微生物的生長第5章新-資料下載頁
2025-01-14 00:09本頁面
【正文】 試管中，大多數(shù)(一般應超過 95%)表現(xiàn)為不生長。 77 ?單細胞 (單孢子 )分離 ? 采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細胞或單個個體進行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)，稱為 單細胞 (單孢子 )分離法 。 ? 單細胞分離法的 難度 與細胞或個體的大小成反比，較大的微生物如藻類、原生動物較容易，個體很小的細菌則較難。 ? 單細胞分離法對操作技術有比較高的要求， 多限于 高度專業(yè)化的科學研究中采用。 78 ?選擇培養(yǎng)分離 如果某種微生物的生長需要是已知的，也可以設計一套特定環(huán)境使之特別適合這種微生物的生長，因而能夠從自然界混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養(yǎng)出來，即使在混雜的微生物群體中這種微生物可能只占少數(shù)。這種通過選擇培養(yǎng)進行微生物純培養(yǎng)分離的技術稱為 選擇培養(yǎng)分離 。可利用選擇培養(yǎng)基進行 直接分離 或 富集培養(yǎng) 。 79 ? 利用選擇培養(yǎng)基進行直接分離 主要根據(jù)待分離微生物的特點選擇不同的培養(yǎng)條件 ,得到純培養(yǎng)物。 ? 富集培養(yǎng) 主要是指利用不同微生物間生命活動特點的不同，制定特定的環(huán)境條件，使僅適應于該條件的微生物旺盛生長，從而使其在群落中的數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離到所需的特定微生物。 富集條件 可據(jù)分離的微生物的特點從物理、化學、生物及綜合多個方面進行選擇，如溫度、 pH、紫外線、高壓、光照、氧氣、營養(yǎng)等等許多方面。 80 ? 二元培養(yǎng)物 ? 只有一種微生物的培養(yǎng)物稱為 純培養(yǎng)物 ，含有二種以上微生物的培養(yǎng)物稱為 混合培養(yǎng)物 ，而如果培養(yǎng)物中只含有二種微生物，而且是有意識地保持二者之間的特定關系的培養(yǎng)物稱為 二元培養(yǎng)物 。例如二元培養(yǎng)物是保存病毒的最有效途徑。對于這些生物，二元培養(yǎng)物是在實驗室控制條件下可能達到的最接近于純培養(yǎng)的培養(yǎng)方法。 81 ?微生物的保藏技術 ? 傳代培養(yǎng)保藏 ? 冷凍保藏 ? 干燥保藏法 82 ? 通過分離純化得到的微生物純培養(yǎng)物，必須通過各種保藏技術使其在一定時間內(nèi) 不死亡 ， 不會被其他微生物污染，不會因發(fā)生變異而丟失重要的生物學性狀， 否則就無法真正保證微生物研究和應用工作的順利進行。 ? 菌種或培養(yǎng)物保藏 是一項最重要的微生物學基礎工作，微生物菌種是珍貴的自然資源，具有重要意義。 83 ?菌種保藏 就是根據(jù)菌種特性及保藏目的的不同，給微生物菌株以特定的條件，使其存活而得以延續(xù)。 ?菌種保藏機構： 中國微生物菌種保藏委員會 (CCCCM)， 中國典型培養(yǎng)物保藏中心 (CCTCC)， 美國典型菌種保藏中心 (ATCC)， 世界菌種保藏聯(lián)合會 (WFGC) 。 84 ?傳代培養(yǎng)保藏 ?常用的有 瓊脂斜面 、 半固體瓊脂柱及 液體培養(yǎng) 等。 ?選擇使用 適宜的培養(yǎng)基 ，并在 規(guī)定的時間內(nèi)進行移種 。 ?傳代培養(yǎng)十分繁瑣，容易 污染 ，特別是會由于菌株的 自發(fā)突變 而導致菌種衰退 ， 使菌株的形態(tài)、生理特性、代謝物的產(chǎn)量等發(fā)生變化 85 ?冷凍保藏 ?使微生物處于冷凍狀態(tài)， 代謝作用停止 以達到保藏的目的。 ?微生物細胞對 低溫敏感 ，可用速凍、快速升溫和添加各種保護劑等手段。 ?液氮保藏或 70℃ 低溫保藏。 ?用 普通冰箱 冷凍保存菌種的效果往往遠低于低溫冰箱，應注意 經(jīng)常檢查保藏物的存活情況，隨時轉種 86 ?干燥保藏法 ?水分對各種生化反應和一切生命活動至關重要，因此，干燥，尤其是深度干燥是微生物保藏技術中另一項經(jīng)常采用的手段。 ?沙土管保存 和 冷凍真空干燥保藏是最常用的二項微生物干燥保藏技術。 87 ?沙土管保存 主要適用于產(chǎn)孢子的微生物 ，如芽孢桿菌、放線菌等。將菌種接種培養(yǎng)，長出大量的孢子，洗下孢子制備孢子懸液，加入無菌的沙土試管中，減壓干燥，抽干水分，最后用石蠟、膠塞等封閉管口，置冰箱保存。此法簡便易行，并可以將微生物保藏較長時間，適合一般實驗室及以放線菌等為菌種的發(fā)酵工廠采用。 88 ?冷凍真空干燥保藏 ? 是將加有保護劑的細胞樣品預先冷凍，經(jīng)真空冰的升華作用除去水分。達到干燥的樣品可在真空或惰性氣體的密閉環(huán)境中置低溫保存，從而 使微生物處于干燥、缺氧及低溫的狀態(tài)，生命活動處于休眠， 可以達到長期保藏的目的。 ? 冷凍真空干燥保藏 是目前使用最普遍，也是最重要的微生物保藏方法，為大多數(shù)專業(yè)的菌種保藏機構均采用 89 抑菌劑 ：能抑制微生物的生長，但不能殺死 殺菌劑 ：能殺死微生物，但不能使其溶解 溶菌劑 ：不但能殺死而且使其溶解 滅菌 ：殺死物體中包括芽孢在內(nèi)的一切微生物 消毒 ：殺死或滅活物體中病原微生物的措施 防腐 ：防止或抑制微生物生長的一種措施 無菌 ：不含有活的微生物 化療 ：利用具有選擇毒性的物質（化學物質）殺死感染微生物而對宿主無害 滅菌技術 ：防止微生物進入機體或物體的技術 有 關 術 語 90 干熱滅菌 焚燒法：最徹底的滅菌法 燒灼法：用火焰燒，如接種棒 干燥法： 160 ℃ 度， 2h 濕熱滅菌 煮沸法： 100℃ ，大于 5min 間歇滅菌法： 80~100 ℃,15~60min, 重復 3次 巴氏滅菌法：殺無芽孢的病原菌 72 ℃ ， 5s 高壓蒸氣滅菌法： 121 ℃ ， 15~20min 高溫滅菌 高 溫 滅 菌
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