細胞生物學實驗匯總-在線瀏覽
2025-05-10 12:04本頁面
【正文】 與重疊的雞紅細胞?；铙w染色是應用無毒或毒性較小的染色劑真實地顯示活細胞內某些結構而又很少影響細胞生命活動的一種染色方法。線粒體中細胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)呈藍綠色，從而使線粒體顯色，而在周圍的細胞質中染料被還原，成為無色狀態(tài)。中性紅對液泡系的染色具有專一性，將活細胞中的液泡系染成紅色。2）洋蔥鱗莖內表皮細胞線粒體的超活染色與觀察：1/5000 詹納斯綠B 溶液12 滴，洋蔥鱗莖內表皮，載玻片于37℃恒溫水浴染色1015min，顯微鏡下觀察。【實驗結果】口腔上皮細胞的線粒體分布 洋蔥內表皮細胞線粒體分布 植物根尖液泡的中性紅染色實驗五：植物細胞微絲束的光學顯微鏡觀察【基本原理】細胞骨架在通常情況下不穩(wěn)定：如低溫、高壓、餓酸處理等。微絲、微管和中間纖維都是直徑很小的結構，最大的單根微管才25nm 左右，只能在電鏡下才能觀察到。本實驗用普通光鏡觀察到細胞骨架，是因為骨架纖維成束分布、結構經染色后，有夸大作用。細胞骨架是指細胞質中縱橫交錯的纖維網(wǎng)絡結構，按組成成分和形態(tài)結構的不同可分為微管、微絲和中間纖維。光學顯微鏡下細胞骨架的形態(tài)學觀察多用1% Triton X100 處理細胞，可使細胞膜溶解，而細胞骨架系統(tǒng)的蛋白質被保存， 再用考馬斯亮蘭R250 染色，使得胞質中細胞骨架得以清晰顯現(xiàn)。6H2O(MW:)； 1mmol/L EGTA(MW:)；(MW:)； 1mmol/L DTT(MW:)2） 6mmol/L PBS 磷酸緩沖液 （pH ）：KH2PO4 : = 7:33） % NaCl 生理鹽水4） 1% Triton X100(聚乙二醇辛基苯基醚) 溶于 M緩沖液5） 3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL，PBS 88mL6） % 考馬斯亮藍R250 染液 200mL：考馬斯亮藍R250 ；甲醇 ；冰乙酸 7mL；3．儀器：光學顯微鏡，鑷子，剪刀，試管，表面皿，滴管，載玻片，蓋玻片【方法步驟】【實驗結果】洋蔥鱗莖外層與內層的表皮細胞比較（放大倍數(shù)1020）附：各種主要試劑的作用1．Triton X100 (聚乙二醇辛基苯基醚)作用：非離子去垢劑；適當濃度的Triton X100，可使細胞膜溶解，而細胞質中的細胞骨架系統(tǒng)可被保存。3．EDTA（乙二胺四乙酸）和EGTA（乙二醇雙醚四乙酸）作用：前者可螯合大部分金屬離子；后者專一性螯合Ca2＋，主要是高濃度的Ca2＋可是微管解聚，因此加入EGTA 來降低Ca2＋的濃度。實驗六 植物染色體標本的制備與觀察實驗原理：（1）植物根尖生長點與莖生長點，不存在G0期，不斷分裂，所以一般取根尖實驗。（3）低滲溶液使細胞體積增大，染色體分散，容易觀察計數(shù)。預處理：將切下的根尖浸入1%的秋水仙素溶液中，室溫下處理34小時或0度低溫處理24小時。水解：將根尖用自來水漂洗5次，每次3分鐘，再加入1%纖維素酶和果膠酶混合酶液1ml，在37攝氏度恒溫水浴鍋中酶解6h.取出，吸干酶液，加蒸餾水，低滲30分鐘。Giemsa液染色510分鐘。實驗七：DNA 的顯示——Feulgen 反應【基本原理】Feulgen 反應（Feulgen reaction）是顯示DNA 的最典型的組織化學反應，為學者Feulgen 和Rossenbeck于1924 年發(fā)明，簡稱為Feulgen 法。其具體反應原理是，標本經稀鹽酸水解后，DNA 分子中的嘌呤堿基被解離，從而在核糖的一端出現(xiàn)了醛基。也就是說, DNA 經稀酸水解后產生的醛基，具有還原作用，可與無色品紅結合形成紫紅色化合物，從而顯示出DNA 的分布。2HCl+Na2S2O5→2NaCl+SO2+H2SO3Feulgen反應現(xiàn)仍廣泛用于DNA的定性定位和定量的顯微測定技術上。 活性碳, 搖1min,用粗濾紙過濾，濾液應為無色；若液體顏色變?yōu)榉奂t色，便不能再用。3）1mol/L HCl（水解用）： 的鹽酸加蒸餾水1000ml 即成（應將鹽酸緩緩加入水中）。 ↓選效果好的材料壓片 水壓片 ↓ 鏡檢觀察【實驗結果】細胞核中的DNA 呈鮮亮的紫紅色反應，它不但反應出DNA 存在的部位及其分布情況，而且還可從顏色反應的深淺，來判斷DNA 的相對含量。 附：Feulgen 方法應注意的幾個問題：1．對照切片的制做：進行Feulgen 反應時, 一般要做一對照切片以便驗證反應結果。但需要注意的是，對照切片在schiff 試劑中最多不要超過1 h （ 即可)，時間過長，試劑本身的酸性也會使DNA 水解，從而出現(xiàn)假的正反應。后來發(fā)現(xiàn)含醛基或氧化劑的固定劑對反應的專一性并沒有影響。如Bhampy 固定劑、Helly 固定劑、Flemming 固定劑、OsO4 固定劑、Carnoy 固定劑、zenker 固定劑和BouinAller 固定劑。在Feulgen 反應中，不能單獨使用Bouin 定液，因為它是Feulgen 反應的最壞固定劑，但經Aller 改進后的BouinAller 固定液效果卻較好。如水解時間不夠, 反應就會變弱；如水解時間過長。適當?shù)乃鈺r間一般為8~12min。4．Schiff
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