生物信息學(xué)中的生物學(xué)、分子生物學(xué)-資料下載頁(yè)
2025-01-16 11:31本頁(yè)面
【正文】 se) ATP 硫酸化酶 (ATP sulfurylase) 熒光素酶(luciferase) 和 三磷酸腺苷雙磷酸酶 (Apyrase) 4 種酶的協(xié)同作用下將引物上每一個(gè) dNTP 的聚合與一次熒光信號(hào)的釋放偶聯(lián)起來(lái)通過(guò)檢測(cè)熒光的釋放和強(qiáng)度達(dá)到實(shí)時(shí)測(cè)定 DNA 序列的目的。 焦磷酸測(cè)序技術(shù) (pyrosequencing)： 2022/2/13 28 焦磷酸測(cè)序技術(shù)的反應(yīng)體系： 反應(yīng)底物、待測(cè)單鏈、測(cè)序引物和 4種酶。 反應(yīng)底物 : 5’磷酰硫酸 (adenosine 5’phosphosulfat，APS)、熒光素 (Luciferin)。 2022/2/13 29 如果發(fā)生堿基配對(duì)，就會(huì)釋放一個(gè)焦磷酸。這個(gè)焦磷酸在 ATP硫酸化酶和螢光素酶的作用下，經(jīng)過(guò)一個(gè)合成反應(yīng)和一個(gè)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，最終將螢光素氧化成氧化螢光素，同時(shí)釋放出光信號(hào)。此反應(yīng)釋放出的光信號(hào)實(shí)時(shí)被儀器配置的高靈敏度 CCD（ Chargecoupled Device） 捕獲到。有一個(gè)堿基和測(cè)序模板進(jìn)行配對(duì)，就會(huì)捕獲到一分子的光信號(hào)；由此一一對(duì)應(yīng)，就可以準(zhǔn)確、快速地確定待測(cè)模板的堿基序列。 2022/2/13 30 2022/2/13 31 ? GS FLX Titanium系統(tǒng)摒棄了傳統(tǒng)的細(xì)菌克隆與挑選，將 DNA打斷成隨機(jī)片段，并尋找到乳液PCR這種方法來(lái)克隆每個(gè)片段。（將 DNA放入油包水的乳液中，這樣就省去了反應(yīng)管，并利用表面活性劑來(lái)維持乳液的熱穩(wěn)定性。） ? 一個(gè)片段 = 一個(gè)磁珠 = 一條讀長(zhǎng) ? One fragment = One bead = One read 454 GS FLX測(cè)序儀 2022/2/13 32 2022/2/13 33 2022/2/13 34 謝謝！
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