細(xì)胞生物學(xué)研究方法(3)-文庫(kù)吧資料
2025-01-22 21:04本頁(yè)面
【正文】 的方法 ， 操作時(shí)先用限制性?xún)?nèi)切酶將核 DNA或線粒體 DNA切成 DNA片段 ，經(jīng)凝膠電泳分離后 ， 轉(zhuǎn)移到醋酸纖維薄膜上 ， 再用探針雜交 ， 通過(guò)放射自顯影 ， 即可辨認(rèn)出與探針互補(bǔ)的特殊核苷序列 。 ? 用于檢測(cè)染色體上的特殊 DNA序列 。 這種技術(shù)可用來(lái)測(cè)定單鏈分子核苷酸序列間是否具有互補(bǔ)關(guān)系 。 – 14C半衰期為 5730年 ， 3H為 。 ? 一般用 14C和 3H標(biāo)記 。 四、放射自顯影術(shù) ? 用于研究標(biāo)記化合物在機(jī)體 、 組織和細(xì)胞中的分布 、 定位 、排出以及合成 、 更新 、 作用機(jī)理 、 作用部位等等 。 三、顯微光譜分析技術(shù) ? 細(xì)胞中有一些成分具有特定的吸收光譜，核酸、蛋白質(zhì)、細(xì)胞色素、維生素等都有自己特征性的吸收曲線。 ? 免疫熒光法 （ immunofluorescent technique） ：常用的螢光素有異硫氰酸熒光素 、 羅丹明等 。 二、免疫細(xì)胞化學(xué) immunocytochemistry ? 根據(jù)免疫學(xué)原理 ， 利用抗體同特定抗原專(zhuān)一結(jié)合 ， 對(duì)抗原進(jìn)行定位測(cè)定的技術(shù) 。 4. 脂溶染色法：借蘇丹染料溶于脂類(lèi)而使脂類(lèi)顯色 。 3. 聯(lián)苯胺反應(yīng)：過(guò)氧化酶分解 H202。 2. Schiff反應(yīng)：細(xì)胞中的醛基可使 Schiff試劑中的無(wú)色品紅變?yōu)榧t色 。 顯示多糖常用乙醇固定 ， 顯示酶類(lèi)多用甲醛丙酮緩沖液固定 。 ? （ 一 ） 固定 1. 物理固定：血膜空氣快速干燥 、 冷凍干燥 。 我國(guó)著名學(xué)者童第周等上個(gè)世紀(jì) 70年代在魚(yú)類(lèi)細(xì)胞核移植方面進(jìn)行了許多工作 ， 并取得了豐碩成果 。 ? 顯微操作技術(shù)包括細(xì)胞核移植 、 顯微注射 、 嵌合體技術(shù) 、胚胎移植以及顯微切割等 。 掃描隧道顯微鏡原理 STM image, Benzene molecules accumulate at step edges on Cu 三、顯微操作技術(shù) micromanipulation technique ? 在倒置顯微鏡下利用顯微操作器進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎操作的一種方法 。 ? 分辨率：橫向?yàn)?~， 縱向可達(dá) 。 掃描電子顯微鏡原理 人類(lèi)紅細(xì)胞 酵母 人類(lèi)精子 （三）掃描隧道顯微鏡 P63 scanning tunneling microscope， STM ? 原理：根據(jù)隧道效應(yīng)而設(shè)計(jì) ， 當(dāng)原子尺度的針尖在不到一個(gè)納米的高度上掃描樣品時(shí) ， 此處電子云重疊 ， 外加一電壓 （ 2mV~2V） ， 針尖與樣品之間形成隧道電流 。 （二）掃描電子顯微鏡 SEM P62 Scanning electron microscope（ SEM） ? 工作原理：是用一束極細(xì)的電子束掃描樣品，在樣品表面激發(fā)出次級(jí)電子，次級(jí)電子的多少與樣品表面結(jié)構(gòu)有關(guān)，次級(jí)電子由探測(cè)器收集，信號(hào)經(jīng)放大用來(lái)調(diào)制熒光屏上電子束的強(qiáng)度，顯示出與電子束同步的掃描圖像。 A Yeast Cell ? 20世紀(jì) 60年代問(wèn)世 ， 用來(lái)觀察標(biāo)本表面結(jié)構(gòu) 。 向斷裂面上噴涂一層蒸汽碳和鉑 。 標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍 。 2）負(fù)染技術(shù) P60 ? 用重金屬鹽 (如磷鎢酸 )對(duì)鋪展在載網(wǎng)上的樣品染色；吸去染料，干燥后，樣品凹陷處鋪了一層重金屬鹽，而凸出的地方?jīng)]有染料沉積，從而出現(xiàn)負(fù)染效果，分辨力可達(dá)。 1. 原理 透射電子顯微鏡 TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPE， TEM 電子束 名 稱(chēng) 可見(jiàn)光 紫外光 X 射線 α 射線 0. 1Kv 10Kv 波長(zhǎng)（ nm ） 390~ 760 13~ 390 0. 05~ 13 0. 005~ 1 0. 123 0. 0122 表二、不同光線的波長(zhǎng)
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