復(fù)件微生物檢測第5章-資料下載頁
2025-01-13 18:46本頁面
【正文】 glucuronidase,GUD ）。利用目標(biāo)菌的限定酶作用的底物 4甲基傘形酮 ?D葡萄糖酸苷（ 4Methylumbelliferyl ?DGlucuronide, MUG） 被 ?葡萄糖醛酸苷酶分解，在366nm紫外燈下產(chǎn)生藍(lán)白色熒光作為指示系統(tǒng)來鑒定目標(biāo)菌。 但漏檢率為 6%，因此采用與吲哚反應(yīng)相結(jié)合，輔以 IMViC試驗(yàn)，在理論上檢出率可達(dá) 99%。 2448h可報告結(jié)果。 供試品 供試液 BL增菌液 MacC EMB 疑似菌落純培養(yǎng) 乳糖發(fā)酵 IMViC 報告 MUG蛋白胨 MUG+， I+ MUG， I MUG+， I MUG， I+ 革蘭染色 報告 ? 配制 MUG培養(yǎng)基時 ， 務(wù)必校正 pH值 ， pH不得過 ， 否則 MUG管自身發(fā)熒光 。 ? 培養(yǎng)時間一般 4h， 24h， 可延長 48h。 ? 結(jié)果觀察時要將陽性對照管 、 陰性對照管和供試品的 MUG管同時在 366nm紫外燈下觀察 ， 如陽性管熒光強(qiáng)烈時 ， 可移去 ，以免影響另兩管的觀測 。 四、腸毒素檢驗(yàn) ? ：將試驗(yàn)菌株和對照菌株分別接于， 37℃ 振蕩培養(yǎng)過夜。加入適量多粘菌素， 37℃ 培養(yǎng) 1h， 4000r/min離心 15min， 取上清，加入適量硫柳汞， 4℃ 保存待用。 ? （ enzyme linked immunosorbent assay） 檢測LT和 ST 間接法 雙抗體夾心法檢測LT 結(jié)果判定：以酶標(biāo)儀在 492nm下測定吸光度 OD值 ， 待測樣本 OD值大于陰性對照 3倍以上為陽性 。 或目測為橘黃色 。 抗原競爭法檢測 ST 抗原競爭法測 ST 結(jié)果判定： 以酶標(biāo)儀在 492nm下測定吸光度 OD值。 陰性對照 OD值 待測樣本 OD值 陰性對照 OD值 目測無色或明顯淡于陰性對照為陽性。 100%≥50% 3 反向乳膠凝集法 （ resersed passive latex agglutination, RPLA） 包被了抗體的乳膠粒子 毒素（抗原） 檢樣 大腸菌群 MPN 25g+營養(yǎng)肉湯 嚴(yán)重污染 乳糖發(fā)酵陽性管 菌落 35個，氧化酶陰性 EMB Macc 腸道增菌肉湯 TSI、 吲哚、尿素酶、 KCN、 LYS、 動力 TSI底層 +、 H2S、 尿素酶 、 KCN 血清學(xué)試驗(yàn) ETEC+ EPEC+、 EHEC+、 O157H EIEC+ 非左 非左 非大腸埃希菌 腸毒素 + 吲哚 +、 LYS 、 動力 、 O124/+ 產(chǎn)腸毒素大腸埃希菌 致病性或出血性大腸埃希菌 侵襲性大腸埃希菌 非致瀉大腸埃希菌 五 檢測程序圖 快速檢測 綠藍(lán)色菌落為 O157 ? 紅色菌落為大腸桿菌。 ? 藍(lán)色菌落為其它大腸菌群
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