【正文】 ，暴露出黃色圓柱狀精巢。 5．然后，用眼科剪刀剪取咽頭前部的上頜粘膜約22cm2小塊，用牙簽挑取剪下的粘膜，將縱切面貼于載片上。圖6—1中央遮光板a．光圈孔徑 b．濾光片直徑 (三)觀察蟾蜍上頜粘膜上皮細(xì)胞的纖毛運(yùn)動(dòng) 步驟： 1．用搗毀腦脊髓的方法處死蟾蜍。3．放一塊透明玻璃于載物臺(tái)透光孔上，用尺子測(cè)量光圈孔徑。利用此照明法，在鏡檢時(shí)不能直接看到通過(guò)標(biāo)本的照明光線，只有被檢物體反射或衍射的光線進(jìn)入物鏡可以提高分辨率，在暗視野中可以看到明亮的被檢物體的存在和運(yùn)動(dòng)，但它們的內(nèi)部結(jié)構(gòu)卻看不清楚。 4．用注射器抽取腹腔液，滴片，然后蓋上蓋片。吞噬細(xì)胞首先由于趨化作用而向異物游走，然后伸出偽足包圍異物，并發(fā)生內(nèi)吞作用形成吞噬泡將異物吞入細(xì)胞，繼而溶酶體與吞噬泡融合消化異物。它們有許多生理功能，如游走性、變形運(yùn)動(dòng)、趨化性、吞噬異物等。 二、器材和儀器 光鏡、2ml注射器、載玻片、蓋玻片、解剖器材、滴管、移液管、試管、玻璃片、黑紙。在核的四周可見小泡，扁平囊等集合形成的高爾基復(fù)合體。核中央海綿狀的一團(tuán)深色結(jié)構(gòu)是核仁。 核中的海綿狀球形結(jié)構(gòu)就是核仁，它由纖維和顆粒構(gòu)成。 (五)核糖體(Ribosome)小鼠腎細(xì)胞核糖體電鏡照片：核糖體是由核糖核酸和蛋白質(zhì)構(gòu)成的大小亞基組成的橢圓形顆粒，附著于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的稱附著核糖體，此外還有散在于細(xì)胞質(zhì)中的游離核糖體，而多個(gè)核糖體由mRNA串連在一起叫多聚核糖體。小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞中含有豐富的分支管狀滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，合成固醇類的雄激素。凸出的一側(cè)為形成面，可見許多小囊泡，凹入的一側(cè)為成熟面，可見扁平囊末端呈球形膨大，在分泌細(xì)胞中膨大部分不斷脫離扁平囊，形成分泌泡。在某些卵細(xì)胞內(nèi)，于核附近有圓形的小?！行牧?，它與周圍致密的細(xì)胞質(zhì)——中心球，組成中心體。 圖5一l神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(示高爾基復(fù)合體)(二)尼氏小體(Nissl’s Body)甲苯胺蘭染色的牛脊髓涂片，尼氏小體即光鏡下的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)?！緦?shí)驗(yàn)內(nèi)容】 一、三種細(xì)胞器的光鏡切片（一）高爾基復(fù)合體(Golgi Complex)用鍍銀法染色的豚鼠脊神經(jīng)節(jié)光鏡切片:神經(jīng)細(xì)胞因合成運(yùn)輸大量的蛋白質(zhì)而含有發(fā)達(dá)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體，在低倍鏡下觀察，神經(jīng)節(jié)的假單極細(xì)胞體被神經(jīng)束分隔成群。 (三)結(jié)果 在麗藻內(nèi)質(zhì)中可以看到胞質(zhì)環(huán)流，用細(xì)胞松弛素B處理后，胞質(zhì)環(huán)流停止，洗去藥物，又出現(xiàn)胞質(zhì)環(huán)流。 (二)方法 1．剪下一小塊麗藻葉片(1～2cm)，置于載片上，蓋上蓋片。內(nèi)質(zhì)中含有許多顆粒，可以清楚地看到胞質(zhì)環(huán)流。 (三)結(jié)果 光鏡觀察，微絲聚集成的張力纖維束被染成藍(lán)色。M一緩沖液有穩(wěn)定細(xì)胞骨架的作用。 4．對(duì)恢復(fù)的蓋片與第一張沒(méi)用藥的蓋片一同做染色處理。(二)細(xì)胞松馳素B處理成纖維細(xì)胞與染色觀察1．在平皿中有三張成纖維細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的蓋片，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將一張蓋片移入另一皿中繼續(xù)培養(yǎng)，用作對(duì)照。二、器材和儀器 光學(xué)顯微鏡一臺(tái)、鑷子一把、小平皿六個(gè)、載片三個(gè)、吸水紙、37℃恒溫箱。 大白鼠脛骺骨細(xì)胞電鏡照片，細(xì)胞核與核仁很清楚，細(xì)胞質(zhì)中有豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，液泡系發(fā)達(dá)，液泡由單層膜包圍，細(xì)胞周邊有液泡釋放。中性紅是液泡系特殊的活體染色劑，只將液泡系染成紅色，在細(xì)胞處于生活狀態(tài)時(shí)，細(xì)胞質(zhì)及核不被染色，中性紅染色可能與液泡中的蛋白有關(guān)。二、器材和儀器 光學(xué)顯微鏡一臺(tái)、手術(shù)器材一套、解剖盤一個(gè)、載片、蓋片、吸水紙。第三張是小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞線粒體，線粒體的脊為分支的管，在照片上呈單層膜泡狀。脊的數(shù)量與細(xì)胞呼吸機(jī)能的強(qiáng)度有很大關(guān)系。線粒體的數(shù)目與細(xì)胞類型和細(xì)胞的生理狀態(tài)有關(guān)，線粒體多聚集在細(xì)胞生理功能旺盛的區(qū)域。 (三)結(jié)果 顯微鏡觀察，肝細(xì)胞質(zhì)中許多線粒體被染成藍(lán)綠色，呈顆粒狀。 （二）方法 用空氣栓塞處死兔子，置于解剖盤內(nèi)，迅速打開腹腔，取兔肝邊緣較薄的肝組織一小塊（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿內(nèi)洗去血液(用鑷子輕壓)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿內(nèi)加1／300詹納斯綠B染液，讓組織塊上表面露在染液外面，使細(xì)胞內(nèi)線粒體的酶系可進(jìn)行充分的氧化，這樣才有利于保持染料的氧化狀態(tài)，使線粒體著色。細(xì)胞的各項(xiàng)活動(dòng)所需要的能量，主要是通過(guò)線粒體呼吸作用來(lái)提供的?！緦?shí)驗(yàn)用品】 一、材料和標(biāo)本 兔子一只、線粒體的電鏡照片。2．按下式求出目鏡測(cè)微尺每格代表的長(zhǎng)度 目鏡測(cè)微尺每格代表的長(zhǎng)度(μm)=X10 三、測(cè)量人口腔上皮細(xì)胞 從顯微鏡載物臺(tái)上取下鏡臺(tái)測(cè)微尺，換上人口腔上皮細(xì)胞標(biāo)本，測(cè)量細(xì)胞、細(xì)胞核的長(zhǎng)短徑。圓片中央刻有一條直線，此線被分為若干格，每格代表的長(zhǎng)度隨不同物鏡的放大倍數(shù)而異。 6．人口腔上皮細(xì)胞標(biāo)本的制備與觀察 用牙簽刮取口腔上皮細(xì)胞均勻地涂在載片上(不可反復(fù)涂沫)，滴一滴甲苯胺蘭染液，染色5分鐘，蓋上蓋片，吸去多余染液。白細(xì)胞數(shù)目少，為圓形。角緊貼在血滴的前緣，均勻用力向前推，使血液在載片上形成均勻的薄層。然后放在載片上，制片方法同脊髓壓片。 2．蟾蜍骨骼肌細(xì)胞的剝離與觀察 剪開蟾蜍腿部皮膚，剪下一小塊肌肉，放在載片上，用鑷子和解剖針剝離肌肉塊成為肌束，繼續(xù)剝離，可得到很細(xì)的肌纖維(肌細(xì)胞)。將上面的載片取下即可得到壓片。例如：哺乳類紅細(xì)胞成熟時(shí)細(xì)胞核消失?！緦?shí)驗(yàn)內(nèi)容】 一、細(xì)胞的基本形態(tài)觀察 (一)原理 細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)是很多細(xì)胞的共同特點(diǎn)，在分化程度較高的細(xì)胞更為明顯，這種合理性是生物漫長(zhǎng)進(jìn)化過(guò)程所形成的。實(shí)驗(yàn)一 動(dòng)物細(xì)胞的基本形態(tài)觀察和顯微測(cè)量【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹? 制備不同細(xì)胞的臨時(shí)制片，觀察、了解細(xì)胞的基本形態(tài)，學(xué)會(huì)使用測(cè)微尺，通過(guò)測(cè)量對(duì)紅細(xì)胞的進(jìn)化進(jìn)行分析。二、用鉛筆繪圖，線條要明確清晰，圖的深淺明暗一律以點(diǎn)的疏密來(lái)表示，點(diǎn)要圓而一致，不得涂暗影或進(jìn)行其它美術(shù)加工。 5．眼科鑷子：用于提取神經(jīng)、血管和筋膜等細(xì)軟組織。前者用于較大力量切開較長(zhǎng)距離的堅(jiān)韌的組織，如大動(dòng)物的皮膚切口等；后者則用于小力量的短距離切開，或分離皮膚和肌肉等。 二、常用手術(shù)器械及操作方法： 1．解剖針：用于挑、刺等。具體方法是：左手捉住小鼠(如前所述)，在其腹正中線稍外側(cè)(避開膀胱和血管)用酒精消毒后，首先將注射針頭向頭部方向刺入皮下，進(jìn)針1～2mm后，再以45176。斷頭法需用特殊的斷頭器，二氧化碳吸入法則將小鼠放入盛有二氧化碳的容器內(nèi)即可。 1．捉拿方法： 將小白鼠放在鼠籠蓋鐵網(wǎng)上，用右手持其尾巴向后拉，小鼠則會(huì)盡力向前蹬。在頭與軀干之間可觸及一凹陷(即枕骨大孔所在處)，右手持解剖針直插入此凹陷約l～2mm，隨即將針尖轉(zhuǎn)向頭側(cè)插入顱腔搗毀腦組織。其細(xì)胞較哺乳類動(dòng)物的細(xì)胞大得多，因此常用于觀察細(xì)胞形態(tài)的實(shí)驗(yàn)。在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩x用不同的動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。班級(jí)值日生負(fù)責(zé)清掃室內(nèi)衛(wèi)生，關(guān)好水、電開關(guān) 和門、窗等，經(jīng)教師允許后方可離開實(shí)驗(yàn)室。 損壞器材或設(shè)備者應(yīng)按有關(guān)規(guī)定進(jìn)行賠償。實(shí)驗(yàn)期間不得進(jìn)行任何與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的活動(dòng)。實(shí)驗(yàn)中途因故需外出時(shí)應(yīng)向任 課教師請(qǐng)假。 教材初稿曾于1989年《全國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課培訓(xùn)班》試用，參加該班的教師提出許多寶貴的經(jīng)驗(yàn)及修改意見，謹(jǐn)此致謝。選編了一些生物醫(yī)學(xué)常用的細(xì)胞生物學(xué)基本實(shí)驗(yàn)，如細(xì)胞的顯微測(cè)量、細(xì)胞活力測(cè)定、細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞組分的分級(jí)分離、細(xì)胞組分的化學(xué)反應(yīng)、細(xì)胞生理活動(dòng)、細(xì)胞染色體技術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合、免疫熒光技術(shù)、電鏡技術(shù)等，為后續(xù)的課程及醫(yī)學(xué)研究打下一定基礎(chǔ)。細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊(cè)前 言 這本實(shí)驗(yàn)教材是為高等醫(yī)學(xué)院校細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)編寫的，適用于五年制本科、七年制臨床專業(yè)和研究生班。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)采用生活細(xì)胞材料，由學(xué)生自己動(dòng)手取材和實(shí)驗(yàn)，使學(xué)生能對(duì)細(xì)胞獲得生動(dòng)的認(rèn)識(shí)。荊永顯、李虹、王序繪制插圖，畢衛(wèi)真負(fù)責(zé)印刷出版事宜。 目 錄前 言 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則……………………………………………………………… (1) 常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物了解和解剖器械的使用………………………………… (2) 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)繪圖方法與要求………………………………………（4）實(shí)驗(yàn) 一 動(dòng)物細(xì)胞的基本形態(tài)觀察和顯微測(cè)量…………………………………（5）實(shí)驗(yàn) 二 線粒體的活體染色及電鏡照片觀察……………………………………（8）實(shí)驗(yàn) 三 液泡系的活體染色及電鏡照片觀察……………………………………（10）實(shí)驗(yàn) 四 細(xì)胞中微絲的染色及微絲與細(xì)胞形態(tài)的實(shí)驗(yàn)觀察…………………… (11)實(shí)驗(yàn) 五 細(xì)胞器的光鏡切片和電鏡照片觀察……………………………………（13）實(shí)驗(yàn) 六 細(xì)胞生理活動(dòng)的觀察……………………………………………………（16）實(shí)驗(yàn) 七 細(xì)胞組分的化學(xué)反應(yīng)……………………………………………………（20）實(shí)驗(yàn) 八 細(xì)胞核與線粒體的分級(jí)分離……………………………………………（23）實(shí)驗(yàn) 九 細(xì)胞分裂的形態(tài)觀察……………………………………………………（26）實(shí)驗(yàn) 十 正常細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞常規(guī)核型的標(biāo)本制備…………………………… (31)實(shí)驗(yàn)十一 細(xì)胞融合…………………………………………………………………（36）實(shí)驗(yàn)十二 應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)制備染色體提前凝集標(biāo)本…………………………（38）實(shí)驗(yàn)十三 培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)觀察和計(jì)數(shù)……………………………………………（40）實(shí)驗(yàn)十四 細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)…………………………………………………（43）實(shí)驗(yàn)十五 酸性磷酸酶的顯示………………………………………………………（46）實(shí)驗(yàn)十六 腫瘤細(xì)胞的軟瓊脂集落培養(yǎng)和測(cè)定……………………………………（48）實(shí)驗(yàn)十七 電鏡生物標(biāo)本的制備及鏡下觀察………………………………………（50）實(shí)驗(yàn)十八 整裝培養(yǎng)細(xì)胞生物膜系統(tǒng)的光鏡和透射電鏡標(biāo)本制備與觀察………（54）實(shí)驗(yàn)十九 免疫熒光抗體法檢查細(xì)胞表面抗原……………………………………（56）實(shí)驗(yàn)二十 姊妹染色單體互換標(biāo)本制備與分析……………………………………（58）實(shí)驗(yàn)二十一 銀染核仁形成區(qū)的光鏡和電鏡標(biāo)本制備及觀察…………………… (60)實(shí)驗(yàn)二十二 染色體掃描電鏡標(biāo)本制備及觀察……………………………………（63）實(shí)驗(yàn)二十三 細(xì)胞顯微攝影…………………………………………………………（65） 附錄一 離心機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)與離心力的換算表………………………………（67） 附錄二 溶液的配制……………………………………………………（68） 主要參考資料……………………………………………………………（77）實(shí)驗(yàn)室規(guī)則 一、遵守實(shí)驗(yàn)紀(jì)律，按時(shí)到達(dá)實(shí)驗(yàn)室，不得遲到或早退。 四、必須嚴(yán)肅認(rèn)真地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如遇儀器損壞或不靈，應(yīng)及時(shí)報(bào)告任課教師，以便修理或更換，不要自行亂修。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組必須認(rèn)真清理各自的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，將器材 清洗后點(diǎn)清數(shù)目，然后擺放整齊。常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的了解和解剖器械的使用 一、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有蟾蜍、小白鼠、大白鼠、豚鼠、貓、兔和狗等。 蟾蜍 蟾蜍是兩棲類動(dòng)物，由于其取材方便，常用于各種實(shí)驗(yàn)。具體方法是，左手握住蟾蜍的身體和四肢，使其腹部貼著掌心，食指壓住蟾蜍頭部前端使其盡量腹屈。 小白鼠 小白鼠是哺乳動(dòng)物，是最為常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。常用的方法有頸椎脫位法，斷頭法和二氧化碳吸入法等。我們常用的是腹腔注射?！?0克體重。持法有執(zhí)弓法與執(zhí)筆法兩種。 4．眼科剪刀：用于剪斷神經(jīng)、血管、筋膜等細(xì)軟組織。 常用手術(shù)器械執(zhí)手術(shù)刀的姿勢(shì)執(zhí)手術(shù)剪的姿勢(shì)執(zhí)手術(shù)鑷的姿勢(shì)執(zhí)手術(shù)刀、手術(shù)剪、手術(shù)鑷的姿勢(shì)(張之曾編)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)繪圖方法與要求一、在仔細(xì)觀察的基礎(chǔ)上，選擇典型結(jié)構(gòu)進(jìn)行描繪，要求真實(shí)、準(zhǔn)確(注意各部結(jié)構(gòu)的比例關(guān)系)。四、每幅圖的大小、位置在紙面上必須安排得當(dāng)并注意紙面的整潔。 三、試劑 1％甲苯胺蘭、1％甲基蘭、Ringer氏液(兩棲類用)。但也有例外。將另一載片壓在脊髓碎塊上，用力擠壓。染成蘭紫色的、大的、有多個(gè)突起的細(xì)胞是脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞，胞體呈三角形或星形，中央有一個(gè)圓形細(xì)胞核，內(nèi)有一個(gè)核仁(參照照片)。 3．蟾蜍肝臟壓片的制備與觀察剪開蟾蜍腹腔，取一小塊(約2～3mm 3)肝放在平皿內(nèi)，用Ringer氏液洗凈，用鑷子輕壓將肝中的血擠出。 4．蟾蜍血涂片的制備與觀察 取一滴蟾蜍血液，靠近一端滴在載片上．將另一載片的一端呈45176。顯微鏡觀察可見蟾蜍紅細(xì)胞為橢球形，有核。自細(xì)胞數(shù)目少，為圓形。目鏡測(cè)微尺是一個(gè)放在目鏡像平面上的玻璃圓片。 (二)方法 1．將鏡臺(tái)測(cè)微尺放在顯微鏡的載物臺(tái)上夾好，小心轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡測(cè)微尺和移動(dòng)鏡臺(tái)測(cè)微尺使兩尺平行，記錄鏡臺(tái)測(cè)微尺若干格所對(duì)應(yīng)的目鏡測(cè)微尺的格數(shù)(圖1—2)。 計(jì)算細(xì)胞、細(xì)胞核體積的公式： 圓 形 V=4/3πr 3(r為半徑) 橢圓形 V=