細(xì)胞生物學(xué)研究方法(3)-資料下載頁(yè)
2025-01-16 21:04本頁(yè)面
【正文】 ation 二、流式細(xì)胞術(shù) ? 用途：對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析與分選的一門(mén)技術(shù) 。 ? 原理：包在鞘液中的細(xì)胞通過(guò)高頻振蕩控制的噴嘴 ， 形成包含單個(gè)細(xì)胞的液滴 ， 在激光束的照射下 ， 這些細(xì)胞發(fā)出散射光和熒光 ， 經(jīng)探測(cè)器檢測(cè) ， 轉(zhuǎn)換為電信號(hào) ， 送入計(jì)算機(jī)處理 ， 輸出統(tǒng)計(jì)結(jié)果 ， 并可根據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度的細(xì)胞亞群 ， 分離純度可達(dá) 99%。 包被細(xì)胞的液流稱(chēng)為鞘液 ， 所用儀器稱(chēng)為流式細(xì)胞計(jì) （ flow cytometer） 。 第四節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞雜交 一、細(xì)胞培養(yǎng) （一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) ? 群體培養(yǎng) （ mass culture） ：將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中 ， 讓細(xì)胞貼壁生長(zhǎng) ，匯合 （ confluence） 后形成均勻的單細(xì)胞層； ? 克隆培養(yǎng) （ clonal culture） ：培養(yǎng)高度稀釋的細(xì)胞懸液 ， 細(xì)胞貼壁生長(zhǎng) ， 每一個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞集落 ， 稱(chēng)為克隆 。 ? 原代培養(yǎng) （ primary culture） 即：培養(yǎng)直接來(lái)自動(dòng)物機(jī)體的細(xì)胞群 ， 將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個(gè)培養(yǎng)瓶稱(chēng)為傳代或傳代培養(yǎng) （ Passage） 。 ? 細(xì)胞株 （ cell strain） ：從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群 。 ? 細(xì)胞系 （ cell line） ：從腫瘤組織培養(yǎng)建立的細(xì)胞群或培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞 ， 可 無(wú)限繁殖 。 ? 克隆 （ clone） ：亦稱(chēng)無(wú)性系 。 指由同一個(gè)祖先細(xì)胞通過(guò)有絲分裂產(chǎn)生的 遺傳性狀一致 的細(xì)胞群 。 實(shí)驗(yàn)室中常用的幾種細(xì)胞系 細(xì)胞系名稱(chēng) 細(xì)胞類(lèi)型 來(lái)源 3T3 成纖維細(xì)胞 小鼠 HeLa 宮頸癌上皮細(xì)胞 Henrietta Lacks BHK21 成纖維細(xì)胞 敘利亞倉(cāng)鼠 PtKl 上皮細(xì)胞 袋鼠 L6 成肌細(xì)胞 大鼠 PCI2 嗜鉻細(xì)胞 大鼠 SP2 漿細(xì)胞 小鼠 SP2／ 0 骨髓瘤漿細(xì)胞 小鼠 CHO 卵巢細(xì)胞 中國(guó)地鼠 Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 （二）植物細(xì)胞培養(yǎng) 1. 外植體培養(yǎng)：誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。用于研究植物的生長(zhǎng)發(fā)育、分化和變異；進(jìn)行無(wú)性繁殖；制取代謝產(chǎn)物。 2. 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)：適合于進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，制取植物代謝產(chǎn)物。 3. 原生質(zhì)體培養(yǎng)：培養(yǎng)脫壁后的細(xì)胞，特點(diǎn)： – ①比較容易攝取外來(lái)的遺傳物質(zhì)，如 DNA； – ②便于進(jìn)行細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞； – ③適宜條件下可產(chǎn)生細(xì)胞壁，經(jīng)誘導(dǎo)分化成完整植株。 4. 單倍體培養(yǎng)：通過(guò)花藥或花粉培養(yǎng)可獲得單倍體植株。 Plant Cell Culture Animal Cell Culture 二、細(xì)胞融合 ? 通過(guò)培養(yǎng)和介導(dǎo) ， 兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞合并成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的過(guò)程稱(chēng)為細(xì)胞融合 （ cell fusion） 或細(xì)胞雜交 。 ? 同核體： 相同基因型的細(xì)胞融合而成 。 ? 異核體： 不同基因型的細(xì)胞融合而成 。 ? 自發(fā)融合： 同種細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中自發(fā)合并的現(xiàn)象 。 ? 誘發(fā)融合： 異種間的細(xì)胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合 。 ? 誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法： 生物方法 （ 仙臺(tái)病毒 、 副流感病毒和新城雞瘟病毒 ） 、 化學(xué)方法 （ 聚乙二醇 PEG） 、 物理方法 （ 電擊和激光 ） 。 ?單克隆抗體技術(shù) ?正常淋巴細(xì)胞 （ 如小鼠脾細(xì)胞 ） 具有分泌抗體的能力 ， 但不能長(zhǎng)期培養(yǎng) ， 瘤細(xì)胞 （ 如骨髓瘤 ） 可以在體外長(zhǎng)期培養(yǎng) ， 但不分泌抗體 。 于是英國(guó)人 Kohler和 Milstein 1975將兩種細(xì)胞雜交而創(chuàng)立了單克隆抗體技術(shù) ， 獲 1984年諾貝爾獎(jiǎng) 。
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