細胞生物學研究方法(3)-展示頁
2025-01-25 21:04本頁面
【正文】 制樣技術(shù) P57 ? 1）超薄切片 ? 電子束穿透力很弱，用于電鏡觀察的標本須制成厚度僅50nm的超薄切片，用超薄切片機（ ultramicrotome）制作。 ? 分辨力 ， 放大倍數(shù)可達百萬倍 。 電子束的波長短 ， 并且波長與加速電壓 (通常 50~120KV)的平方根成反比 。 ? 自動化與電子化 。 （八）倒置顯微鏡 inverse microscope ? 物鏡與照明系統(tǒng)顛倒 ， 前者在載物臺之下 ， 后者在載物臺之上 ， 用于觀察 培養(yǎng)的活細胞 ， 通常具有相差物鏡 ， 有的還具有熒光裝置 。 淀粉 （七）微分干涉差顯微鏡 Differential interference contrast microscope （ DIC） P52 ? 1952年 ， Nomarski發(fā)明 ， 利用兩組平面偏振光的干涉 ，加強影像的明暗效果 ， 能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影 。 ? 光源前有偏振片 （ 起偏器 ） ， 使進入顯微鏡的光線為偏振光 ， 鏡筒中有檢偏器 （ 與起偏器方向垂直的偏振片 ） 。 2. 相位板 （ annular phaseplate） ：物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板 ， 可將直射光或衍射光的相位推遲 1/4λ。 ? 把透過標本的可見光的光程差變成振幅差 ， 從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度 ， 使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見 。 laser confocal scanning microscope, LCSM LCSM Image of a Xenopus Melanophore microtubule cytoskeleton (green) and the nucleus (blue) （四）暗視野顯微鏡 dark field microscope ? 聚光鏡中央有擋光片，照明光線不直接進人物鏡，只允許被標本反射和衍射的光線進入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的。 ? 分辨力是普通光學顯微鏡的 3倍。 （三）激光共聚焦掃描顯微境 Laser confocal scanning microscope, LCSM P53 ? 用激光作光源，逐點、逐行、逐面快速掃描。 Fluorescence image of epithelial cell, DNA in blue and Microtubules in green ? 用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。 – 普通光線的波長為 400~700nm，分辨力數(shù)值不會小于，人眼的分辨力為 ，因此顯微鏡的最大設計倍數(shù)為 1000X。 ? D=*A – 其中 λ為入射光線波長； A為鏡口率 ＝ sinα/2， N 介質(zhì)折射率； α=鏡口角（樣品對物鏡鏡口的張角） ? 思考：如何提高顯微鏡的分辨能力？ 表一、幾種介質(zhì)的折射率 介質(zhì) 空氣 水 香柏油 α 溴萘 折射率 1 ? 顯微鏡的幾個光學特點： – 制作光學鏡頭所用的玻璃折射率為 ~，所用介質(zhì)的折射率越接近玻璃的越好。 — 、光學顯微鏡 ? 1. 構(gòu)成： ? ①照明系統(tǒng) ? ②光學放大系統(tǒng) ? ③機械裝置 ? 2. 原理：經(jīng)物鏡形成倒立實像，經(jīng)目鏡進一步放大成像。第三章 細胞生物學研究方法 METHODS AND TECHNIQUES 本章內(nèi)容提要 ? 第一節(jié) 顯微技術(shù) ? 一、光學顯微鏡 ? 二、電子顯微鏡 ? 三、顯微操作技術(shù) ? 第二節(jié) 生物化學與分子生物學技術(shù) ? 第三節(jié) 細胞分離技術(shù) ? 第四節(jié) 細胞培養(yǎng)與細胞雜交 第一節(jié) 顯微技術(shù) ? 光學顯微鏡：以可見光（或紫外線）為光源。 ? 電子顯微鏡：以電子束為光源。 （一）普通光學顯微
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