細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)匯總-文庫吧
2025-03-08 12:04 本頁面
【正文】 中， mL 預(yù)熱的50％PEG 混勻，置于30℃水浴中溫浴3－5min；取未融合和融合的血細(xì)胞懸液各1 滴分別滴于載玻片上的兩側(cè)，蓋上蓋玻片。6．利用光學(xué)顯微鏡 (高倍) 以未融合細(xì)胞為對照觀察2 個(gè)靠近細(xì)胞形成融合的過程?！窘Y(jié)果觀察】在高倍鏡下可以看到有兩個(gè)或兩個(gè)以上的雞紅細(xì)胞膜融合在一起，形成一個(gè)同核體細(xì)胞。要注意辨別融合細(xì)胞與重疊的雞紅細(xì)胞。【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】在高倍鏡下可以看到有兩個(gè)或兩個(gè)以上的雞紅細(xì)胞膜融合在一起，形成一個(gè)同核體細(xì)胞。要注意辨別融合細(xì)胞與重疊的雞紅細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)四：線粒體和液泡系的超活染色與觀察【基本原理】線粒體是細(xì)胞內(nèi)一種重要細(xì)胞器，細(xì)胞的各項(xiàng)活動(dòng)所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來提供的?；铙w染色是應(yīng)用無毒或毒性較小的染色劑真實(shí)地顯示活細(xì)胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細(xì)胞生命活動(dòng)的一種染色方法。詹納斯綠 B（Janus green B）是線垃體的專一性活細(xì)胞染色劑，毒性很小，屬于堿性染料，解離后帶正電，由電性吸引堆積在線粒體膜上。線粒體中細(xì)胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)呈藍(lán)綠色，從而使線粒體顯色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被還原，成為無色狀態(tài)。細(xì)胞中的線粒體呈藍(lán)綠色的顆粒。中性紅對液泡系的染色具有專一性，將活細(xì)胞中的液泡系染成紅色?！痉椒ú襟E】1．線粒體的超活染色與觀察1）口腔上皮細(xì)胞線粒體的超活染色：1/5000 詹納斯綠B12 滴，口腔上皮細(xì)胞（牙簽刮?。?，載玻片于37℃恒溫染色1015min，顯微鏡下觀察。2）洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞線粒體的超活染色與觀察：1/5000 詹納斯綠B 溶液12 滴，洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，載玻片于37℃恒溫水浴染色1015min，顯微鏡下觀察。2．小麥（或綠豆）幼根根尖液泡系的中性紅染色觀察小麥（或綠豆）幼苗根尖（12cm）縱切面切片，1/3000 中性紅溶液1 滴染色510min，載玻片于37℃恒溫水浴，蓋上蓋玻片壓扁根尖，顯微鏡下觀察。【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】口腔上皮細(xì)胞的線粒體分布 洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞線粒體分布 植物根尖液泡的中性紅染色實(shí)驗(yàn)五：植物細(xì)胞微絲束的光學(xué)顯微鏡觀察【基本原理】細(xì)胞骨架在通常情況下不穩(wěn)定：如低溫、高壓、餓酸處理等。當(dāng)用適當(dāng)濃度的TritonX100 處理細(xì)胞時(shí)，能溶解質(zhì)膜結(jié)構(gòu)中及細(xì)胞內(nèi)許多蛋白質(zhì)，而細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)卻不被破壞顯得更清晰，M緩沖液洗滌細(xì)胞，可以提高細(xì)胞骨架的穩(wěn)定性，戊二醛固定能較好地保存細(xì)胞骨架成分，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)R250 染色后，可使細(xì)胞骨架蛋白著色，而胞質(zhì)背景著色弱，有利細(xì)胞骨架纖維顯示。微絲、微管和中間纖維都是直徑很小的結(jié)構(gòu)，最大的單根微管才25nm 左右，只能在電鏡下才能觀察到。目前研究細(xì)胞骨架的主要方法是應(yīng)用高壓電鏡或免疫熒光顯微鏡技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)用普通光鏡觀察到細(xì)胞骨架，是因?yàn)楣羌芾w維成束分布、結(jié)構(gòu)經(jīng)染色后，有夸大作用。由于細(xì)胞經(jīng)TritonX100 抽提后剩下的主要是細(xì)胞骨架成分，使得顯現(xiàn)更清晰。細(xì)胞骨架是指細(xì)胞質(zhì)中縱橫交錯(cuò)的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，按組成成分和形態(tài)結(jié)構(gòu)的不同可分為微管、微絲和中間纖維。它們對細(xì)胞形態(tài)的維持、細(xì)胞的生長、運(yùn)動(dòng)、分裂、分化和物質(zhì)運(yùn)輸?shù)绕鹬匾饔?。光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞骨架的形態(tài)學(xué)觀察多用1% Triton X100 處理細(xì)胞，可使細(xì)胞膜溶解，而細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)被保存， 再用考馬斯亮蘭R250 染色，使得胞質(zhì)中細(xì)胞骨架得以清晰顯現(xiàn)?！緦?shí)驗(yàn)用品】1．材料：新鮮洋蔥鱗莖2．試劑 1） M 緩沖液（pH ）各成分終濃度為：50mmol/L 咪唑(MW:)； 50mmol/L KCl(MW:)； 6H2O(MW:)； 1mmol/L EGTA(MW:)；(MW:)； 1mmol/L DTT(MW:)2） 6mmol/L PBS 磷酸緩沖液 （pH ）：KH2PO4 : = 7:33） % NaCl 生理鹽水4） 1% Triton X100(聚乙二醇辛基苯基醚) 溶于 M緩沖液5） 3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL，PBS 88mL6） % 考馬斯亮藍(lán)R250 染液 200mL：考馬斯亮藍(lán)R250 ；甲醇 ；冰乙酸 7mL；3．儀器：光學(xué)顯微鏡，鑷子，剪刀，試管，表面皿，滴管，載玻片，蓋玻片【方法步驟】【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】洋蔥鱗莖外層與內(nèi)層的表皮細(xì)胞比較（放大倍數(shù)1020）附：各種主要試劑的作用1．Triton X100 (聚乙二醇辛基苯基醚)作用：非離子去垢劑；適當(dāng)濃度的Triton X100，可使細(xì)胞膜溶解，而細(xì)胞質(zhì)中的細(xì)胞骨架系統(tǒng)可被保存。2．M－緩沖液和磷酸緩沖液作用：維持細(xì)胞的滲透壓。3．EDTA（乙二胺四乙酸）和EGTA（乙二醇雙醚四乙酸）作用：前者可螯合大部分金屬離子；后者專一性螯合Ca2＋，主要是高濃度的Ca2＋可是微管解聚，因此加入EGTA 來降低Ca2＋的濃度。4．戊二醛作用：良好的固定劑，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)保持它原有狀態(tài)；5．考馬斯亮蘭作用：非專一性結(jié)合蛋白質(zhì)，使蛋白著色（藍(lán)色）。實(shí)驗(yàn)六 植物染色體標(biāo)本的制備與觀察實(shí)驗(yàn)原理：（1）植物根尖生長點(diǎn)與莖生長點(diǎn)，不存在G0期，不斷分裂，所以一般取根尖實(shí)驗(yàn)。（2）秋水仙素處理，能使大量細(xì)胞分裂停留在中期，有助于觀察染色體。（3）低滲溶液使細(xì)胞體積增大，染色體分散，容易觀察計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)步驟：將小麥種子培養(yǎng)在培養(yǎng)在培養(yǎng)皿中，
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