【正文】 1中是保守的 。 SUMO1的三級結構包括一個與泛素同源區(qū)域（ 氨基酸序列 22－ 97） 。 SUMO家族成員都有獨特的 N端氨基酸序列和碳端外延序列。 SUMO化（ sumoylation）的功能與泛素化 (ubiquitination)不同，它并不使蛋白降解，反而加強它們的穩(wěn)定性或調節(jié)它們在細胞內的定位和分布 . SUMO家族成員包括 SUMO1， SUMO2， SUMO3。 α亞基主要用于底物識別， β亞基主要參與底物降解。 泛素 C末端水解酶（ UCHs） UCHs多為含巰基蛋白酶，分子量大小不等，能特異識別泛素 C末端區(qū)域，解離泛素與靶蛋白的結合 , 促進泛素再循環(huán)，所以對泛素系統(tǒng)的正常運行很必要。 ? 泛素 蛋白連接酶 (UbiquitinProtin Ligases, E3)：一類大分子蛋白質 ， 結構復雜 ， 主要作用是特異識別靶蛋白 ， 并將其傳遞給蛋白酶體降解 。 甘氨酸殘基 C末端殘基 Positive charged 酶 系 統(tǒng) ? 泛素 激活酶 （ UbiquitinActivating Enzyme, E1） ：在人類僅發(fā)現(xiàn)一種 ，主要功能是激活泛素 。 泛素的二級結構包括了 5個 β折疊， 35個 α螺旋及 7個反螺旋，其外觀是一個緊密壓縮的球狀蛋白質，從球體的表面伸出 4個 C末端殘基，作為泛素化蛋白質的結合位點 . 泛素肽鏈中約 70%由氫鍵組成，決定了它的熱穩(wěn)定特性及耐受寬范圍的pH值。目前發(fā)現(xiàn)所有生物的泛素都是由氨基酸編碼的，而且序列相當保守。 蛋白降解的系統(tǒng) 溶酶體蛋白溶解系統(tǒng) 非溶酶體蛋白溶解系統(tǒng) 泛素 — 蛋白酶系統(tǒng) 鈣依賴性的 蛋白溶解系統(tǒng) 泛素、 26s蛋白酶體、 酶系統(tǒng) (E E E E4 、 泛素 C— 末端水解酶 ) 普遍存在于原核生物和真核生物細胞中，是真核細胞內最重要的非溶酶體性的蛋白溶解系統(tǒng) 主要功能是降解機體正常情況下特 別是應激狀態(tài)下產生的異常細胞漿 內短壽命蛋白質，包括一些重要的 調節(jié)蛋白如轉錄因子、細胞周期調 節(jié)因子和信號轉錄因子等。蛋白質通過動態(tài)相互作 用，形成大的復合體，在特定的時間和空間中完成特定的功能，這其中也發(fā) 生特定的蛋白質修飾。蛋白質的功能與其空間定位有著密切的相關，且 通過在不同亞細胞環(huán)境里的轉位而發(fā)揮作用。 4，樣品是“ 死”的 . 掃描電子顯微鏡 優(yōu)點： 1，樣品制作較簡便 2，樣品可動自由度大 3，圖像富有立體感 4，放大范圍廣 5，可從觀察樣品表現(xiàn)形貌獲得 多方面資料 6，可進行微區(qū)成分分析。 2，對單個原子顯微觀察不理想 。 3，自動化程度高 。 透射電子顯微 鏡 TEM優(yōu)點： 1，極高的分辨率和放大倍數(shù) 。 ? AFM對于生物系統(tǒng)的成像分析比光學顯微鏡具有更高的分辨率 （ 大約可以到 1nm） ， 比電鏡觀察所需要的樣品處理更接近于生理條件 ， 并且比光譜學技術 （ 通常需要從大量光譜信號中間接推導出結構信息 ） 更直觀 。 相互作用分析包括：分子結合定量分析 , 動力學和親和性分析，結合能力和協(xié)同性分析（結合速率 Ka，解離速率Kd，結合常數(shù) KD） 不用對樣品作任何標記和修飾 圓二色譜分析蛋白構象改變 旋光值計算： 分子對接模擬預測化合物與蛋白結合的模型 O HH O OOOKd= ?M O HH O OOKd: ND A320nmR adius (cm) Comp o u n d B T R3 A320nmR adius (c m) TR 3 + C o m p o u n d B6. 95 7. 00 7. 05 7. 100. 00. 10. 20. 30. 40. 50. 60. 7 A320nmR a dius (c m ) Com po un d B G ST G ST+ Com po un d B A280nmR a dius (c m ) Co m po un d B TR3 TR3 + Com po un d B分析超離方法檢測化合物與蛋白的相互作用 原子力顯微鏡 (AFM) ? 優(yōu)點： 1)原子力顯微鏡作為掃描探針顯微鏡的一種 ， 可觀察生物形態(tài)結構 。 熒光滴定方法分析小分子化合物 與蛋白的結合 關鍵點： 熒光分光光度計 純化蛋白（能夠自發(fā)熒光，脯氨酸、色氨酸基團） 蛋白質相互作用儀 Cell, virus, bacteria, protein, DNA and small molecular。 核磁共振儀分析蛋白質的二級結構 核磁共振圖譜 計算方程： lg(Fo/F1)=lgKA+nlg[Q]； 其中： Fo， F分別為蛋白質與藥物作用前后的熒光強度； [Q]為藥物濃度； KA為結合常數(shù)。 ? 二維 核磁共振 技術測定蛋白質分子在溶液中的結構。 ? 質譜分析 ：通過酶解產生肽段片段，通過質譜儀分析肽指紋圖譜，從而獲得氨基酸序列，再與網(wǎng)上蛋白庫匹配，來確定是已知還是未知蛋白。 熒光探針 JC1檢測線粒體膜電位 蛋白結構的分析 ? 利用 Edman降解法直接測定蛋白質分子中的肽段序列，并拼接出蛋白質分子的全序列。 ? 它在線粒體上以單體和聚合體兩種不同的物理形式存在。 蛋白表達量以面積表示。 流式細胞術定量蛋白表達量 限制：僅用于膜蛋白含量的檢測。 ? 最大優(yōu)點：樣品無需染色，可以觀 察活細胞 流式細胞技術的應用 細胞分選 周期、凋亡測定 細胞表面蛋白定量 DNA滲入量測定 線粒體膜電位測定 流式細胞術定量分析 細胞凋亡率和細胞周期 DAPI染色細胞 流式細胞儀分析 可用于分選細胞 流式細胞術直接定量分析 細胞存活率 ? PI（碘化丙啶）染色細胞，不能透過活細胞膜，但可以結合到死細胞的 DNA碎片上。 ? 最常用的兩種細胞融合： NIH3T3, HeLa ? 研究過程需要用 CHX， 以抑制新的蛋白合成 小鼠成纖維細胞 :NIH3T3 人宮頸癌細胞 :HeLa 相差顯微鏡技術 ? 相差顯微鏡和普通光學顯微鏡最主要的不同點是在物鏡后面安裝一