【正文】 臟，洗去血液。(2) 在干凈的凹面載玻片的凹穴中, 滴加詹納綠B應(yīng)用液，再將肝組織塊移入染液，注意不可將組織塊完全淹沒，要使組織塊上面部分半露在染液外，這樣細(xì)胞內(nèi)的線粒體表面可充分得到氧化，易被染色。當(dāng)組織塊邊緣被染成藍(lán)綠色即成(—般需染2030 min)。(3) 吸去染液，滴加Ringer 溶液，用眼科剪將組織塊著色部分剪碎，使細(xì)胞或細(xì)胞群散出。然后，用吸管吸取分離出的細(xì)胞懸液，滴一滴子載玻片上，蓋上蓋玻片進(jìn)行觀察。(4) 在低倍鏡下選擇不重疊的肝細(xì)胞，在高倍鏡或油鏡下觀察，可見具有l(wèi)～2個(gè)核的肝細(xì)胞質(zhì)中，有許多被染成藍(lán)綠色的線粒體，注意其形態(tài)和分布狀況。 3. 洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞線粒中的超活染色觀察(1) 用吸管吸取詹納斯綠B應(yīng)用染液，滴一滴于干凈的載破片上，然后撕取一小片洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，置于染液中，染色1015 min。(2) 用吸水紙吸去染液，加—滴Ringer液，注意使內(nèi)表皮組織展平，蓋上蓋玻片進(jìn)行觀察。(3) 在高倍鏡下，可見洋蔥表皮細(xì)胞中央被一大液泡所占據(jù)、細(xì)胞核被擠至—側(cè)細(xì)胞壁處。細(xì)觀察細(xì)胞質(zhì)中線粒體的形態(tài)與分布。 4. 植物細(xì)胞液泡系的超活染色與觀察(1) 取黃豆(或豆芽)的根尖，用刀片縱切根尖，在切好的黃豆根尖滴入中性紅染 液滴中，染色510 min。 (2) 吸去染液，滴一滴Ringer液。(3) 蓋上蓋玻片進(jìn)行鏡檢(鑷子輕輕地下壓蓋玻片，使根尖壓扁，利于觀察) 5. 牛蛙胸骨劍突軟骨細(xì)胞液泡系的超活染色與觀察(1) 取牛蛙胸骨劍突軟骨細(xì)胞，放置于干凈的載玻片上。(2) 滴加中性紅于載玻片上，染色10 min。(3) 吸干染料，換上Ringer液。(4) 制片觀察五、實(shí)驗(yàn)建議 注意Janus green B染色時(shí)，應(yīng)讓組織露在空氣中以保持呼吸正常。六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告及作業(yè) 繪制口腔上皮細(xì)胞、洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞、牛蛙肝細(xì)胞、牛蛙胸骨劍突軟骨細(xì)胞， 黃豆根尖細(xì)胞中線粒體的形態(tài)與分布。實(shí)驗(yàn)七 酸性磷酸酶的顯示方法（選做）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 1. 掌握Comori法的基本原理和方法。 2. 觀察酸性磷酸酶在細(xì)胞內(nèi)的分布狀況。二、實(shí)驗(yàn)原理酸性磷酸酶能分解磷酸脂而釋放出磷酸基，磷酸基能與鉛 鹽反應(yīng)形成磷酸鉛。但因其是無色的，所以再經(jīng)過與硫化銨作用，形成棕黑色的硫 化鉛沉淀，由此就能顯示酸性璃酸酶在細(xì)胞內(nèi)的存在與分布。本實(shí)驗(yàn)的技術(shù)特點(diǎn)是：①用冷凍涂片和中性福爾馬林固定，可避免在固定、包 埋及制片過程中酶的失活，保證了實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性。②采用較短的作用時(shí)間，可避免 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)其它蛋白質(zhì)及核內(nèi)出現(xiàn)陽性假象，保證了實(shí)驗(yàn)的可靠性。③以姬姆薩染色 的巨噬細(xì)胞為觀察對象，細(xì)胞核及細(xì)胞輪廓以及細(xì)胞質(zhì)中反應(yīng)沉淀的顆粒都比較清 晰，有助于深入理解細(xì)胞吞噬作用、浴酶體功能和分布以及溶酶體標(biāo)志酶——酸性 磷酸酶的性質(zhì)。三、實(shí)驗(yàn)用品（一）材料小鼠腹腔液涂片(重點(diǎn)觀察巨噬細(xì)胞)（二）器材高壓滅菌鍋、冰箱、注射器、載玻片、蓋玻片及溫箱。（三）試劑 1. 10%中性福爾馬林()甲醛 10 mL醋酸鈉 2 g蒸餾水 90 mL 2. 酸性磷酸酶作用液蒸餾水 90 mL mol/L 醋酸緩沖液() 12 mL5%硝酸鉛 2 mL% β甘油磷酸鈉 4 mL先將蒸餾水和醋酸緩沖液混合，隨后分成大致相等的兩份，一份中加醋酸鉛溶液，另—份加甘油磷酸鈉溶液，然后再將兩者緩緩混合，邊混勻邊攪勻。若pH＜，可加少量醋酸調(diào)節(jié)。臨用前配制。配好后的作用液應(yīng)透明無絮狀懸浮物和沉淀，否則將嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。3. 1%硫胺溶液硫化胺 1 mL蒸溜水 9 mL4. 姬姆薩染液(1:30)姬姆薩原液 3 滴磷酸鹽緩沖液() 5 mL5. 3% 淀粉肉湯牛肉膏 g蛋白胨 g氯化鈉 g蒸餾水 100 mL 高壓滅菌20 min，再加入可溶性淀粉6 g，6080 ℃水浴溶解后，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。四、?shí)驗(yàn)操作 1. 取小白鼠1 只、每日腹腔注射6%淀粉肉湯1 mL，連續(xù)注射3天。 2. 第3 天注射后34 h，脫頸處死小鼠，打開腹部皮膚，暴露腹膜，再向腹腔 內(nèi)注射生理鹽水2 mL，過3 mL。 3. 將腹腔液滴在預(yù)冷的載玻片上，每片12滴。將玻片垂直插入玻片架，迅速 放到冰箱內(nèi)(4℃)，讓細(xì)胞自行鋪展。 4. 30 min后，將玻片轉(zhuǎn)入10%中性福爾馬林，4℃冰箱內(nèi)固定30 min。 5. 自來水漂洗5 min，把水瀝干。 6. 轉(zhuǎn)入酸性磷酸酶作用液中，37℃處理30 min。 7. 自來水漂洗片刻。 8. 1%硫化胺處理35 min。 9. 自來水沖洗，甩干。 10. 用1 : 30的姬姆薩染液染色15 min。 11. 自來水沖去染液，用磷酸鹽緩沖液臨時(shí)封片，鏡檢。 12. 對照實(shí)驗(yàn) 將第3步的腹腔液涂片置50℃溫箱中處理30 min，使酶失活，再 進(jìn)行611步的同樣實(shí)驗(yàn)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果在巨噬細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，出現(xiàn)許多棕色或棕黑色的顆粒和班塊。部分細(xì)胞內(nèi)，酸性磷酸酶極為豐富，整個(gè)細(xì)胞質(zhì)區(qū)域都有黑色沉淀。中性粒細(xì)胞呈現(xiàn)陰性反應(yīng)。六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告及作業(yè) 1. 簡述酸性磷酸酶顯色的原理是什么？ 2. 繪制一張實(shí)驗(yàn)所見的巨噬細(xì)胞中酸性磷酸酶顯色圖。 實(shí)驗(yàn)八 植物細(xì)胞原生質(zhì)流動(dòng)及其影響因素（選做）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 1. 通過植物細(xì)胞原生質(zhì)流動(dòng)觀察，了解細(xì)胞原生質(zhì)流動(dòng)的一般原理和方法。 2. 理解影響細(xì)胞原生質(zhì)流動(dòng)的因素?！　《?、實(shí)驗(yàn)原理原生質(zhì)流動(dòng)是細(xì)胞的一種生命活動(dòng)現(xiàn)象，普遍存在于生活的植物細(xì)胞中。但由于必須處于生活狀態(tài)下才能看到，所以在觀察時(shí)有一定困難。首先要求觀察的材料必須是生活的，如果把細(xì)胞“切開”必然損傷細(xì)胞和周圍組織；如果把細(xì)胞“打散”，則要用酸或堿溶液處理，都將影響細(xì)胞的生命；其次細(xì)胞質(zhì)在光學(xué)顯微鏡下是無色透明的，使原生質(zhì)流動(dòng)現(xiàn)象不易觀察。三、實(shí)驗(yàn)用品 1. 器材: 放大鏡 冰箱 普通顯微鏡 剪刀 鑷子 刀片 表面皿 載玻片 蓋玻片 吸水紙 2. 材料：新鮮菠菜紫鴨跖草花絲，學(xué)生自采材料。四、實(shí)驗(yàn)過程 1. 取材(常溫)——制片觀察——低倍物鏡仔細(xì)觀察紫鴨跖草花絲表皮毛各部分 的結(jié)構(gòu)——高倍物鏡觀察紫鴨趾草花絲表皮毛細(xì)胞的結(jié)構(gòu)——用轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)聚焦 器的方法可以看出細(xì)胞的立體結(jié)構(gòu)，建立細(xì)胞的立體結(jié)構(gòu)概念——原生質(zhì)流 動(dòng)觀察。 2. 取材(材料經(jīng)0℃低常溫處理)——制片觀察——低倍物鏡仔細(xì)觀察紫鴨跖 草花絲表皮毛各部分的結(jié)構(gòu)——高倍物鏡觀察紫鴨趾草花絲表皮毛細(xì)胞的結(jié) 構(gòu)——用轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)聚焦器的方法可以看出細(xì)胞的立體結(jié)構(gòu)，建立細(xì)胞的立體結(jié) 構(gòu)概念——原生質(zhì)流動(dòng)觀察。在觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)的同時(shí)，會(huì)發(fā)現(xiàn)有些細(xì)胞內(nèi)的 顆粒在不斷地移動(dòng)。它們常是沿著細(xì)胞的一側(cè)向同一個(gè)方向移動(dòng)，這就是原 生質(zhì)流動(dòng)的現(xiàn)象。如果在觀察的視野中看不到原生質(zhì)流動(dòng)，可用低倍物鏡觀 察尋有原生質(zhì)流動(dòng)的細(xì)胞（如果還找不到，可換一片生長良好的葉片重新 觀察）。 3. 比較不同溫度紫鴨跖草花絲表皮細(xì)胞原生質(zhì)流動(dòng)的差異。 4. 隨著時(shí)間的推移，經(jīng)0℃低常溫處理的材料其細(xì)胞原生質(zhì)流動(dòng)恢復(fù)狀況觀察。五、實(shí)驗(yàn)作業(yè) 1．選擇幾個(gè)有代表性的紫鴨趾草花絲表皮毛細(xì)胞，繪圖表示細(xì)胞結(jié)構(gòu)，并用箭頭 表示原生質(zhì)流動(dòng)的方向。 2．溫度影響紫鴨趾草花絲表皮毛細(xì)胞原生質(zhì)流動(dòng)的原理。實(shí)驗(yàn)九 植物細(xì)胞骨架的觀察（選做）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 1. 掌握考馬斯亮藍(lán)R250對植物細(xì)胞骨架染色的方法。 2. 通過對洋蔥內(nèi)皮細(xì)胞的處理，掌握植物細(xì)胞骨架的制備方法與顯微形態(tài)觀察。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞骨架(cytoskeleton)，是細(xì)胞內(nèi)以蛋白質(zhì)纖維為主要成分的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，根據(jù)蛋白質(zhì)纖維的直徑、組成成分和組裝結(jié)構(gòu)的不同可分為微絲、微管和中等纖維。細(xì)胞骨架對于維持細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、物質(zhì)運(yùn)輸、能量轉(zhuǎn)換、信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞分裂等有重要的作用。本試驗(yàn)采用去垢劑TritonX100的緩沖液處理植物材料時(shí)，可將細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)和大部分蛋白質(zhì)抽提掉，但細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白卻被保存下來，后者用考馬斯亮藍(lán)R250染色，在光學(xué)顯微鏡下可見一種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。三、實(shí)驗(yàn)用品 （一）材料: 洋蔥 （二）器材: 顯微鏡、載玻片、滴管、擦鏡紙、PH計(jì) （三）試劑 1. mol/L磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS) mol/L Na2HPO4 NaH2PO4緩沖液（PB，） 50 mL mol/L NaCl 雙蒸餾水加至1000 ml 2. PB mol/L Na2HPO4 77 mL mol/L NaH2PO4 23 mL 3. M緩沖液咪唑(pH ) 50 mmol/LKCl 50 mmol/LMgC12 mmol/LEGTA 1 mmol/LEDTA 巰基乙醇 1 mmol/L甘油 4 mmol/L用1 mol/L HCl調(diào)pH 。 4. 1%的Triton X100/M緩沖液 5. %考馬斯亮藍(lán)R250染液甲醇 mL冰醋酸 7 mL蒸餾水 mL 6. 3%戊二醛 PB溶液（）四、實(shí)驗(yàn)操作（如下） 取洋蔥內(nèi)皮1 cm左右 置于含PBS液的載玻片上 濕潤后，吸去PBS加2 滴1%Triton X100/M緩沖液，5 min吸去緩沖液，加3%戊二醛PB溶液，固定30 min加PBS洗2次，共3 min%考馬斯亮藍(lán)R250染色30 min 用PBS洗2次，共2 min，吸干 鏡檢并繪圖細(xì)胞骨架標(biāo)本制作過程五、實(shí)驗(yàn)建議 1. 用去垢劑TritonX100的緩沖液處理材料時(shí)，應(yīng)控制在30 min左右。 2. 每一次加液或染色后，應(yīng)用PBS洗2次，并用濾紙吸干。六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告及作業(yè) 1. 畫出實(shí)驗(yàn)所觀察到的細(xì)胞骨架圖，并注明放大倍數(shù)。 2. 為什么用TritonX100的緩沖液處理材料？48 / 4