細胞生物學研究方法(1)-文庫吧資料
2025-01-22 21:11本頁面
【正文】 酸纖維薄膜上 ， 再用探針雜交 ， 通過放射自顯影 ， 即可辨認出與探針互補的特殊核苷序列 。 ? 用于檢測染色體上的特殊 DNA序列 。 這種技術(shù)可用來測定單鏈分子核苷酸序列間是否具有互補關(guān)系 。 – 14C半衰期為 5730年 ， 3H為 。 ? 一般用 14C和 3H標記 。 四、放射自顯影術(shù) ? 用于研究標記化合物在機體 、 組織和細胞中的分布 、 定位 、排出以及合成 、 更新 、 作用機理 、 作用部位等等 。 三、顯微光譜分析技術(shù) ? 細胞中有一些成分具有特定的吸收光譜，核酸、蛋白質(zhì)、細胞色素、維生素等都有自己特征性的吸收曲線。 ? 免疫熒光法 （ immunofluorescent technique） ：常用的螢光素有異硫氰酸熒光素 、 羅丹明等 。 二、免疫細胞化學 immunocytochemistry ? 根據(jù)免疫學原理 ， 利用抗體同特定抗原專一結(jié)合 ， 對抗原進行定位測定的技術(shù) 。 4. 脂溶染色法：借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色 。 3. 聯(lián)苯胺反應：過氧化酶分解 H202。 2. Schiff反應：細胞中的醛基可使 Schiff試劑中的無色品紅變?yōu)榧t色 。 顯示多糖常用乙醇固定 ， 顯示酶類多用甲醛丙酮緩沖液固定 。 ? （ 一 ） 固定 1. 物理固定：血膜空氣快速干燥 、 冷凍干燥 。 我國著名學者童第周等上個世紀 70年代在魚類細胞核移植方面進行了許多工作 ， 并取得了豐碩成果 。 ? 顯微操作技術(shù)包括細胞核移植 、 顯微注射 、 嵌合體技術(shù) 、胚胎移植以及顯微切割等 。 掃描隧道顯微鏡原理 STM image, Benzene molecules accumulate at step edges on Cu 三、顯微操作技術(shù) micromanipulation technique ? 在倒置顯微鏡下利用顯微操作器進行細胞或早期胚胎操作的一種方法 。 ? 分辨率：橫向為 ~， 縱向可達 。 掃描電子顯微鏡原理 人類紅細胞 酵母 人類精子 （三）掃描隧道顯微鏡 scanning tunneling microscope， STM ? 原理：根據(jù)隧道效應而設(shè)計 ， 當原子尺度的針尖在不到一個納米的高度上掃描樣品時 ， 此處電子云重疊 ， 外加一電壓 （ 2mV~2V） ， 針尖與樣品之間形成隧道電流 。 （二）掃描電子顯微鏡 Scanning electron microscope（ SEM） ? 工作原理：是用一束極細的電子束掃描樣品，在樣品表面激發(fā)出次級電子，次級電子的多少與樣品表面結(jié)構(gòu)有關(guān)，次級電子由探測器收集，信號經(jīng)放大用來調(diào)制熒光屏上電子束的強度，顯示出與電子束同步的掃描圖像。 A Yeast Cell ? 20世紀 60年代問世 ， 用來觀察標本表面結(jié)構(gòu) 。 向斷裂面上噴涂一層蒸汽碳和鉑 。 標本置于干冰或液氮中冰凍 。 2）負染技術(shù) ? 用重金屬鹽 (如磷鎢酸 )對鋪展在載網(wǎng)上的樣品染色；吸去染料，干燥后，樣品凹陷處鋪了一層重金屬鹽，而凸的出地方?jīng)]有染料沉積，從而出現(xiàn)負染效果，分辨力可達。 1. 原理 透射電子顯微鏡 TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPE， TEM 電子束 名 稱 可見光 紫外光 X 射線 α 射線 0. 1Kv 10Kv 波長（ nm ） 390~ 760 13~ 390 0. 05~ 13 0. 005~ 1 0. 123 0. 0122 表二、不同光線的波長 制樣技術(shù) ? 1）超薄切片 ? 電子束穿透力很弱，用于電鏡觀察的標本須制成厚度僅50nm的超薄切片，用超薄切片機（ ultramicrotome）制作。 ? 分辨力 ， 放大倍數(shù)可達百萬倍 。 電子束的波長短 ， 并且波長與加速電壓 (通常 50~120KV)的平方根成反比 。 ? 自動化
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