生物化學核酸生物化學-資料下載頁
2025-01-18 02:15本頁面
【正文】 現象稱為減色效應。 六、分子生物學技術 （一）分子雜交與探針技術 概念： 1） 分子雜交（ hybrization): 在退火條件下，不同來源的 DNA互補區(qū)形成氫鍵，或 DNA單鏈和 RNA鏈的互補區(qū)形成 DNARNA雜合雙鏈的過程 。 DNADNA： DNARNA: 分子生物學技術 核酸的雜交 2)探針（ probe) 用放射性同位素或熒光標記的 DNA或 RNA片段 . 確診病人細胞中提取的 DNA； 病毒 DNA ； 腫瘤組織提取的 DNA。 分子生物學技術 3） Southern印跡法 分子生物學技術 用于檢測 DNA 方法：如圖 Northern 印跡法 ： 用于檢測 RNA Northern印跡法：將電泳分離后的 RNA吸印到纖維素膜上再進行分子雜交。 4）聚合酶鏈式反應（ polymeerase chain reaction, PCR) ? 聚合酶鏈式反應 （ PCR） ?每一輪聚合酶鏈式反應可使目的基因片段增加一倍 ?30輪循環(huán)可獲得 —— 230（ 109)個基因片段 應用： ? 廣泛用于克隆、測序、產生特異突變、醫(yī)學診斷和法醫(yī) . 核酸分子的核苷酸序列分析是以 純品核酸 為材料，經水解，測定核苷酸組成及比例。先以 外切酶 確定 5’或 3’末端核苷酸，再以 內切酶 將核酸鏈分為若干寡核苷酸段，分段測定核苷酸組成、比例和序列。最后將核苷酸序列的各寡核苷酸重疊，確定整個核酸分子的核苷酸序列。 (五 ) 核酸序列分析 DNA酶法測序 ? 1977年 sanger發(fā)明 末端終止法測定 DNA序列。 ? 根據 sanger測序法，現在已經有各種 DNA自動測序儀， DNA測序速度大大加快 HGP得以提前完成 DNA酶法測序 DNA酶法測序 平行進行四組反應，每組反應均使用 相同的模板 ，相同的引物 以及 四種脫氧核苷酸 ；并在四組反應中各加入適量的 四種之一的雙脫氧核苷酸 ，使其隨機地接入 DNA鏈中，使鏈合成終止，產生相應的四組具有特定長度的、不同長短的 DNA鏈。這四組 DNA鏈再經過聚丙烯酸胺凝膠電泳按鏈的長短分離開，經過放射自顯影顯示區(qū)帶，就可以直接讀出被測 DNA的核苷酸序列 , DNA酶法測序 DNA酶法測序 本章總結 ? 核苷：核苷酸： cAMP：磷酸二脂鍵：脫氧核糖核酸（ DNA）： 核糖核酸（ RNA）： 核糖體核糖核酸（ rRNA）：信使核糖核酸(mRNA)：轉移核糖核酸（ tRNA）：堿基對：查蓋夫定律（ Chargaff’s rules）： 大溝和小溝： DNA超螺旋： DNA變性：退火：熔解溫度（ Tm）：增色效應：減色效應 . ? 核酸的化學結構： 堿基、核苷、核苷酸。 ? DNA的結構： DNA的一級結構、二級結構，RNA的結構： RNA的類型和結構特點， tRNA 、mRNA、 rRNA的結構和功能。 ? 核酸的性質： 解離性質、水解性質、光吸收性質、沉降特性，變性、復性及雜交。 ? 核酸一級結構的測定、 研究技術 、核酸的分離純化 . 重點 中、英文專業(yè)詞匯： ? nucleic acid核酸； purine嘌呤；deoxyribonucleic acid(DNA)脫氧核糖核酸；pyrimidine嘧啶； ribonucleic acid(RNA)核糖核酸； adenine(A)腺嘌呤； base堿基； guanine(G)鳥嘌呤； nudeotide核苷酸； cytosine(C)胞嘧啶；nucleoside核苷； uracil(U)尿嘧啶； thymine(T)胸腺嘧啶； base pair堿基對； phosphodiester linkage磷酸二酯鍵； nucleosome核小體；ribosome核糖體； hybridization雜交； geic code遺傳密碼； double helix雙螺旋； supercoil超螺旋； probe探針； ribosomal RNA(rRNA)核糖體 RNA； transfer RNA(tRNA)轉運 RNA； messenger RNA(mRNA)信使 RNA ? 1． DNA的 Tm值較高是由于下列哪組核苷酸含量較高所致： ? A． G+A ? B． C+G ? C． A+T ? D． C+T ? E． A+C ? 2．絕大多數真核生物 mRNA5′ 端有 ? A． PolyA ? B．終止密碼 ? C．帽子結構 ? D．啟動子 ? E． SD序列 ? 3． hnRNA是下列哪種 RNA的前體？ ? A． tRNA ? B． rRNA ? C． mRNA ? D． snRNA ? E． snoRNA ? 4．核酸對紫外線的最大吸收峰在哪一波長附近 ? A． 280nm ? B． 260nm ? C． 200nm ? D． 340nm ? E． 220nm ? 5．下列哪種堿基只存在于 RNA而不存在于 DNA： ? A．尿嘧啶 ? B．腺嘌呤 ? C．胞嘧啶 ? D．鳥嘌呤 ? E．胸腺嘧啶 ? 6． DNA變性是指： ? A．分子中磷酸二酯鍵斷裂 ? B．多核苷酸鏈解聚 ? C． DNA分子由超螺旋 → 雙螺旋 ? D．互補堿基之間氫鍵斷裂 ? E． DNA分子中堿基丟失 作業(yè) 比較 DNA、 RNA在化學組成、分子結構和生理功能上的特點。 DNA雙螺旋結構的特點？
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