細(xì)胞生物學(xué)實驗匯總(參考版)
2025-03-26 12:04本頁面
【正文】 1觀察：將制備好的標(biāo)本置于光鏡下，在高倍鏡下可見許多呈陽性反應(yīng)的巨噬細(xì)胞，其細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)許多大小不等的棕色或棕黑色顆粒和斑塊，這便是酸性磷酸酶存在的部位（溶酶體），有些細(xì)胞內(nèi)酸性磷酸酶極為豐富，故整個細(xì)胞質(zhì)都呈現(xiàn)出黑色沉淀。1蒸餾水漂洗。取出玻片，在蒸餾水中漂洗，再吸去多余水分。放入盛有10%福爾馬林C溫育30分鐘。C，可任其自然干燥。C冰箱中30分鐘，使細(xì)胞自行鋪展開。過3~~（注意抽取部位要盡量與注射部位相一致，否則難以抽出）或用頸椎脫臼法處死小白鼠后，打開腹腔，用注射器（不裝針頭）直接吸取腹腔液?！?內(nèi)容與方法 】取20g左右小白鼠一只，每日往其腹腔注射6%淀粉肉湯1ml，連續(xù)三天。（6） 甘油明膠封固劑：稱取明膠7g加入42ml蒸餾水中，水浴加溫溶解，再加入50ml甘油并攪勻，另加少許麝香草酚作防腐劑，置4176。鈣固定液。（4） 福爾馬林C保存。C保存。3H2O）（B液）。（2） %生理鹽水：。試劑的配制（1） 6%淀粉肉湯：、蛋白胨1g、再加入可溶性淀粉6g，溫浴溶解，煮沸15分鐘滅菌，置4176。當(dāng)酸性磷酸酶與含有磷酸酶的作用底物（如甘油磷酸鈉）一起保溫時，能水解磷酸酯使其釋放出磷酸基，磷酸基進而與底物中存在的鉛鹽結(jié)合形成無色的磷酸鉛（PbHPO4）沉淀物，當(dāng)用黃色的硫化銨作用該沉淀時可形成黃棕色或棕黑色的硫化鉛沉淀；從而使細(xì)胞中酸性磷酸酶顯示出來。 實驗十 細(xì)胞內(nèi)酸性磷酸酶的顯示【 實驗原理 】細(xì)胞中存在著能分解磷酸酯的酶，它們可分為一磷酸酯酶、二磷酸酯酶和三磷酸酯酶等三類，其中最主要的是一磷酸酯酶。染色的物理作用是利用毛細(xì)管現(xiàn)象，滲透、吸收和吸附作用，使染料的色素顆粒牢固地進入組織細(xì)胞，并使其顯色。因此標(biāo)本愈新鮮，固定愈及時，細(xì)胞結(jié)構(gòu)愈清晰，染色效果愈好。5．載玻片如有油脂或冷卻不夠亦影響的鋪展。細(xì)胞團塊不易打散；速度過低或離心時間過短, 使 細(xì)胞不易沉降，會失去大量分裂相。低滲過度時, 細(xì)胞會破裂，成膜上?。徊蛔銜r則染色體積在一起，因此，低滲處理直接影響染色體分散之好壞。[附] 染色體標(biāo)本制做質(zhì)量不佳的可能原因：1． 秋水仙素用量太多或處理時間過長，都會導(dǎo)致染色體的過分縮短或著絲點迅速裂解，最終使染色體被破壞或溶解。對于分散好的染色體, 其間相互散開, 短臂收縮適中, 二條姐妹染色單體大致平行分離, 著絲粒清晰可見。9．將制好的玻片標(biāo)本在低倍鏡下觀察，然后換高倍鏡找到分散良好的分裂相，再轉(zhuǎn)油鏡仔細(xì)觀察。8．滴Giemsa 染液6～8 滴于載玻片上，室溫下染色3 分鐘左右，自來水沖洗，用電吹風(fēng)吹干（或空氣干燥）。將載玻片在酒精燈上微烤。用吸管輕輕混勻進行預(yù)固定，然后以2000 轉(zhuǎn)／分鐘離心5 分鐘，棄去上清液。4．吹打分散細(xì)胞,靜置 20分鐘。2．處死青蛙，取其股骨及肱骨，去掉骨上的肌肉。對于骨髓染色體標(biāo)本的制作，一般包括以下幾個要點：1）用一定劑量的秋水仙素破壞紡錘絲的形成，使細(xì)胞分裂停滯在中期，使中期染色體停留在赤道面處；2）用低滲法使將細(xì)胞膨脹，再經(jīng)固定液固定，盡可能使染色體的結(jié)構(gòu)保持不變，在滴片時細(xì)胞被脹破，使細(xì)胞的染色體鋪展到載片上；3）空氣干燥法可使使細(xì)胞的染色體在載片上展平，經(jīng)Giemsa 染色后便可觀察到染色體的顯微圖象。但在取材方面，精巢又比骨髓要簡易一些。自身正處于活躍分裂狀態(tài)或用植物血球凝集素（phytohemagglutinin，PHA）處理后處于分裂狀態(tài)的組織或細(xì)胞，均可用于染色體標(biāo)本的制作與分析。核型分析均是以中期染色體為標(biāo)準(zhǔn)，對制作出的染色體標(biāo)本進行照相以獲得染色體的顯微圖象，并將其剪裁排列即成。每一個物種的細(xì)胞一般都有一定數(shù)目、形狀和大小的染色體。實驗九：小鼠骨髓染色體標(biāo)本的制備與觀察【基本原理】在真核生物中, 染色體的數(shù)量和形態(tài)具有物種的特異性, 迄今一直可以此作為物種分類的基本依據(jù)之一。4．用吸管抽取腹腔液，滴片，然后蓋上蓋玻片。2．實驗時，每組取一只上述處理的小鼠，腹腔注射1% ~1ml，注射后輕揉小鼠腹部以使紅細(xì)胞懸液分散均勻。含臺盼藍(lán)的淀粉肉湯，可使腹腔中有較多的吞噬細(xì)胞，以供觀察吞噬活動。巨噬細(xì)胞起源于骨髓，經(jīng)血液進入組織中而成，分布于全身各處。巨噬細(xì)胞是由骨髓干細(xì)胞分化生成，當(dāng)病原微生物或其他異物侵入機體時，巨噬細(xì)胞由于具有趨化性，便向異物處聚集，巨噬細(xì)胞可將之內(nèi)吞入胞質(zhì)，形成吞噬泡，然后在胞內(nèi)與溶酶體融合，將異物消化分解。此外，Schiff 試劑的配制方法也可影響DNA 的染色反應(yīng)。有一大類試劑均稱為堿性品紅，它們實際上是由幾種產(chǎn)品分別組成的。但是水解時間長短也要視標(biāo)本的類型（如厚薄等)、固定劑的性質(zhì)以及酸的濃度而定?；蛩獾剡^于劇烈，則脫氧核糖也易掉下來，反應(yīng)也會減弱。3．水解時間：Feulgen 反應(yīng)通常用稀酸進行水解，但水解的時間一定要適當(dāng)。但在上述固定劑中，以O(shè)sO4 和Carnoy 效果較好，OsO4（1%%)是Feulgen反應(yīng)的理想固定劑，只是因OsO4 價錢較貴，故一般多采用Carnoy 固定液。實踐證明，一切好的組織學(xué)固定劑均適用于Feulgen 反應(yīng)。2．固定劑的選擇：以前很多人認(rèn)為，選用的固定劑不應(yīng)含有醛基或含有氧化劑。對照切片應(yīng)不經(jīng)水解直接放在schiff 劑內(nèi)，且應(yīng)為負(fù)反應(yīng)。細(xì)胞質(zhì)DNA 也會出現(xiàn)陽性反應(yīng)。【方法步驟】 切取根尖或撕取表皮 ↓ Carn
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