生物化學(xué)第五章核酸-資料下載頁
2025-01-16 14:01本頁面
【正文】 基、核苷、核苷酸和核酸在 250~290nm的紫外波段有強(qiáng)烈的光吸收 ? 最大吸收峰： 260nm 四、核酸的變性、復(fù)性和分子雜交 ?變性 ：是指核酸雙螺旋堿基對(duì)的氫鍵斷裂，雙鏈轉(zhuǎn)變成單鏈，從而使核酸的天然構(gòu)象和性質(zhì)發(fā)生改變。 ?變性的實(shí)質(zhì)： 二級(jí)結(jié)構(gòu)改變（氫鍵斷裂），一級(jí)結(jié)構(gòu)不變（共價(jià)鍵不斷裂）。 ?引起變性的因素：加熱、酸、堿、尿素、有機(jī)溶劑 ?變性的性質(zhì)變化：增色效應(yīng)、粘度降低、生物活性部分和全部喪失。 ?增色效應(yīng) ：由于核酸變性而使紫外吸收增加的現(xiàn)象。 ?與 DNA的 Tm值有關(guān)的因素 ? DNA的均一性 均 一性越高，變性的溫度 范圍越窄。 ? GC含量： 與 Tm成正比 Tm = + （ G+C） G+C =（ ） ? 介質(zhì)中的離子強(qiáng)度 離子強(qiáng)度低 DNA的 Tm值 低，變性過程發(fā)生在較寬 溫度范圍內(nèi)。 ?熔解溫度（ Tm） ：通常把加熱變性使 DNA的雙螺旋失去一半時(shí)的溫度稱為 DNA的熔解溫度。 ? 復(fù)性 ：熱變性的 DNA，在緩慢冷卻后，分開的雙鏈又可恢復(fù)為雙螺旋結(jié)構(gòu)的過程。 ? 影響復(fù)性速度的因素： DNA片段越大，復(fù)性越慢； 鹽濃度越高，復(fù)性越快 DNA濃度越大，復(fù)性越快。 ? 減色效應(yīng) ：核酸復(fù)性時(shí)，紫外吸收降低，由于核酸復(fù)性而引起紫外吸收降低的現(xiàn)象稱減色效應(yīng)。 熱變性 DNA在緩慢冷卻時(shí)可以復(fù)性，快速冷卻不能復(fù)性。 核酸的雜交： 熱變性的 DNA單鏈，在復(fù)性時(shí)并不一定與同源 DNA互補(bǔ)鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，它也可以與在某些區(qū)域有互補(bǔ)序列的異源 DNA單鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。 瓊脂糖電泳用于大片段 DNA的分離，精度低，但分離范圍廣 影響遷移率的因素： ①核酸分子的大小，遷移率與分子量的對(duì)數(shù)成反比 ② 凝膠濃度 濃度大，孔徑越小。 ③ DNA的構(gòu)象，超螺旋最快，線形其次，環(huán)形最慢。 ④ 電壓，不大于 5V/cm 染色： 核酸的凝膠電泳 本章重點(diǎn)掌握的內(nèi)容 ? 基本知識(shí)：基礎(chǔ)性的框架知識(shí) ? 核酸的結(jié)構(gòu)： DNA、 tRNA和 mRNA ? 核酸的性質(zhì)
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