細(xì)胞生物學(xué)試驗篇-wenkub
2023-04-19 23:50:04 本頁面
【正文】 影響PAS反應(yīng)染色效果的關(guān)鍵步驟是什么？如何制作徒手切片？應(yīng)注意什么才能得到薄而均勻的切片？鍥而舍之，朽木不折；鍥而不舍，金石可鏤。配法如下：，并隨時用玻璃棒攪動；；；（可過濾），此液成熟后須置于陰冷處塞緊瓶口，可長期保存使用，使用時可將染劑1份用3～5份蒸餾水稀釋，則染色后分化更明顯。如有白色沉淀就不能再用，如顏色變紅可以加入少許偏重亞硫酸鈉，使其再轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色就可以再用。溶液配好后保存在0℃～4℃的冰箱內(nèi)，并加黑紙保存，此液如顯黃色即失效。還有許多多糖具有更復(fù)雜多樣的生理功能，如粘多糖、血型物質(zhì)等，它們在生物體內(nèi)起著重要的作用?！緦嶒炘怼慷嗵?polysaccharide)是由多個單糖分子縮合脫水而生成的化合物。橢球形：V=4πab2／3 a長半徑 b短半徑圓球形：V=4／3πr3 r半徑圓柱形：V=πr2h r半徑 h高【作業(yè)與思考】血細(xì)胞分為哪幾大類？分別描述你看到的不同血細(xì)胞的形態(tài)，并闡述其功能。(3)小心移動鏡臺測微尺和轉(zhuǎn)動目鏡測微尺(如目鏡測微尺分度模糊，可轉(zhuǎn)動目鏡上透鏡進行調(diào)焦)，使兩尺左邊的一直線重合，然后由左向右找出兩尺另一次重合的直線(如圖所示)。當(dāng)用目鏡測微尺來測量細(xì)胞的大小時，必須先用鏡臺測微尺核實目鏡測微尺每一格的長度。在顯微鏡下觀察的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。注意肝細(xì)胞之間的界限、細(xì)胞的形狀、細(xì)胞核的形狀和數(shù)量、核仁的形狀和數(shù)量、細(xì)胞質(zhì)的形態(tài)構(gòu)造以及細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核染色的區(qū)別。雞血紅細(xì)胞。鏡臺測微尺。實驗篇實驗一 細(xì)胞的形態(tài)觀察及其大小測量【實驗?zāi)康摹客ㄟ^對原核和真核各種形態(tài)細(xì)胞的光學(xué)顯微鏡觀察，了解細(xì)胞的形態(tài)及其顯微結(jié)構(gòu)；學(xué)習(xí)顯微測量的方法，對細(xì)胞的大小有一直觀認(rèn)識。載玻片。蠶豆葉片橫切片。（2）雞血細(xì)胞涂片的觀察：注意觀察血細(xì)胞的組成；紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板的形態(tài)特點。（二）細(xì)胞的大小和測量測微尺的使用目鏡測微尺是一塊圓形玻片，中心刻有一尺，長5～10mm，分成50～100格。方法如下：(1)卸下目鏡的上透鏡，將目鏡測微尺刻度向下裝在目鏡的焦平面上，再旋上目鏡的上透鏡。(4)記錄兩條重合線間目鏡測微尺和鏡臺測微尺的格數(shù)。繪圖。廣泛分布于動、植物界?！ 〉矸酆吞窃蒁－葡萄糖的分支或直鏈組成，過碘酸是一種強氧化劑，能將葡萄糖中的乙二醇基(CHOHCHOH)氧化成兩個游離的醛基(GHO)，游離醛基與Schiff試劑反應(yīng)生成紫紅色產(chǎn)物。： g堿性品紅加入100m1煮沸的蒸餾水中，時時搖蕩玻璃瓶或者攪拌，煮5min，使之充分溶解；然后冷卻至50℃時過濾到具有玻塞的棕色試劑瓶，加入10ml的lmol／L的HCl，冷卻至25℃，在室溫黑暗條件下靜置24h，其顏色呈褐色或淡黃色，；過濾，濾液為無色。亞硫酸水溶液：取10％偏重亞硫酸鈉Na2S2O5（或K2S2O5）20ml、1mmolL1 HCl 20ml和400ml純水混勻即可。５、梯度乙醇溶液：100％，95％，90％，80％，70％，50％各兩份?！咀⒁馐马棥?，會使反應(yīng)更加充分。，實驗結(jié)果不明顯（脫蠟不完全、染色不好等），因此在實驗中要檢查各試劑是否干凈，如果污染嚴(yán)重，一定要更換。然后，在3000r/min的條件下離心5min，即可獲得沉淀的葉綠體(混有部分細(xì)胞核)。有些生物體內(nèi)的物質(zhì)受激發(fā)光照射后，可直接發(fā)出熒光（稱為自發(fā)熒光），如葉綠素的火紅色熒光。因此在熒光觀察時應(yīng)抓緊時間, 有必要時立即拍照。鍥而舍之，朽木不折；鍥而不舍，金石可鏤。放冰箱備用，臨用前取1ml母液加1/15mol/L磷酸緩沖液（）9ml稀釋?！緦嶒灧椒ā?葉綠體的分離（1）選取新鮮的菠菜嫩葉，洗凈擦干后，去除葉梗及粗脈并剪碎，稱取2g左右，置于預(yù)冷的研缽。（5）將上清液3000rpm離心5min，棄去上清液，沉淀即為葉綠體（混有部分細(xì)胞核）；（6）。3. 完整細(xì)胞中的葉綠體觀察（1）用鑷子撕取一片菠菜葉子表皮，平鋪于載玻片上，滴加一滴提取緩沖液，加蓋片后輕壓，備用。％吖啶橙熒光染料，加無熒光蓋片后，在熒光顯微鏡下觀察?！緦嶒炘怼窟灌こ葻晒馊玖峡膳c細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA結(jié)合。H20 ；B液，Na2HPO43）95％乙醇【方法與步驟】1．用牙簽刮取口腔上皮細(xì)胞涂在干凈載玻片上；2．95％乙醇溶液固定5min；3．％吖啶橙染液染色5min；4．用PBS緩沖液緩慢沖洗；5．加蓋玻片鏡檢。細(xì)胞骨架對于維持細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞運動、物質(zhì)運輸、能量轉(zhuǎn)換、信號傳導(dǎo)和細(xì)胞分裂等有重要的作用。 【實驗用品】：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、滴管、擦鏡紙、50ml燒杯； ：洋蔥鱗莖；：1） ；索倫森（Sorensen）磷酸緩沖液溶液A：Na2HPO、1mol/L4）3%戊二醛：。3. 沖洗：吸去1%Triton X100，立即加入M緩沖液輕輕沖洗3次，每次3～5分鐘。7. 制片：吸去染料，用水沖洗（注意不要將材料丟失）。在有樣品的50ml燒杯中，順序通過如下藥物：50％、70％、95％乙醇，95％乙醇＋叔丁醇（1：1），叔丁醇（每級5～10min）；或正丁醇、正丁醇、二甲苯、二甲苯（每級5～10分鐘），然后撈取樣品，平展于載玻片上，經(jīng)鏡檢，效果好的可加一滴中性樹膠，蓋上蓋玻片。【實驗原理】細(xì)胞融合，即在自然條件下或利用人工法 (生物的、物理的、化學(xué)的)，使兩個或兩個以上的細(xì)胞合并成一個具有雙核或多核細(xì)胞的過程。普遍認(rèn)為PEG分子能改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細(xì)胞接觸點處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，由于兩細(xì)胞接口處雙分子層質(zhì)膜的相互親和以及彼此的表面張力作用，從而使細(xì)胞發(fā)生融合。細(xì)胞融合率是指在顯微鏡的一個視野內(nèi)，已發(fā)生融合的細(xì)胞核總數(shù)與該視野內(nèi)所有細(xì)胞(包括已融合的細(xì)胞)的細(xì)胞核總數(shù)之比，通常以百分比表示。加入50ml預(yù)熱至50℃的GKN液，混勻，置37℃?zhèn)溆?。?0
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