【正文】 His： [（ 1） Ala、 Ser、 Phe 和 Leu 以及 Arg 和 His 向負極， Asp 移向正極；（ 2）電泳時，具有相同電荷的較大分子比較小分子移動得慢，因為電荷 /質(zhì)量之比較小，因而引起每單位質(zhì)量遷移的驅(qū)動力也較小。（ 3） Glu移向正極， Lys移向負極 ,Val、 Ala和 Thr則留在原點。 ] ？為什么？ 答：凝膠過濾層析中每一個凝膠珠相當(dāng)于一個分子篩，故小分子所經(jīng)過的路徑長，落在大分子后面；而凝膠電泳中整塊膠板相當(dāng)于一個分子篩，故大 分子受到的阻力大而遷移慢，落在小分子后面。 （ BSA）稀釋液，每一種溶液取 進行 Bradford 法測定。對適當(dāng)?shù)目瞻诇y定 595nm波長處的光吸收（ A595）。結(jié)果如下表所示： 所有試卷資料免費下載 corundum 整理 13 BSA濃度（ mg L1） A595 BSA 濃度對 A595作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。 （ ）測得的 A595為 。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線算出 中的蛋白質(zhì)濃度。 [] 解：標(biāo)準(zhǔn)曲線略。由標(biāo)準(zhǔn)曲線可知，當(dāng) A595為 ， BSA 濃度為 。 第八章 酶通論 ？ 答：酶是細胞所產(chǎn)生的，受多種因素調(diào)節(jié)控制的具有催化能力的生物催化劑，與一般非生物催化劑相比較有以下幾個特點： 酶易失活； 具有很高的催化效率； 具有高度專一性； 酶活性受到調(diào)節(jié)和控制。 ？酶的專一性有哪些？如何解釋酶作用的專一性？研究酶的專一性有何意義？ 答：酶的專一性是指酶對催化的反應(yīng)和反映物有嚴(yán) 格的選擇性。酶的專一性分為兩種類型： 結(jié)構(gòu)專一性，包括絕對專一性、相對專一性（族專一性或基團專一性、鍵專一性）； 立體異構(gòu)專一性，包括旋光異構(gòu)專一性、幾何異構(gòu)專一性。 通過對酶結(jié)構(gòu)與功能的研究，確信酶與底物作用的專一性是由于酶與底物分子的結(jié)構(gòu)互補，誘導(dǎo)契合，通過分子的相互識別而產(chǎn)生的。 對酶的專一性研究具有重要的生物學(xué)意義。它有利于闡明生物體內(nèi)有序的代謝過程，酶的作用機制等。 ，試說明之。 答：酶的調(diào)節(jié)和控制有多種方式，主要有： （ 1） 調(diào)節(jié)酶的濃度：主要有 2種方式：誘導(dǎo)或抑制酶的合 成；調(diào)節(jié)酶的降解； （ 2） 通過激素調(diào)節(jié)酶活性、激素通過與細胞膜或細胞內(nèi)受體相結(jié)合而引起一系列生物學(xué)效應(yīng)，以此來調(diào)節(jié)酶活性； （ 3） 反饋抑制調(diào)節(jié)酶活性：許多小分子物質(zhì)的合成是由一連串的反應(yīng)組成的，催化此物質(zhì)合成的第一步的酶，往往被他們終端產(chǎn)物抑制； （ 4） 抑制劑和激活劑對酶活性的調(diào)節(jié)：酶受大分子抑制劑或小分子物質(zhì)抑制，從而影響酶活性； （ 5） 其他調(diào)節(jié)方式：通過別構(gòu)酶、酶原的激活、酶的可逆共價修飾和同工酶來調(diào)節(jié)酶活性。 ４ .輔基和輔酶有何不同？在酶催化反應(yīng)種起什么作用？ 答：輔酶通常指與脫輔酶結(jié)合比較松弛的小分子有機物質(zhì)。通過透析方 法可以除去，如輔酶Ⅰ和輔酶Ⅱ等。輔基是以共價鍵和脫輔酶結(jié)合，不能通過透析除去，需要經(jīng)過一定的化學(xué)處理才能與蛋白分開，如細胞色素氧化酶中的鐵卟啉，丙酮氧化酶中的黃素腺嘌呤二核苷酸（ FAD）都屬于輔基。它們的區(qū)別只在于它們與脫輔酶結(jié)合的牢固程度不同。輔酶、輔基在酶催化反應(yīng)中通常是起著電子、原子或某些化學(xué)基團的傳遞作用。 ５ .酶分哪幾大類？舉例說明酶的國際系統(tǒng)命名法及酶的編號。 答：國際酶學(xué)委員會根據(jù)酶所催化反應(yīng)的類型，把酶分為６大類：即氧化還原酶類、轉(zhuǎn)移酶類、水解 所有試卷資料免費下載 corundum 整理 14 酶類、裂合酶類、異構(gòu)酶類和連接酶類。分別利用 6來表示。例如： 酶，作用于 CHOH 基團，受體是分子氧。根據(jù)底物中別所用的基團或鍵的特點將每一大類分為若干亞類，每一個亞類又按順序變成 3??等數(shù)字；每一個亞基可再分亞亞類，仍用 3??編號，每一個酶的分類編號由 4 個數(shù)字組成，數(shù)字間由由“”隔開。第一個數(shù)字指明該酶屬于哪一個大類；第二個數(shù)字指明酶屬于哪一個亞類；第三個數(shù)字指出該酶屬于一個亞亞類；第四個數(shù)字則表明該酶在亞亞類中的排號。編號之間冠以 EC（ Enzyme Commision）。 和比活力？測定酶活力應(yīng)注意什么？為什么測定酶活力時以測定初速率為宜，并且底物濃度遠遠大于酶濃度？ 答：酶活力指酶催化某一化學(xué)反應(yīng)的能力，其大小可用在一定條件下所催化的某一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速率來表示；酶的比活力代表酶的純度，根據(jù)國際酶學(xué)委員會的規(guī)定比活力用每 mg 蛋白質(zhì)所含的酶活力單位數(shù)表示。 酶的催化作用受測定環(huán)境的影響，因此測定酶活力要在最適條件下進行，即最適溫度、最適 pH、最適底物濃度和最適緩沖離子強度等。只有在最適條件下測定才能真實反映酶活力的大小。 隨時間的延長，酶促反應(yīng)中底物濃度降低，產(chǎn)物濃度增加，加 速逆反應(yīng)的進行，產(chǎn)物對酶抑制或激活作用以及隨時間的延長引起酶本身部分分子失活等，酶促反應(yīng)速率降低，因此測定活力，應(yīng)測定酶促反應(yīng)的初速率，從而避免上述種種復(fù)雜因素對反應(yīng)速率的影響。 底物濃度太低時， 5%以下的底物濃度變化實驗上不易測準(zhǔn)，所以在測定酶的活力時，往往使底物濃度足夠大，這樣整個酶反應(yīng)對底物來說是零級反應(yīng)，而對酶來說卻是一級反應(yīng)，這樣測得的速率就比較可靠地反映酶的含量。 ？它們的發(fā)現(xiàn)有什么重要意義？ 答：具有催化功能的 RNA叫核酶。它的發(fā)現(xiàn)，表明 RNA 是一種既能攜帶遺傳信息又有 生物催化功能的生物分子。因此很可能 RNA 早于蛋白質(zhì)和 DNA，是生命起源中首先出現(xiàn)的生物大分子，而一些有酶活性的內(nèi)含子可能是生物進化過程中殘存的分子“化石”。酶 RNA 的發(fā)現(xiàn)，提出了生物大分子和生命起源的新概念，無疑促進對生物進化和生命起源的研究。 抗體酶是 20 實際 80年代后期才出現(xiàn)的一種具有催化能力的蛋白質(zhì)，其本質(zhì)上是免疫球蛋白，但是在易變區(qū)被賦予了酶的屬性，所以又稱“催化性抗體”，抗體酶的發(fā)現(xiàn)，不僅為酶的過渡態(tài)理論提供了有力的實驗證據(jù)，而且抗體酶將會得到廣泛的應(yīng)用。 ： （ 1） 生物酶工程：酶學(xué)和 以 DNA 重組技術(shù)為主的現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物。 （ 2） 固定化酶：將水溶性酶用物理或化學(xué)方法處理，使之成為不溶于水的、但仍具有酶活性的狀態(tài)。 （ 3） 活化能：在一定溫度下 1mol底物全部進入活化狀態(tài)所需要的自由能（ kJ/mol） （ 4） 酶的轉(zhuǎn)化數(shù)：在一定條件下每秒鐘每個酶分子轉(zhuǎn)換底物的分子數(shù)。 （ 5） 寡聚酶：由兩個以上亞基組成的酶。 （ 6） Kat單位：在最適條件下，每秒鐘催化 1mol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量，為 Kat單位。 （ 7） 酶偶聯(lián)分析法：由于分光光度法有其獨特的優(yōu)點，因此把一些原來沒有光吸收變化的酶反應(yīng)，可以通過與一些能引起光吸收變 化的酶反映偶聯(lián)使第一個酶反應(yīng)的產(chǎn)物轉(zhuǎn)變成第二個酶的具有光吸收變化的產(chǎn)物來進行測量。 （ 8） 誘導(dǎo)契合說： 1958年 Koshland提出，當(dāng)酶分子與底物分子接近時，酶蛋白受底物分子誘導(dǎo)，其構(gòu)象發(fā)生有利于底物結(jié)合的變化，酶與底物在此基礎(chǔ)上互補契合進行反應(yīng)。 （ 9） 反饋抑制：許多小分子物質(zhì)的合成是由一聯(lián)串的反應(yīng)組成的，催化此物質(zhì)生成的第一步的酶，往往被它們終端產(chǎn)物抑制。這種抑制叫反饋抑制。 （ 10） 多酶復(fù)合體：由幾種酶靠非共價鍵彼此嵌合而成。 所有試卷資料免費下載 corundum 整理 15 AgNO3對在 10ml 含有 ，需用 mol AgNO3，求該酶的最低相對分子質(zhì)量。 解： Mr=10 103/ 106=29240Da g 純酶（ Mr:92 103）在最適條件下，催化反應(yīng)速率為 mol/min，試計算：（ 1）酶的比活力。[500U/mg]（ 2）轉(zhuǎn)換數(shù)。 [] 解：（ 1）比活力 = mol/min/1μ g=500U/mg （ 2）轉(zhuǎn)換數(shù) =247。 [1/（ 92 103） ]= 40單位的某種酶，其轉(zhuǎn)換數(shù)為 6 104min1，試計算 該酶在細胞內(nèi)濃度（假設(shè)新鮮組織含水 80%，并且全部在細胞內(nèi)）。 [ 107 mol/L] 解： [106/（ 6 104)] 40247。 [（ 1 80%） /103]= 107 mol/L ，其相對分子質(zhì)量為 120 103，由 6個相同亞基組成。純酶的 Vmax為 2800U/mg 酶。它的一個活力單位規(guī)定為：在標(biāo)準(zhǔn)測定條件下， 37℃、 15min內(nèi)水解 10μ mol焦磷酸所需要的酶量。問：（ 1）每 mg酶在每秒鐘內(nèi)水解多少 mol 底物？ [ 105mol]。（ 2） 每 mg酶中有多少 mol的活性部位（假設(shè)每個亞基上有一個活性部位）？ [5 108mol活性中心 ]。（ 3）酶的轉(zhuǎn)換數(shù)是多少？ [622s1或 622mol焦磷酸 /（ s mol）酶活性中心 ] 解：（ 1） 2800 [（ 10 106） /（ 15 60） ]= 105 mol （ 2）（ 1 103） /（ 120 103） 6=5 108 mol （ 3） {（ 105） /[（ 1 103） /（ 120 103） ]}/6=622 25mg 蛋白酶粉配制成 25ml 酶溶液，從中取出 酶液，以酪蛋白為底物，用 Folin酚比色法測定酶活力，得知每小時產(chǎn)生 1500μ g 酪氨酸。另取 2ml 酶液，用凱氏定氮法測得蛋白氮為 ，若以每分鐘產(chǎn)生 1μ g 酪氨酸的酶量為 1 個活力單位計算，根據(jù)以上數(shù)據(jù)，求出：（ 1） 1ml 酶液中所含蛋白質(zhì)量及活力單位。 [ 蛋白質(zhì)， 250U]（ 2）比活力。 [400U/mg 蛋白質(zhì) ]（ 3） 1g 酶制劑的總蛋白含量及總活力。 [， 105U] 解：（ 1）（ ） /（ 2 25/25） = （ 1500/60） /（ 25/25） =250U （ 2） 250/=400U/mg （ 3） [（ 1 25/25） ] 103= 1