細(xì)胞生物學(xué)實驗細(xì)胞融合-資料下載頁
2025-01-18 02:30本頁面
【正文】 圖 單克隆抗體的應(yīng)用 ? 主要用于疾病的診斷、治療和預(yù)防。與常規(guī)抗體相比，具有特異性強、靈敏度高的優(yōu)點。如；各種癌癥、肝炎病毒、 SARS病毒、細(xì)菌及血吸蟲等數(shù)百種疾病的診斷；在疾病治療方面，單克隆抗體猶如人體衛(wèi)士，能識別 “ 自己 ” 與 “ 異己 ” ，一旦發(fā)現(xiàn) 致病因素便與之結(jié)合將其殺死。 ? 若在單抗上帶上抗癌藥物制成 “ 生物導(dǎo)彈 ” ，將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在部位，既消滅了癌細(xì)胞又不會傷害健康細(xì)胞 ? 美國科學(xué)家采用細(xì)胞融合技術(shù)將番茄和馬鈴薯的細(xì)胞融合在一起，培育出稱之為“ 番茄薯 ” 或 “ 薯番茄 ” 的新型植物。植株地上部結(jié)番茄，地下部生長根莖，產(chǎn)量高，品質(zhì)好。 動物細(xì)胞融合與單克隆抗體 思考與探究 ? 有什么不同？ 提示：植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)基本相同，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動物細(xì)胞融合是兩個體細(xì)胞直接融合。 ，為什么要選用 B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？ ? 提示：哺乳動物感染抗原后，其體內(nèi)會形成相應(yīng)的 B淋巴細(xì)胞， B淋巴細(xì)胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。動物在免疫反應(yīng)的過程中，每一種 B淋巴細(xì)胞能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的 B淋巴細(xì)胞大量增殖。 ? B淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖 ? 骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。 ? 因此，把一種 B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會兼有兩個親本細(xì)胞的特性 ──在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。 ? 3已成功的動物細(xì)胞融合實例還有哪些？ ? 生物種類 細(xì)胞來源 成功年代 ? 酵母菌 — 雞 原生質(zhì)體 — 血紅細(xì)胞 1975年 ? 人 — 胡蘿卜 腹水癌細(xì)胞 — 原生質(zhì)體 1976年 ? 人 — 小鼠 纖維肉瘤細(xì)胞 — 畸胎瘤細(xì)胞 1978年 進(jìn)行細(xì)胞融合？ ? 就目前常用的細(xì)胞融合方法來看，不管是用物理的、化學(xué)的方法，還是生物的方法，其融合率都不可能是 100%。 ? 僅用兩個細(xì)胞融合，其效率太低，不一定能得到融合細(xì)胞。更重要的是，即使兩個細(xì)胞已發(fā)生融合，但并不一定是研究者期望得到的細(xì)胞類型。目前動物細(xì)胞融合技術(shù)最有價值的應(yīng)用就是單克隆抗體的制備。我們以制備單克隆抗體為例來說明這一問題。我們知道，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬種以上，但是每一個 B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，如果僅取一個脾細(xì)胞（含 B淋巴細(xì)胞）和一個瘤細(xì)胞雜交，我們不能確定該脾細(xì)胞分泌的抗體是否正是我們所需要的；若用大量的脾細(xì)胞和瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，就可以從融合細(xì)胞中篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。 5. 雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？ ? 融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用 “ 有限稀釋法 ”來選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來自單個細(xì)胞，挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行 3～ 4次，直至確信每個孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。 這樣的人畜細(xì)胞融合會造成什么后果？ 4位專家分析指出： 首先，某些目前未知的兔子疾病將傳染給人類，就像艾滋病病毒可能是從非洲猩猩而來。 盡管中山醫(yī)科大學(xué)把胚胎用于治療性克隆研究，但萬一被居心叵測者植人人類子宮，就可能產(chǎn)生一個人兔雜交種。 “ 這完全是對人類尊嚴(yán)的褻讀。 ” 精子和卵子受精 肌管 破骨細(xì)胞 是由好幾個 細(xì)胞 融合 巨 細(xì) 胞 骨巨細(xì)胞瘤 骨巨細(xì)胞瘤 綠色箭頭所指為正在融合的間質(zhì)細(xì)胞 附錄： 蟾蜍血紅細(xì)胞 \雞血紅細(xì)胞 ? [實驗步驟 ] ? ： ? (1)Alsver液：葡萄糖 g，檸檬酸鈉 g，氯化鈉 g，加重蒸水至 100 mL 即可。 ? (2)GKN液：氯化鈉 8 g，氯化鉀 g， 磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉 ，葡萄糖 2 g，酚紅 g，溶于 1000mL重蒸水中。 ? (3)Ringer溶液：二氯化鈉 ，氯化鉀 ，氯化鈉 (恒溫動物 9g)溶于 1000 mL蒸餾水中。 (4)50％ PEG混合液：稱取少許 PEG(Mw 4000)放人刻度離心管內(nèi)，在沸水浴中加熱， 的等體積的 GKN液，混勻。 [實驗步驟 ] ? ： ? (1)蟾蜍血紅細(xì)胞懸液制備：注射器吸 1mLAlsver液后，從蟾蜍主動脈弓取血 1mL ，再加入 2mLAlsver液放入刻度離心管內(nèi)，按照 3：1(V／ V)加入 6mL Alsver液混勻，放入 4℃ 冰箱內(nèi)可保存 34天。 (2)雞血紅細(xì)胞懸液的制備：用注射器吸入 1mLAlsver液后從雞翼下靜脈取血 2mL，注入刻度離心管內(nèi)，按照 3： 1(V／ V)加入 6mL Alsver液混勻。 ? 1mL，移入 10mL離心管， 加 ％生理鹽水。1500r／ min離心 5 min。 ? ，加 ％生理 鹽水至 5mL，混勻后 1500r／ min離心5min。重復(fù)再離心洗滌 1次。 ? 1次離心沉淀的血細(xì)胞，加適量的 GKN液或 Ringer溶液，按壓積紅細(xì)胞體積配成 10％的紅細(xì)胞懸液。 ? 1mL到 1個試管中，加入 ～ mL預(yù)熱的 50％ PEG混勻，置于 30℃ 水浴 2min； 再加入 Ringer或 Hanks液 5ml以終止 PEG的作用 。取血細(xì)胞懸液 1滴滴于載玻片上，再加入 %次甲基藍(lán)溶液 1滴 ,蓋上蓋玻片。 ? 6. 顯微鏡 (高倍 ) 觀察 2個或 3個靠近細(xì)胞融合過程。 ? ，統(tǒng)計平均融合
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