第二章細(xì)胞生物學(xué)實驗技術(shù)-資料下載頁
2025-04-07 04:00本頁面
【正文】 即代表標(biāo)本中細(xì)胞斷裂面處的結(jié)構(gòu)（圖216）。圖216冰凍蝕刻電鏡照片（二）、掃描電子顯微鏡圖217 JEOL掃描電子顯微鏡掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope，SEM，圖21119）于20世紀(jì)60年代問世，用來觀察標(biāo)本的表面結(jié)構(gòu)。其工作原理是用一束極細(xì)的電子束掃描樣品，在樣品表面激發(fā)出次級電子，次級電子的多少與電子束入射角有關(guān)，也就是說與樣品的表面結(jié)構(gòu)有關(guān)，次級電子由探測體收集，并在那里被閃爍器轉(zhuǎn)變?yōu)楣庑盘?，再?jīng)光電倍增管和放大器轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘杹砜刂茻晒馄辽想娮邮膹?qiáng)度，顯示出與電子束同步的掃描圖像。圖像為立體形象，反映了標(biāo)本的表面結(jié)構(gòu)。為了使標(biāo)本表面發(fā)射出次級電子，標(biāo)本在固定、脫水后，要噴涂上一層重金屬微粒，重金屬在電子束的轟擊下發(fā)出次級電子信號。目前掃描電鏡的分辨力為6~10nm。圖218 光學(xué)顯微鏡、TEM、SEM成像原理比較圖219 人類血細(xì)胞SEM照片圖片來自三、掃描隧道顯微鏡掃描隧道顯微鏡（scanning tunneling microscope，STM） 由Binnig等1981年發(fā)明，根據(jù)量子力學(xué)原理中的隧道效應(yīng)而設(shè)計。當(dāng)原子尺度的針尖在不到一個納米的高度上掃描樣品時，此處電子云重疊，外加一電壓（2mV~2V），針尖與樣品之間產(chǎn)生隧道效應(yīng)而有電子逸出，形成隧道電流。電流強(qiáng)度和針尖與樣品間的距離有函數(shù)關(guān)系，當(dāng)探針沿物質(zhì)表面按給定高度掃描時，因樣品表面原子凹凸不平，使探針與物質(zhì)表面間的距離不斷發(fā)生改變，從而引起電流不斷發(fā)生改變。將電流的這種改變圖像化即可顯示出原子水平的凹凸形態(tài)。掃描隧道顯微鏡的分辨率很高，~。它的優(yōu)點是三態(tài)（固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)）物質(zhì)均可進(jìn)行觀察，而普通電鏡只能觀察制作好的固體標(biāo)本。利用掃描隧道顯微鏡直接觀察生物大分子，如DNA、RNA和蛋白質(zhì)等分子的原子布陣，和某些生物結(jié)構(gòu)，如生物膜、細(xì)胞壁等的原子排列。四、顯微操作技術(shù)圖220 尼康NT88NE顯微操作/注射儀 （圖片來自）顯微操作技術(shù)（micromanipulation technique）是指在高倍復(fù)式顯微鏡下，利用顯微操作器（micromanipulator，圖220）進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎操作的一種方法。顯微操作器是用以控制顯微注射針在顯微鏡視野內(nèi)移動的機(jī)械裝置。顯微操作技術(shù)包括細(xì)胞核移植、顯微注射、嵌合體技術(shù)、胚胎移植以及顯微切割等。細(xì)胞核移植技術(shù)已有幾十年的歷史，Gordon等人（1962）對非洲爪蟾進(jìn)行核移植獲得成功。我國著名學(xué)者童第周等在魚類細(xì)胞核移植方面進(jìn)行了許多工作，并取得了豐碩成果。16 / 16
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