微生物的生長(zhǎng)第5章新-資料下載頁(yè)
2025-01-14 00:09本頁(yè)面
【正文】 試管中，大多數(shù)(一般應(yīng)超過(guò) 95%)表現(xiàn)為不生長(zhǎng)。 77 ?單細(xì)胞 (單孢子 )分離 ? 采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個(gè)細(xì)胞或單個(gè)個(gè)體進(jìn)行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)，稱(chēng)為 單細(xì)胞 (單孢子 )分離法 。 ? 單細(xì)胞分離法的 難度 與細(xì)胞或個(gè)體的大小成反比，較大的微生物如藻類(lèi)、原生動(dòng)物較容易，個(gè)體很小的細(xì)菌則較難。 ? 單細(xì)胞分離法對(duì)操作技術(shù)有比較高的要求， 多限于 高度專(zhuān)業(yè)化的科學(xué)研究中采用。 78 ?選擇培養(yǎng)分離 如果某種微生物的生長(zhǎng)需要是已知的，也可以設(shè)計(jì)一套特定環(huán)境使之特別適合這種微生物的生長(zhǎng)，因而能夠從自然界混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養(yǎng)出來(lái)，即使在混雜的微生物群體中這種微生物可能只占少數(shù)。這種通過(guò)選擇培養(yǎng)進(jìn)行微生物純培養(yǎng)分離的技術(shù)稱(chēng)為 選擇培養(yǎng)分離 ?？衫眠x擇培養(yǎng)基進(jìn)行 直接分離 或 富集培養(yǎng) 。 79 ? 利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離 主要根據(jù)待分離微生物的特點(diǎn)選擇不同的培養(yǎng)條件 ,得到純培養(yǎng)物。 ? 富集培養(yǎng) 主要是指利用不同微生物間生命活動(dòng)特點(diǎn)的不同，制定特定的環(huán)境條件，使僅適應(yīng)于該條件的微生物旺盛生長(zhǎng)，從而使其在群落中的數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離到所需的特定微生物。 富集條件 可據(jù)分離的微生物的特點(diǎn)從物理、化學(xué)、生物及綜合多個(gè)方面進(jìn)行選擇，如溫度、 pH、紫外線(xiàn)、高壓、光照、氧氣、營(yíng)養(yǎng)等等許多方面。 80 ? 二元培養(yǎng)物 ? 只有一種微生物的培養(yǎng)物稱(chēng)為 純培養(yǎng)物 ，含有二種以上微生物的培養(yǎng)物稱(chēng)為 混合培養(yǎng)物 ，而如果培養(yǎng)物中只含有二種微生物，而且是有意識(shí)地保持二者之間的特定關(guān)系的培養(yǎng)物稱(chēng)為 二元培養(yǎng)物 。例如二元培養(yǎng)物是保存病毒的最有效途徑。對(duì)于這些生物，二元培養(yǎng)物是在實(shí)驗(yàn)室控制條件下可能達(dá)到的最接近于純培養(yǎng)的培養(yǎng)方法。 81 ?微生物的保藏技術(shù) ? 傳代培養(yǎng)保藏 ? 冷凍保藏 ? 干燥保藏法 82 ? 通過(guò)分離純化得到的微生物純培養(yǎng)物，必須通過(guò)各種保藏技術(shù)使其在一定時(shí)間內(nèi) 不死亡 ， 不會(huì)被其他微生物污染，不會(huì)因發(fā)生變異而丟失重要的生物學(xué)性狀， 否則就無(wú)法真正保證微生物研究和應(yīng)用工作的順利進(jìn)行。 ? 菌種或培養(yǎng)物保藏 是一項(xiàng)最重要的微生物學(xué)基礎(chǔ)工作，微生物菌種是珍貴的自然資源，具有重要意義。 83 ?菌種保藏 就是根據(jù)菌種特性及保藏目的的不同，給微生物菌株以特定的條件，使其存活而得以延續(xù)。 ?菌種保藏機(jī)構(gòu)： 中國(guó)微生物菌種保藏委員會(huì) (CCCCM)， 中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心 (CCTCC)， 美國(guó)典型菌種保藏中心 (ATCC)， 世界菌種保藏聯(lián)合會(huì) (WFGC) 。 84 ?傳代培養(yǎng)保藏 ?常用的有 瓊脂斜面 、 半固體瓊脂柱及 液體培養(yǎng) 等。 ?選擇使用 適宜的培養(yǎng)基 ，并在 規(guī)定的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行移種 。 ?傳代培養(yǎng)十分繁瑣，容易 污染 ，特別是會(huì)由于菌株的 自發(fā)突變 而導(dǎo)致菌種衰退 ， 使菌株的形態(tài)、生理特性、代謝物的產(chǎn)量等發(fā)生變化 85 ?冷凍保藏 ?使微生物處于冷凍狀態(tài)， 代謝作用停止 以達(dá)到保藏的目的。 ?微生物細(xì)胞對(duì) 低溫敏感 ，可用速凍、快速升溫和添加各種保護(hù)劑等手段。 ?液氮保藏或 70℃ 低溫保藏。 ?用 普通冰箱 冷凍保存菌種的效果往往遠(yuǎn)低于低溫冰箱，應(yīng)注意 經(jīng)常檢查保藏物的存活情況，隨時(shí)轉(zhuǎn)種 86 ?干燥保藏法 ?水分對(duì)各種生化反應(yīng)和一切生命活動(dòng)至關(guān)重要，因此，干燥，尤其是深度干燥是微生物保藏技術(shù)中另一項(xiàng)經(jīng)常采用的手段。 ?沙土管保存 和 冷凍真空干燥保藏是最常用的二項(xiàng)微生物干燥保藏技術(shù)。 87 ?沙土管保存 主要適用于產(chǎn)孢子的微生物 ，如芽孢桿菌、放線(xiàn)菌等。將菌種接種培養(yǎng)，長(zhǎng)出大量的孢子，洗下孢子制備孢子懸液，加入無(wú)菌的沙土試管中，減壓干燥，抽干水分，最后用石蠟、膠塞等封閉管口，置冰箱保存。此法簡(jiǎn)便易行，并可以將微生物保藏較長(zhǎng)時(shí)間，適合一般實(shí)驗(yàn)室及以放線(xiàn)菌等為菌種的發(fā)酵工廠(chǎng)采用。 88 ?冷凍真空干燥保藏 ? 是將加有保護(hù)劑的細(xì)胞樣品預(yù)先冷凍，經(jīng)真空冰的升華作用除去水分。達(dá)到干燥的樣品可在真空或惰性氣體的密閉環(huán)境中置低溫保存，從而 使微生物處于干燥、缺氧及低溫的狀態(tài)，生命活動(dòng)處于休眠， 可以達(dá)到長(zhǎng)期保藏的目的。 ? 冷凍真空干燥保藏 是目前使用最普遍，也是最重要的微生物保藏方法，為大多數(shù)專(zhuān)業(yè)的菌種保藏機(jī)構(gòu)均采用 89 抑菌劑 ：能抑制微生物的生長(zhǎng)，但不能殺死 殺菌劑 ：能殺死微生物，但不能使其溶解 溶菌劑 ：不但能殺死而且使其溶解 滅菌 ：殺死物體中包括芽孢在內(nèi)的一切微生物 消毒 ：殺死或滅活物體中病原微生物的措施 防腐 ：防止或抑制微生物生長(zhǎng)的一種措施 無(wú)菌 ：不含有活的微生物 化療 ：利用具有選擇毒性的物質(zhì)（化學(xué)物質(zhì)）殺死感染微生物而對(duì)宿主無(wú)害 滅菌技術(shù) ：防止微生物進(jìn)入機(jī)體或物體的技術(shù) 有 關(guān) 術(shù) 語(yǔ) 90 干熱滅菌 焚燒法：最徹底的滅菌法 燒灼法：用火焰燒，如接種棒 干燥法： 160 ℃ 度， 2h 濕熱滅菌 煮沸法： 100℃ ，大于 5min 間歇滅菌法： 80~100 ℃,15~60min, 重復(fù) 3次 巴氏滅菌法：殺無(wú)芽孢的病原菌 72 ℃ ， 5s 高壓蒸氣滅菌法： 121 ℃ ， 15~20min 高溫滅菌 高 溫 滅 菌
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