細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)匯總-wenkub
2023-04-07 12:04:19 本頁(yè)面
【正文】 骨架系統(tǒng)可被保存。細(xì)胞骨架是指細(xì)胞質(zhì)中縱橫交錯(cuò)的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，按組成成分和形態(tài)結(jié)構(gòu)的不同可分為微管、微絲和中間纖維。微絲、微管和中間纖維都是直徑很小的結(jié)構(gòu)，最大的單根微管才25nm 左右，只能在電鏡下才能觀察到。2）洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞線粒體的超活染色與觀察：1/5000 詹納斯綠B 溶液12 滴，洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，載玻片于37℃恒溫水浴染色1015min，顯微鏡下觀察。線粒體中細(xì)胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)呈藍(lán)綠色，從而使線粒體顯色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被還原，成為無(wú)色狀態(tài)。要注意辨別融合細(xì)胞與重疊的雞紅細(xì)胞。6．利用光學(xué)顯微鏡 (高倍) 以未融合細(xì)胞為對(duì)照觀察2 個(gè)靠近細(xì)胞形成融合的過(guò)程。1000r／min 離心5 min。聚乙二醇(PEG)結(jié)構(gòu)為：HOH2C(CH2OCH2)nCH2OH，相對(duì)分子質(zhì)量在2006000 均可用作細(xì)胞融合劑。細(xì)胞融合(Cell fusion)，即在自然條件下或用人工方法(生物的、物理的、化學(xué)的)使兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。細(xì)胞與組織不同，不排斥異類、異種細(xì)胞。小分子比大分子容易通過(guò)，非極性比極性易通過(guò)，帶電荷離子高度不透。對(duì)照組未凝血 ， 實(shí)驗(yàn)組凝血。（以PBS 緩沖液加2％血細(xì)胞作對(duì)照實(shí)驗(yàn)）[土豆凝集素的制備：稱取土豆去皮塊莖2g , 加10 mL PBS緩沖液，浸泡2h（浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素） , 載玻片上滴一滴土豆凝集素,再滴一滴2％紅細(xì)胞液,充分混勻靜置20 min , 低倍顯微鏡下觀察血球凝集現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)將紅細(xì)胞分別放于各種等滲溶液中，由于紅細(xì)胞膜對(duì)不同溶質(zhì)的通透性不同，使得不同溶質(zhì)透入細(xì)胞的速度相差很大，有些溶質(zhì)甚至不能透入細(xì)胞。凝集素（lectin）是一類含糖并能與糖分子專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。凝集素使細(xì)胞凝集是由于它與細(xì)胞表面的糖分子連接，在細(xì)胞表面間形成“橋”的結(jié)果，加入與凝集素互補(bǔ)的糖可以抑制細(xì)胞的凝集。當(dāng)溶質(zhì)分子進(jìn)入細(xì)胞后可引起滲透壓升高，水分子隨即進(jìn)入細(xì)胞，使細(xì)胞膨脹，當(dāng)膨脹到一定程度時(shí)，紅細(xì)胞膜會(huì)發(fā)生破裂，血紅素溢出，此時(shí)，原來(lái)不透明的紅細(xì)胞懸液突然變成紅色透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱為紅細(xì)胞溶血。]2．觀察10%的雞紅細(xì)胞懸液，可見(jiàn)該懸液為一種不透明的紅色液體3．觀察溶血現(xiàn)象 取一支試管，再加入4ml 蒸餾水， 雞紅細(xì)胞懸液，混勻后注意觀察溶液顏色的變化，可見(jiàn)溶液由不透明的紅色變成透明的紅色液體（可將試管貼靠在書(shū)上，隔著試管看書(shū)中的字，如發(fā)現(xiàn)溶血?jiǎng)t文字可被看清）。氯化鈉、硝酸鈉、硫酸鈉溶液不溶。實(shí)驗(yàn)三：聚乙二醇（PEG）介導(dǎo)的細(xì)胞融合【基本原理】?jī)蓚€(gè)以上的細(xì)胞合并成為一個(gè)雙核或多核細(xì)胞稱為融合細(xì)胞。不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合、種間細(xì)胞融合，而且也能誘導(dǎo)動(dòng)植物細(xì)胞間產(chǎn)生融合。人工誘導(dǎo)的細(xì)胞融合不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合，也能產(chǎn)生種間細(xì)胞的融合，因此細(xì)胞融合技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，如研究核質(zhì)關(guān)系、繪制染色體基因圖譜、制備單克隆抗體、育種等。普遍認(rèn)為聚乙二醇分子能改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，由于兩細(xì)胞接口處雙分子層質(zhì)膜的相互親和以及彼此的表面張力作用，從而使細(xì)胞發(fā)生融合。3．棄上清液(用吸管吸去)，％生理 鹽水5mL，用指彈法（或吸管輕吹）將細(xì)胞團(tuán)塊彈散，混勻后1000r／min 離心5min；重復(fù)上述條件，再離心洗滌1 次?！窘Y(jié)果觀察】在高倍鏡下可以看到有兩個(gè)或兩個(gè)以上的雞紅細(xì)胞膜融合在一起，形成一個(gè)同核體細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)四：線粒體和液泡系的超活染色與觀察【基本原理】線粒體是細(xì)胞內(nèi)一種重要細(xì)胞器，細(xì)胞的各項(xiàng)活動(dòng)所需要的能量，主要是通過(guò)線粒體呼吸作用來(lái)提供的。細(xì)胞中的線粒體呈藍(lán)綠色的顆粒。2．小麥（或綠豆）幼根根尖液泡系的中性紅染色觀察小麥（或綠豆）幼苗根尖（12cm）縱切面切片，1/3000 中性紅溶液1 滴染色510min，載玻片于37℃恒溫水浴，蓋上蓋玻片壓扁根尖，顯微鏡下觀察。目前研究細(xì)胞骨架的主要方法是應(yīng)用高壓電鏡或免疫熒光顯微鏡技術(shù)。它們對(duì)細(xì)胞形態(tài)的維持、細(xì)胞的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)、分裂、分化和物質(zhì)運(yùn)輸?shù)绕鹬匾饔谩?．M－緩沖液和磷酸緩沖液作用：維持細(xì)胞的滲透壓。（2）秋水仙素處理，能使大量細(xì)胞分裂停留在中期，有助于觀察染色體。固定：取出根尖，投入Carnoy液固定半小時(shí)，冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｗ詠?lái)水沖洗，晾干后鏡檢。Schiff 試劑中的無(wú)色品紅可與醛基反應(yīng)，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基為發(fā)色團(tuán)，故可呈現(xiàn)出紫紅色。DNA經(jīng)溫稀酸水解，其上的嘌呤堿和脫氧核酸之間的鍵打開(kāi)，使脫氧核糖的一端形成游離的醛基，這些醛基在原位與Schiff試劑中的無(wú)色品紅反應(yīng)，形成紫紅色的化合物， 因此Feulgen反應(yīng)中，顯示紫紅色的細(xì)胞部位，即標(biāo)志有DNA的存在。2）亞硫酸水（洗滌劑）：用200ml 普通自來(lái)水（不要用蒸餾水, 以免引起誤差）、10ml 10%的偏重亞硫酸鈉水溶液和10ml 1mol/L HCl，三者在使用前混合，現(xiàn)用現(xiàn)配。細(xì)胞質(zhì)DNA 也會(huì)出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。2．固定劑的選擇：以前很多人認(rèn)為，選用的固定劑不應(yīng)含有醛基或含有氧化劑。但在上述固定劑中，以O(shè)sO4 和Carnoy 效果較好，OsO4（1%%)是Feulgen反應(yīng)的理想固定劑，只是因OsO4 價(jià)錢較貴，故一般多采用Carnoy 固定液?；蛩獾剡^(guò)于劇烈，則脫氧核糖也易掉下來(lái)，反應(yīng)也會(huì)減弱
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