細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)匯總-wenkub.com
2025-03-20 12:04 本頁面
【正文】 1取一載玻片，往其中滴一滴明膠甘油封固劑，將帶水的蓋玻片有細(xì)胞的一面朝下，慢慢蓋向載玻片上的明膠甘油，使蓋玻片封固在載玻片上（注意避免氣泡的產(chǎn)生）。鈣固定液的小染色缸內(nèi)處理5分鐘，進(jìn)行后固定。往蓋玻片上滴加酸性磷酸酶工作液兩滴（或?qū)⒉Ｆ迦胧⒂兴嵝粤姿峁ぷ饕旱男∪旧字校?7176。往預(yù)冷的蓋玻片上滴一滴腹腔液，立即用牙簽涂后放入小培養(yǎng)皿4176。C貯存，使用水浴加溫融化。鈣固定液：先稱取無水CaCl2 10g溶于100ml蒸餾水中配成10%氯化鈣溶液，取該液10ml和福爾馬林液10ml加入到80ml蒸餾水混勻，即成福爾馬林② 3%β甘油磷酸鈉溶液：稱取β甘油磷酸鈉3g溶于100ml蒸餾水中，4176。（3） 酸性磷酸酶工作液：① ：（A液），再稱取醋酸鈉（NaAc本實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目以小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為材料顯示該酶的存在。染色的化學(xué)作用是滲入組織細(xì)胞的染料與其相應(yīng)的物質(zhì)起化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生有色的化合物。固定（fication）目的是保持細(xì)胞自然形態(tài)，防止細(xì)胞自溶和細(xì)菌所致的腐??；固定液能沉淀和凝固細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和破下細(xì)胞內(nèi)溶酶體酶，使細(xì)胞不但保持自然形態(tài)，而且結(jié)構(gòu)清晰，易于著色。 。小鼠的染色體數(shù)為40 條，多為端部和亞端部染色體，只有2 對亞中部著絲粒染色體。（注：雞染色體的制作方法基本相同）。7．（視細(xì)胞多少而定）制成細(xì)胞懸液，用吸管吸取細(xì)胞懸液，滴2～ 3 滴于預(yù)冷的載玻片上，并吹散細(xì)胞。3．用骨剪將股骨頭的兩端剪去,用注射器吸取1mL0．075 mol/L 氯化鉀溶液；注入骨髓腔將骨髓洗出于刻度離心管中。骨髓細(xì)胞具有高度的分裂活性，經(jīng)秋水仙素或秋水酰胺處理后，使分裂細(xì)胞阻斷在有絲分裂中期，再經(jīng)低滲處理、固定、滴片、染色等步驟，可制作較好的骨髓細(xì)胞的染色體標(biāo)本。華裔學(xué)者莊有興（Joe Hin Tjio） 合作, 利用低滲法研究胎兒肺組織的染色體標(biāo)本制做方法，終于在1956 年首次確定了人類的染色體數(shù)目是46 條，而不是前人所主張的48 條，這為后來的人類核型研究奠定了基礎(chǔ)。染色體作為遺傳物質(zhì)DNA 的載體, 對生物的遺傳、變異、進(jìn)化和個(gè)體發(fā)生, 以及細(xì)胞的增殖和生理過程的平衡控制等都具有十分重要的意義。3．20 分鐘后，用頸椎脫臼法處死小鼠，迅速剖開小鼠腹部，~1ml 生理鹽水，用吸管輕輕使生理鹽水與腹腔液混勻。當(dāng)機(jī)體受到某些損傷因素時(shí)（如微生物或其它病原體或異物侵入），能招引巨噬細(xì)胞，同時(shí)巨噬細(xì)胞有趨化性，主動(dòng)向病原體或異物游走，在接觸到病原體或異物時(shí)，細(xì)胞膜凹陷伸出偽足包圍異物，并發(fā)生胞吞作用形成吞噬泡，繼而細(xì)胞質(zhì)中的溶酶體與吞噬泡融合，消化分解異物。實(shí)驗(yàn)八：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象的觀察【基本原理】細(xì)胞的吞噬作用在單細(xì)胞動(dòng)物是攝取營養(yǎng)物質(zhì)的方式，在高等動(dòng)物內(nèi)的巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等具有吞噬功能，是機(jī)體非特異性免疫功能的重要組成部分。4．Schiff 試劑的作用：Feulgen 反應(yīng)成功與否的一個(gè)非常關(guān)鍵的因素，就是schiff 試劑的質(zhì)量。如水解時(shí)間不夠, 反應(yīng)就會(huì)變?nèi)?；如水解時(shí)間過長。如Bhampy 固定劑、Helly 固定劑、Flemming 固定劑、OsO4 固定劑、Carnoy 固定劑、zenker 固定劑和BouinAller 固定劑。但需要注意的是，對照切片在schiff 試劑中最多不要超過1 h （ 即可)，時(shí)間過長，試劑本身的酸性也會(huì)使DNA 水解，從而出現(xiàn)假的正反應(yīng)。 ↓選效果好的材料壓片 水壓片 ↓ 鏡檢觀察【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】細(xì)胞核中的DNA 呈鮮亮的紫紅色反應(yīng)，它不但反應(yīng)出DNA 存在的部位及其分布情況，而且還可從顏色反應(yīng)的深淺，來判斷DNA 的相對含量。 活性碳, 搖1min,用粗濾紙過濾，濾液應(yīng)為無色；若液體顏色變?yōu)榉奂t色，便不能再用。2HCl+Na2S2O5→2NaCl+SO2+H2SO3其具體反應(yīng)原理是，標(biāo)本經(jīng)稀鹽酸水解后，DNA 分子中的嘌呤堿基被解離，從而在核糖的一端出現(xiàn)了醛基。Giemsa液染色510分鐘。預(yù)處理：將切下的根尖浸入1%的秋水仙素溶液中，室溫下處理34小時(shí)或0度低溫處理24小時(shí)。實(shí)驗(yàn)六 植物染色體標(biāo)本的制備與觀察實(shí)驗(yàn)原理：（1）植物根尖生長點(diǎn)與莖生長點(diǎn)，不存在G0期，不斷分裂，所以一般取根尖實(shí)驗(yàn)。6H2O(MW:)； 1mmol/L EGTA(MW:)；(MW:)； 1mmol/L DTT(MW:)2） 6mmol/L PBS 磷酸緩沖液 （pH ）：KH2PO4 : = 7:33） % NaCl 生理鹽水4） 1% Triton X100(聚乙二醇辛基苯基醚) 溶于 M緩沖液5） 3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL，PBS 88mL6） % 考馬斯亮藍(lán)R250 染液 200mL：考馬斯亮藍(lán)R250 ；甲醇 ；冰乙酸 7mL；3．儀器：光學(xué)顯微鏡，鑷子，剪刀，試管，表面皿，滴管，載玻片，蓋玻片【方法步驟】【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】洋蔥鱗莖外層與內(nèi)層的表皮細(xì)胞比較（放大倍數(shù)1020）附：各種主要試劑的作用1．Triton X100 (聚乙二醇辛基苯基醚)作用：非離子去垢劑；適當(dāng)濃度的Triton X100，可使細(xì)胞膜溶解，而細(xì)胞質(zhì)中的細(xì)胞
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