章 細(xì)胞生物學(xué)研究方法 METHODS AND TECHNIQUES 本章內(nèi)容提要 ? 第一節(jié) 顯微技術(shù) ? 一、光學(xué)顯微鏡 ? 二、電子顯微鏡 ? 三、顯微操作技術(shù) ? 第二節(jié) 生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù) ? 第三節(jié) 細(xì)胞分離技術(shù) ? 第四節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞雜交 第一節(jié) 顯微技術(shù) ? 光學(xué)顯微鏡：以可見光（或紫外
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